pgex载体

pGEX_vector_map-表达载体

GE Healthcare

pGEX vectors, GST Gene Fusion System

Map of the glutathione S-transferase fusion vectors showing reading frames and main features. Even though stop codons in all three frames are not depicted in this map, all thirteen vectors have stop codons in all three frames downstream from the multiple cloning site.

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pGEX-1λT EcoRI/BAP 5 µg 28-9546-56pGEX-2T 25 µg 28-9546-53pGEX-2TK 25 µg 28-9546-46pGEX-3X 25 µg 28-9546-54pGEX-4T-1 25 µg

有意义

安徽农业科学,JournalofAnhuiAgri.Sci.2007,35(30):9467-9469　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　孙红忠　责任校对　李洪

大肠杆菌γ2ggt原核表达载体pGEX24T21/γ2ggt的构建及其蛋白表达

胥俊峰,单建华,赵宁伟,殷志敏　(南京师范大学生命科学学院,江苏南京210046)

摘要　构建大肠杆菌γ2谷氨酰转肽酶原核表达载体pGEX24T21/γ2ggt及表达与鉴定目的蛋白,为进一步利用该酶催化合成茶氨酸等目的

α总DNA为模板,用PCR法在γ产物奠定了基础。以大肠杆菌DH52ggt编码序列上下游引入酶切位点并扩增出γ2谷氨酰转肽酶基因;将

γ2ggt编码序列克隆入原核表达载体pGEX24T21的相应酶切位点;用PCR鉴定重组质粒pGEX24T21/γ2ggt,并对插入基因片断测序;重组质粒pGEX24T21/γ2ggt转化大肠杆菌BL21(DE3),经乳糖诱导后用SDS2PAGE分析表达产物,并经Westernblot鉴定。获得大肠杆菌γ2谷氨酰转肽酶基因,并成功构建到原核表达载体pGEX24T21上,转化有pGEX24T21/γ2ggt工程菌BL21(DE3)经1g/L乳糖诱导1h

GE Healthcare

Restriction sites for pGEX-2T

The following restriction site table was compiled using DNASIS software for sequence analysis. The enzymes chosen are those which we believe to have been commercially available in June 1992.

The vector pGEX-2T was not tested with each enzyme and therefore the accuracy of the table cannot be guaranteed. Please contact your local GE Healthcare subsidiary if a discrepancy is identi?ed.

Please note that enzymes with nonpalindromic recognition sequences are listed twice. You must combine b

一、目的基因的a(4.2k) PCR

1、PCR体系（引物ath-a-4.2k-F ath-a-4.2k-R 酶 fusion聚合酶 体积单位 μ l） DNA fusion 5*fusionHF 2.5mM F R ddH2O Buffer dNTP 2 *3 0.25 0.75 4 12 2 6 0.5 1.5 0.5 1.5 10.75 32.75 totle 20 60 98°C 30s 98°C 15s 56°C 30s 72°C 4min30s 72°C10min 16°C∝ 30cycle

（注：聚合酶说明：fusion聚合酶是高保真聚合酶，扩增片段为平末端） 2、跑胶

1％琼脂糖凝胶胶跑20min，观察实验结果。 3、胶回收（试剂盒回收） （1）、在紫外光下将扩增条带用刀切下，要尽量快（紫外会诱导基因突变）放在1.5mL的离心管中；（注意：刀头尽量伸进离心管内部，防止污染离心管外部可接触部位） （2）、在离心管中加入300-400μ l的Buffer DE-A，混合均匀后于75°C水浴锅加热溶解直至透明； （3）、加0.5倍Buffer DE-A体积的Buffer DE-B，混合均匀。 （4）、吸取步骤3

载体桩的施工

随着载体桩技术的发展，已经广泛应用于各个领域，积累了丰富的施工经验，本文结合工程实例介绍载体桩施工的经验与教训，为类似工程提供参考。 1 前言

载体桩是北京波森特岩土工程有限公司的专利技术，是利用柱锤冲击成孔，紧跟护筒护壁，在设计深度处通过夯填填充料形成由干硬性混凝土、夯实填充料和挤密土体组成的载体，载体和上部钢筋混凝土桩身组成载体桩。载体和桩身及气结合部位都应保证施工质量，任何一个环节出现问题都直接影响载体桩的承载性能。 2 载体桩施工设备

载体桩施工采用北京波森特岩土工程有限公司的专利设备，由液压步履式底盘、门式架、柱锤、钢护筒、主副卷扬和配电箱组成。钢护筒直径一般为325—580mm，柱锤重量一般1.5—5.0吨，锤径与钢护筒相匹配。 3 载体桩施工工艺

桩位测放—桩机就位—捶击跟管成孔—夯填填充料—夯填干

硬性混凝土—灌注少量混凝土—放置钢筋笼—浇灌混凝土—拔出护筒—振捣。共十个步骤。每个环节都应严格按操作规程进行。 4 影响载体桩工程质量的关键工序

桩位测放：看似简单，却经常出现问题，桩位出现偏差后一

般采取补桩或加大承台措施。应采取测量复核、白灰点定位、挖定位桩孔等措施。

夯填填充料应达到设计要求的三击贯入度

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2运载体与基因表达载体的区别

1、不同点：

⑴“运载体”泛指基因工程操作中能将目的基因送达受体细胞的工具。如细菌质粒等。

相对“基因表达载体”而言，“运载体”主要是强调它能运输目的基因这一功能，只要能运输目的基因就算是运载体，并不计较是不是真正运输了目的基因。

⑵“基因表达载体”，是实施了运输目的基因、并且要保证目的基因到达受体细胞后能够表达的运载体。

这样看来，运载体、基因表达载体二者之间就不能完全等同。

2、联系：

“基因表达载体”是在”运载体”的基础上构建成的。

基因表达载体的构成：目的基因+ 启动子+ 终止子+ 标记基因。

3、表达载体上的启动子和终止子是本身具有还是后加上去的呢？

这个问题，教科书中并没有明确说明，但我个人的观点是：这要看获取目的基因的方法，而问题的根源在于基因的结构。关于基因的结构，在新课程标准中也不再做为教学的要求了。

（人类）结构基因的基本结构：上游非编码区+ 启动子+ 编码区+ 终止子+ 下游非编码区

人类结构基因4个区域：

①前导区，位于编码区上游，相当于RNA5’末端非编码区（非翻译区）；

②编码区，包括外显子与内含子；

③尾部区，位于RNA3’编码区下游，相当于末端非编码区（非翻译区）；

④调控区，包括

质粒与载体

点击次数：442 发表于：2008-07-08 17:32　转载请注明来自丁香园
来源：互联网


一、质粒

绝大多数的生物都是以DNA 的形式来储藏其遗传信息。遗传物质要能生生不息地传给后代的首要条件就是它至少要具有一个复制原(ori, origin of replication，或译为复制起点)，使整个基因体得以复制。含有复制原的遗传物质称为replicon，我们姑且把它译为为复制体吧！原核性复制体分为原核染色体、质粒(plasmids)和噬菌体基因体(phage genome)等三类。其中质粒的基因体和原核染色体类似，是由双绞炼DNA 构成，并以超卷曲的形式存在。它们的基因体约由2,000至150,000个碱基对组成，绝大多数呈环状，但也有极少数是线状构造(如Borrelia burgdorfferi)。事实上你可以把它们视为比较小的原核染色体。在自然环境中它们相当普遍地生存在原核生物细胞内，并和其宿主的许多特殊功能有关，诸如：赤贺氏杆菌(Shigella)的抗药、根瘤菌(Rhizobium)的固氮、农杆菌(Agrobacterium)的引瘤及假单胞杆菌(Pseudomonas)对环状有机物的分解等等。以下我们谈的以细菌性质粒为主，

第三章 噬菌体载体

一、填空题

1． 噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因： 一是—-----------—；二是----------——。

2． 第一个报道的全测序的单链DNA噬菌体是ФX174，DNA长5386个碱基对，共一个基因，为一环状DNA分子，基因组的最大特点是—----------—。

3． λ噬菌体的基因组DNA为———————kb，有——多个基因。在体内，它有两种复制方式，扩增时(早期复制)按—-----—复制，成熟包装(晚期复制)则是按—--------—复制。它有一个复制起点，进行—-------—向复制。λ噬菌体的DNA既可以以线性存在又可以环状形式存在，并且能够自然成环。其原因主要是在λ噬菌体线性DNA分子的两端各有一个——个碱基组成的天然黏性末端。这种黏性末端可以自然成环。成环后的黏性末端部位就叫做——————位点。

4． 根据噬菌体的包装能力，将野生型λ噬菌体的基因组DNA改造成插入型载体，该载体的最小分子大小约为————kb，插入的外源片段最大不超过——————kb。

5． 野生型的M13不适合用作基因工程载体，主要原因是————和-------------

1、捉尾巴

玩法：幼儿两人一组，各自在后腰带上系上彩绳当尾巴。游戏开始，四散跑开，每一对幼儿要想办法捉对方的尾巴，同时你要保护自己的尾巴。抓到对方尾巴者为胜。（只能在圆圈内跑，抓到后快速回到老师处）提出要求后，与幼儿共同游戏。游戏结束后教师针对情况，及时表扬鼓励。 2、帮熊伯伯运东西

玩法：将幼儿分成三组，首先要走过一座独木桥，然后跳过房子，在小心的走过小路，最后拿起绳子，双脚踩绳向前跳过小河，运上东西后跳绳返回，放入小篮内，拍第二个小朋友的手，游戏以此进行，在规定的时间内运回最多的胜利。 3、小树苗快快长

玩法：幼儿分别拿着太阳、水珠图片、站在起点线上，家长戴着树苗头饰蹲在终点线上。游戏开始，幼儿读“我是水珠和太阳，能帮树苗快快长”之后向前跑，跑过场地的中间的曲线，到达终点的树苗的后面把手中的卡片举起，家长马上站立表示树苗长大了，以最快者为胜。 4、勇敢小动物

玩法：将幼儿分成人数相等的2路纵队，老师发令后，各队第1名幼儿蹬滑跑冰车钻过“山洞”、到达“浮桥”。上桥救起1个小动物，并带着小动物踩脚踏车原路返回，第2名幼儿再出发。在规定时间内比哪一队救到的小动物数量多为胜队。 5、捕蛇

玩法：一个小朋友

xxx有限公司 涉密载体管理规定

第一章总则

第一条为加强xxx有限公司（以下简称“公司”）涉密载体（以下简称“涉密载体”）保密管理，确保国家秘密安全，根据国家法律和上级有关保密要求，制定本规定。

第二条依据：

（一）《中华人民共和国保守国家秘密法》

（二）《中共中央保密委员会办公室、国家保密局关于国家秘密载体保密管理的规定》（国办发【2000】年58号）

（三）《国家秘密载体销毁管理规定》厅字【2009】18号 第三条本办法所称的涉密载体是指以文字、数据、符号、图形、图像、声音等方式记载国家秘密信息的纸介质、磁介质、光介质、产品实物（密品）等各类载体。

第四条涉密载体的保密管理，遵循“实行积极防范、突出重点、依法管理、既确保国家秘密安全，又便利信息资源合理利用”的方针，和“业务谁主管，保密谁负责”的原则。

第五条本办法适用于公司涉密载体制作、收发、传递、使用、复制、保存、维修和销毁等环节的保密管理。

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第二章职责

第六条各部门职责

（一）各部门第一责任人及项目负责人对本部门、本项目涉密载体管理工作负领导责任。经批准使用涉密载体的人员，对涉密载体的安全负直接责任；

（二）各部门及涉密项目组，要明确本部门、本项目涉密载体的制作、收发、传递、