cDNA文库构建的意义

1 cDNA 文库的构建

1.1 cDNA 文库构建的基本原理与方法

cDNA 文库是指某生物某发育时期所转录的全部 mRNA 经反转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。经典 cDNA 文库构建的基本原理是用 Oligo(dT) 作逆转录引物，或者用随机引物，给所合成的 cDNA 加上适当的连接接头，连接到适当的载体中获得文库。其基本步骤包括：RNA 的提取(例如异硫氰酸胍法，盐酸胍—有机溶剂法，热酚法等等，提取方法的选择主要根据不同的样品而定)，要构建一个高质量的 cDNA 文库，获得高质量的 mRNA 是至关重要的，所以处理 mRNA 样品时必须仔细小心。由于 RNA 酶存在所有的生物中，并且能抵抗诸如煮沸这样的物理环境，因此建立一个无 RNA 酶的环境对于制备优质 RNA 很重要。在获得高质量的 mRNA 后，用反转录酶 Oligo(dT) 引导下合成 cDNA 第1链， cDNA 第2链的合成(用 RNA 酶 H 和大肠杆菌 DNA 聚合酶 I，同时包括使用 T4 噬菌体多核苷酸酶和大肠杆菌 DNA

1 cDNA 文库的构建

1.1 cDNA 文库构建的基本原理与方法

cDNA 文库是指某生物某发育时期所转录的全部 mRNA 经反转录形成的 cDNA 片段与某种载体连接而形成的克隆的集合。经典 cDNA 文库构建的基本原理是用 Oligo(dT) 作逆转录引物，或者用随机引物，给所合成的 cDNA 加上适当的连接接头，连接到适当的载体中获得文库。其基本步骤包括：RNA 的提取(例如异硫氰酸胍法，盐酸胍—有机溶剂法，热酚法等等，提取方法的选择主要根据不同的样品而定)，要构建一个高质量的 cDNA 文库，获得高质量的 mRNA 是至关重要的，所以处理 mRNA 样品时必须仔细小心。由于 RNA 酶存在所有的生物中，并且能抵抗诸如煮沸这样的物理环境，因此建立一个无 RNA 酶的环境对于制备优质 RNA 很重要。在获得高质量的 mRNA 后，用反转录酶 Oligo(dT) 引导下合成 cDNA 第1链， cDNA 第2链的合成(用 RNA 酶 H 和大肠杆菌 DNA 聚合酶 I，同时包括使用 T4 噬菌体多核苷酸酶和大肠杆菌 DNA

关于cDNA文库构建的方法原理流程及试剂盒等

中国农学通报第２２卷第２期２００６年２月

ｈｔｔｐ：／／ｚｎｔｂ．ｃｈｉｎａｊｏｕｒｎａｌ．ｎｅｔ．ｃｎ

５１

全长ｃＤＮＡ文库的构建方法

董志敏

１，２

，张宝石１，关荣霞２，常汝镇２，邱丽娟

２

２

（１沈阳农业大学农学院，沈阳１１０１６１；中国农科院作物所农业部作物种质资源

与生物技术重点开放实验室，北京１０００８１）

摘要：全长ｃＤＮＡ文库的构建是进行功能基因组研究的一种经济、快速、有效的途径，克服了传统

ｃＤＮＡ文库的缺点，节省了基因克隆和功能鉴定的时间，促进了功能基因组的研究进程。目前有６种构

建全长ｃＤＮＡ文库的方法，包括Ｏｌｉｇｏ－Ｃａｐｐｉｎｇ、ＣＡＰｔｕｒｅ、ＳＭＡＲＴ、ＣＡＰ－ｔｒａｐｐｅｒ、ＣａｐＳｅｌｅｃｔ、ＣＡＰ－

文库构建技术、实验操作复杂程度和文库构建质量等方面构存ｊｕｍｐｉｎｇ。这几种方法在起始材料用量、

在不同程度的优缺点，但综合比较而言，ＳＭＡＲＴ和ＣＡＰ－ｔｒａｐｐｅｒ这两种方法比较有实际应用价值。快速地构建一般质量的ｃＤＮＡ文库，如果采用Ｌｉｔｔｌｅ－ｃｙｃｌｅＳＭＡＲＴ和Ｌａｒｇｅ－ｓｉｚｅＳＭＡＲＴ法适于简单、

ＳＭＡＲＴ这两种改进技术，所建文库质量也非常好；ＣＡＰ－ｔｒａｐｐｅｒ

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成cDNA的延伸模板，逆转录酶会自动转换模板，以SMART引物作为延伸模板继续延伸cDNA单链直到引物的末

端，这样得到的所有cDNA单链的一端有含Oligo（dT）的起始引物序列，另一端有已知的SMART引物序列，合成

第二链后可以利用通用引物进行扩增。由于有5'帽子结构的mRNA才能利用这个反应得到能扩增的cDNA，因此扩

增得到的cDNA就是全长cDNA。

这个专利的方法是利用逆转录酶内源的末端转移酶活性，只要单管，一步即可完成，不需要额外的cDNA抽提纯

化或者沉淀，或者额外的酶反应，只需要少至25ng的mRNA或者50ng的Total RNA就可以得到高质量、高产量的

cDNA库，更重要的是得到的cDNA能够代表原有样品中的mRNA的丰度，可以应用于直接扩增基因、构建cDNA文

库、已知序列钓全长cDNA（RACE），和用于芯片检测的cDNA探针的扩增等。

我们在这里分别介绍几个采用SMART技术的产品：

一、SMART PCR cDNA S

生物学资料

维普资讯

第 3 0卷第 1期20年 08 1月

中国预

防兽

医学报

Vo _0. . l 3 NO 1J n. 2 a 008

Ch n s o r a fP e e t e Vee n r e ii e ie e J u n l r v n i tr a y M d cn o v i

东方田鼠肝脏 T 7噬茵体展示 c N D A文库的构建贾人初 1,孙， 2石耀军，陆毅，刘金明，傅志强，苑纯秀， 珂，孙焕，李浩，林矫矫

(. 1中国农业科学院上海兽医研究所国家防治动物血吸虫病专业实验室/农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海 2 0 3;2上海师范大学生命与环境科学学院，上海 2 0 3 ) 022 . 024

摘

要：本项研究的目的是构建东方田鼠肝脏 T 7噬茵体展示 c DNA文库，为筛选东方田鼠抗血吸虫病抗性

相关基因奠定基础。用 T Io试剂提取东方田鼠肝脏总 R Rzl NA,分离纯化 mR NA,经反转录合成双链 c NA。在 D双链 c NA末端加上 E o HjdI定向接头并用 E o D cR I/ n I I cR I和 HidI n I I酶切，使其两端分别带 E o c R I和 HidI n I I

粘性

cDNA基因文库的构建

2009-10-11 17:56:18| 分类： 生命科学|举报|字号 订阅

一、cDNA文库的特征和发展：

cDNA (complementary DNA):以mRNA为模板，在反转录酶的作用下合成的与之反向互补的DNA链(单链cDNA，反义链)，以单链cDNA为模板还可以合成其反向互补链(取代mRNA的DNA链，正义链)，得到双链cDNA。

将生物某一组织细胞中的总的mRNA分离出来作为模板，在体外用反转录酶合成互补的双链cDNA，然后连接到合适的载体上，并转入宿主细胞。这种方法所形成的所有克隆的集合体叫cDNA文库。

1）cDNA只含有对应于成熟mRNA的转录区，不含启动子、终止子、内含子、基因间隔区等。

2）cDNA一般较短，平均长度1.5kb左右，多数为100bp至10kb。 3）表达谱的时空动态性决定了cDNA文库的多样性。 4）不同基因的cDNA间存在丰度上的差异。 二、cDNA文库的构建： 1、RNA的分离

mRNA是构建cDNA文库的起始材料。总RNA中绝大多数是tRNA和rRNA，而mRNA只占总RNA的1﹪-5﹪，平均为2%，mRNA的比例取决于细胞类型和细胞的生理状态。由于

建设服务型政府的意义及路径选择

[服是社[摘摘要要]]：：服务务型型政政府府，，是指指在在公公民民本本位位、、社会会本本位位理理念念的的指指导导下下，，在通按在整整个个社社会会民民主主秩秩序序的的框框架架下下，，通过过法法定定程程序序，，按照照公公民民意意愿愿组组

建与建起起来来的的以以为为人人民民服服务务为为宗宗旨旨并并承承担担服服务务责责任任的的政政府府。。与传传统统的的政政府府管管理理模模式式相相比比，，服服务务型型政政府府具具有有以以下下几几个个方方面面的的特特征征：：“即“即“即“小小””，，即规规模模小小；；“少少””，，即管管得得少少；；“优优””，，即创创造造最最优优环环境境，，提提供供最最优优服服务务；；““高高””，，即即服服务务高高效效。。

建实建设设服服务务型型政政府府是是加加强强党党的的执执政政能能力力，，实现现党党的的宗宗旨旨的的重重要要举是体举措措；；是公公共共行行政政改改革革和和发发展展的的世世界界性性潮潮流流；；体现现了了社社会会主主义义政政府是是府价价值值观观的的基基本本要要义义；；是社社会会主主义义民民主主政政治治发发展展的的迫迫切切要要求求；；是新新时时期期深深化化行行政政管管理理体体制制改改革革的

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企业和谐劳动关系构建的意义及举措

作者：王立华

来源：《读写算·教研版》2015年第18期

摘要：企业与劳动者之间关系的和谐，关乎社会的稳定和社会主义现代化建设，关乎企

业员工的生活幸福指数，关乎企业创新发展的动力源泉。影响劳动关系和谐的原因有经济和非经济两种因素。构建和谐劳动关系需要企业管理者真正做到以人为本，从物质和精神上关爱员工；需要政府做好对企业的监管和协调工作；需要发挥企业工会组织的作用。

关键词：和谐；劳动关系；构建；举措

中图分类号：G712 文献标识码：B 文章编号：1002-7661（2015）18-005-02

一、劳动关系和谐的意义

劳动关系是指企业在生产过程中与劳动者之间形成的经济社会关系。劳动关系涵盖了社会经济生活中的若干领域，已经成为现代社会最基本的关系之一。对于劳动者而言，企业既是工人谋生的场所，也是其实现社会价值的重要载体；对于企业而言，工人的劳动是生产中最重要的因素，它关系到企业的产品质量、工作效率、生产成本等。可以说，没有工人的劳动，就没有企业的生存和发展；没有企业的生产活动，工人及其家属的生活来源无法得到保障，工人的社会价值也无从体现。从这个意义上来说，劳

篇一：我国构建社会主义和谐社会的必要性是什么

一、整体解读

试卷紧扣教材和考试说明，从考生熟悉的基础知识入手，多角度、多层次地考查了学生的数学理性思维能力及对数学本质的理解能力，立足基础，先易后难，难易适中，强调应用，不偏不怪，达到了“考基础、考能力、考素质”的目标。试卷所涉及的知识内容都在考试大纲的范围内，几乎覆盖了高中所学知识的全部重要内容，体现了“重点知识重点考查”的原则。

1．回归教材，注重基础

试卷遵循了考查基础知识为主体的原则，尤其是考试说明中的大部分知识点均有涉及，其中应用题与抗战胜利70周年为背景，把爱国主义教育渗透到试题当中，使学生感受到了数学的育才价值，所有这些题目的设计都回归教材和中学教学实际，操作性强。

2．适当设置题目难度与区分度

选择题第12题和填空题第16题以及解答题的第21题，都是综合性问题，难度较大，学生不仅要有较强的分析问题和解决问题的能力，以及扎实深厚的数学基本功，而且还要掌握必须的数学思想与方法，否则在有限的时间内，很难完成。

3．布局合理，考查全面，着重数学方法和数学思想的考察

在选择题，填空题，解答题和三选一问题中，试卷均对高中数学中的重点内容进行了反复考查。包括函数，三角函数，数列、立体几何、概率统计、解析几何、

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10 mM dNTP Mix Oligo(dT)18 Primer100µM, 0.5µg/µ