生化实验思考题答案

1. 氨基酸的纸层析分离

1. 什么是纸层析技术

是利用混合物中各组分物理化学性质差异，使其以不同速度移动的一种物理分离方法。

2. 什么是分配系数

分配系数是指溶质在固定相中的浓度和溶质在流动相中的浓度的比值。 3. 层析技术的种类

1 吸附层析 2 分配层析

3 离子交换层析 4 凝胶过滤层析 5 亲和层析 6 气象层析 7 固相层析 8 柱层析 9 纸层析 10 薄层层析

11 高效液相层析

4. 影响Rf值的因素有哪些

1 纸层析时纸层析时要在密闭仪器中加入平衡试剂使纸层析上吸附的溶剂达到

饱和.

2 滤纸要保持洁净,点样时要适量斑点不能过大. 3 样品物分子结构和极性

4 滤纸的厚薄和纤维松紧度不一样，结合的水量也不一样。

2. 酵母RNA的提取和分离

1. 试验中为什么选择干酵母做实验材料？

酵母中RNA含量较高（2.67%~10.0%），DNA含量少 2. 提取RNA的方法有几种？

稀碱法和浓盐法

3. 加入酸性乙醇的目的？

在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可使解聚的核糖核酸沉淀，由此得到RNA的粗制品。

4. 如何鉴定RNA的组分？现象如何？

RNA中含有核糖，碱基，磷酸各组分。核糖与浓盐酸和苔黑酚共热产生绿色；嘌呤碱与银铵络离子共

多练出技巧 巧思出硕果

生化实验讲义思考题参考答案

实验一 淀粉的提取和水解 1、实验材料的选择依据是什么？

答：生化实验的材料选择原则是含量高、来源丰富、制备工艺简单、成本低。从科研工作的角度选材，还应当注意具体的情况，如植物的季节性、地理位置和生长环境等，动物材料要注意其年龄、性别、营养状况、遗传素质和生理状态等，微生物材料要注意菌种的代数和培养基成分的差异等。

2、材料的破碎方法有哪些？

答：(1) 机械的方法： 包括研磨法、组织捣碎法；

(2) 物理法：包括冻融法、超声波处理法、压榨法、冷然交替法等； (3) 化学与生物化学方法：包括溶胀法、酶解法、有机溶剂处理法等。

实验二 总糖与还原糖的测定

1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间接滴定？两种滴定方法各有何优缺点？ 答: 我们采用的是碱性铜试剂法中的间接法测定还原糖的含量。间接法的优点是操作简便、反应条件温和，缺点是在生成单质碘和转移反应产物的过程中容易引入误差；直接法的优点是反应原理直观易懂，缺点是操作较复杂，条件剧烈，不易控制。

实验五 粗脂肪的定量测定─索氏提取法

（1）本实验制备得到的是粗脂肪，若要制备单一组分的脂类成分，可用什么方法进一步处

各章思考题及答案

一 糖类化学

糖蛋白中的寡糖链有些什么功能？

糖蛋白的种类繁多，功能也十分广泛。一般来说，糖蛋白的寡糖链可保护其蛋白部分免遭蛋白酶的水解，而延长其生物半衰期。此外寡糖链还影响蛋白质构象、聚合和溶解性等。在某些糖蛋白中寡糖链参与蛋白质在细胞内的分拣和运输。一些属于糖蛋白的酶，其寡糖链结构可影响酶的活性。许多激素为糖蛋白，其寡糖链的结构与激素的生物活性密切相关。存在于细胞表面的糖蛋白，其寡糖链还参与蛋白质分子之间的相互识别和结合作用。

二脂类化学

试述生物膜的两侧不对称性。 生物膜的不对称性表现在：

a) 磷脂成分在膜的两侧分布是不对称的。

b) 膜上的糖基（糖蛋白或糖脂）在膜上分布不对称，在哺乳动物质膜都位于膜的外表面。

c) 膜蛋白在膜上有明确的拓扑学排列。 d) 酶分布的不对称性。 e) 受体分布的不对称性。

膜的两侧不对称性保证了膜的方向性功能。

三 蛋白质化学

1 某氨基酸溶于pH7的水中，所得氨基酸溶液的pH为6，问此氨基酸的pI是大于6、等于6还是小于6?

氨基酸在固体状态时以两性离子形式存在。某氨基酸溶于pH7的水中，pH从7下降到6，说明该氨基酸溶解于水的过程中放出了质子，为了使该氨基酸达到等电点，

第七章、代谢调控 1、什么是新陈代谢？

新陈代谢简称代谢，是细胞中各种生物分子的合成、利用和降解反应的总和。一般来说，新陈代谢包括了所有产生和储藏能量的反应，以及所有利用这些能量合成低分子量化合物的反应。但不包括从小分子化合物合成蛋白质与核酸的过程。 生物新陈代谢过程可以分为合成代谢与分解代谢。

2、什么是代谢途径？代谢途径有哪些形式。 新陈代谢是逐步进行的，每种代谢都是由一连串反应组成的一个系列。这些一连串有序反应组成的系列就叫做代谢途径。在每一个代谢途径中，前一个反应的产物就是后一个反应的底物。所有这些反应的底物、中间产物和产物统称为代谢中间产物，简称代谢物。 代谢途径具有线形、环形和螺旋形等形式。有些代谢途径存在分支。

3、简述代谢途径的特点。

生物体内的新陈代谢在温和条件下进行：常温常压、有水的近中性环境。

由酶催化，酶的活性受到调控，精密的调控机制保证机体最经济地利用物质和能量。 代谢反应逐步进行，步骤繁多，彼此协调，有严格顺序性。 各代谢途径相互交接，形成物质与能量的网络化交流系统。 ATP是机体能量利用的共同形式，能量逐步释放或吸收。

4、列表说明真核细胞主要代谢途径与酶的区域分布。 代谢途径（酶或酶系） 细胞内分布 糖酵

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

第一章 概论

生物分子提取和纯化的一般过程？ 细胞破碎的方法？

抽提有效成分的影响因子：

生物大分子常用的浓缩纯化方法？ 纯化方案的评价指标是什么？

生物分离技术（纯化方案）设计的基本原则是什么？ 纯化生物产品的总收率是如何计算的？

第二章 沉淀法

1. 蛋白质沉淀方法有哪些？ 2. 盐析的概念及机理是什么？ 3. 硫酸铵饱和度：

4. 影响盐析的因素有哪些？ 5. 硫酸铵盐析的方法有哪几种？ 6. 盐析常数（Ks）： 7. 常用的脱盐方法： 8. 透析法注意事项：

9. 有机溶液能降低蛋白质溶解的原理： 10. 用乙醇沉淀蛋白质时应注意哪些事项？

第三章 吸附层析

1. 吸附层析分离物质的基本原理： 2. 吸附层析常用的吸附剂的种类： 3. 吸附剂的选择： 4. 羟基磷灰石(HA) ： 5. 硅胶吸附剂： 6. 洗脱剂符合条件： 7. 柱层析的设备：

8. 柱层析操作的一般过程：

9. 核酸在HA层析柱上分离的次序是双链RNA、杂链RNA、双链DNA，为什么？ 10. 薄层层析(TLC)：

第四章 离子交换层析

1.离子交换剂有哪几部分组成？何为阳离子和阴离子交换剂

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

第一章 概论

生物分子提取和纯化的一般过程？ 细胞破碎的方法？

抽提有效成分的影响因子：

生物大分子常用的浓缩纯化方法？ 纯化方案的评价指标是什么？

生物分离技术（纯化方案）设计的基本原则是什么？ 纯化生物产品的总收率是如何计算的？

第二章 沉淀法

1. 蛋白质沉淀方法有哪些？ 2. 盐析的概念及机理是什么？ 3. 硫酸铵饱和度：

4. 影响盐析的因素有哪些？ 5. 硫酸铵盐析的方法有哪几种？ 6. 盐析常数（Ks）： 7. 常用的脱盐方法： 8. 透析法注意事项：

9. 有机溶液能降低蛋白质溶解的原理： 10. 用乙醇沉淀蛋白质时应注意哪些事项？

第三章 吸附层析

1. 吸附层析分离物质的基本原理： 2. 吸附层析常用的吸附剂的种类： 3. 吸附剂的选择： 4. 羟基磷灰石(HA) ： 5. 硅胶吸附剂： 6. 洗脱剂符合条件： 7. 柱层析的设备：

8. 柱层析操作的一般过程：

9. 核酸在HA层析柱上分离的次序是双链RNA、杂链RNA、双链DNA，为什么？ 10. 薄层层析(TLC)：

第四章 离子交换层析

1.离子交换剂有哪几部分组成？何为阳离子和阴离子交换剂

有机实验思考题答案

熔点的测定

1〃测定熔点对有机化合物的研究有什么意义？ ① ②

可以初步判断物质 判定物质纯度

2〃毛细管法测定熔点时，Thiele管中应倒入多少热浴液体？ 加入使液面稍高于侧管的液体

3〃为什么一根毛细管中的样品只用于一次测定？ 一次测定后，样品的晶型发生改变对测量结果有影响 4〃接近熔点时升温速度为何要放慢？

方便观察初熔和全熔温度，不放慢易使测定的温度偏高 5〃什么时候开始记录初熔和全熔的温度？ 当观察到样品外围出现小滴液体时 为初熔 当固体样品刚刚消失成为透明液体时 为全熔温度 重结晶

1.简述重结晶的操作步骤和各步的主要目的

选择溶剂，溶解固体，加入活性炭（脱色），趁热过滤（除去不溶性杂质与活性炭），结晶析出（可溶性杂质留在母液中），减压过滤（使晶体与母液分离），洗涤晶体（除去附着的母液），晶体的干燥

2理想重结晶条件？

溶剂不与提纯物质发生化学反应；

重结晶物质在溶剂中的溶解度随温度变化，即高温时溶解度大，

1 / 6

有机实验思考题答案

而低温时溶解度小

杂质在溶剂中的溶解度或者很大，或者很小； 沸点较低，易挥发，干燥时易于结晶分离除去 溶剂应容易与重结晶物质分离

无毒或毒性很小，价格便宜，操作安

Shaonanlee 黑暗舞者DID

生化实验思考题总结

1. 蛋白质定量测量的方法有哪些？简要说明其原理。

答：a.紫外吸收，在280nm处有最大吸收峰。

b.定氮法，利用蛋白质中氮元素含量为16%固定比例来测定。

c.分光光度计法，利用OD值和蛋白质浓度成正比的原理。显色剂为考蓝。 d.双缩脲法。也是利用显色反应。 e.Folin酚法。

2. 如果凝胶过滤层析分离的蛋白质样品中含有多种蛋白质，在各蛋白质分子量已知的情况下，如何判断哪一种蛋白质时所想要的？

答：现在假设有三种蛋白质a b c，分子质量a>b>c。

那么，a最先流出，在体积V1处有一个洗脱体积，对应的a的溶液浓度在 V1处也最高，就会有一个OD值的峰值。b c同理。由不同的OD峰值， 对应不同的洗脱体积，就可以筛选出想要的蛋白质。如果想要b，那么在第 二个吸收峰的时候，找到相应的洗脱体积，然后在其附近的所接到的溶液 进行选取。就会得到想要的蛋白质。

3. 如果盐析后的样品不经脱盐处理便上样电泳，对其结果有何影响？

答：如果没有去除清蛋白里面的盐分，则会使电泳速度下降。原因在于溶液离子 强度太大，蛋白质表面的电荷减少，所以导致电泳速度下降，甚至无法泳

有机实验思考题答案

熔点的测定

1〃测定熔点对有机化合物的研究有什么意义？ ① ②

可以初步判断物质 判定物质纯度

2〃毛细管法测定熔点时，Thiele管中应倒入多少热浴液体？ 加入使液面稍高于侧管的液体

3〃为什么一根毛细管中的样品只用于一次测定？ 一次测定后，样品的晶型发生改变对测量结果有影响 4〃接近熔点时升温速度为何要放慢？

方便观察初熔和全熔温度，不放慢易使测定的温度偏高 5〃什么时候开始记录初熔和全熔的温度？ 当观察到样品外围出现小滴液体时 为初熔 当固体样品刚刚消失成为透明液体时 为全熔温度 重结晶

1.简述重结晶的操作步骤和各步的主要目的

选择溶剂，溶解固体，加入活性炭（脱色），趁热过滤（除去不溶性杂质与活性炭），结晶析出（可溶性杂质留在母液中），减压过滤（使晶体与母液分离），洗涤晶体（除去附着的母液），晶体的干燥

2理想重结晶条件？

溶剂不与提纯物质发生化学反应；

重结晶物质在溶剂中的溶解度随温度变化，即高温时溶解度大，

1 / 6

有机实验思考题答案

而低温时溶解度小

杂质在溶剂中的溶解度或者很大，或者很小； 沸点较低，易挥发，干燥时易于结晶分离除去 溶剂应容易与重结晶物质分离

无毒或毒性很小，价格便宜，操作安

本科生化思考题

一、名词解释

1． 肽键平面2

多肽链中肽键结构中C—N键具有部分双键性质不能自由旋转，即使肽键(CO—NH)中相关的6个原子处于—个平面称肽键平面。

2． 结构域2

蛋白质在形成三级结构时，肽链中某些局部的二级结构汇集在一起，形成发挥生物学功能的特定区域称为结构域。

3． 模体3

在一些蛋白质分子中，常发现几个(多为2～3个)具有二级结构的肽段相互靠近，形成具有特定功能的空间构象；或者仅是一个具有特定功能的很短的肽段。这种结构称为模体。常见的有锌指模体、螺旋-转角-螺旋模体等。

4． 蛋白质分子的四级结构3

两个或两个以上独立存在并具有三级结构的多肽链通过次级键结合在一起的特定构象称为蛋白质分子的四级结构。

5． 蛋白质的等电点1

蛋白质分子所带正负电荷相等时，溶液的pH值称为该蛋白质的等电点。

6． 蛋白质的变性2

在某些物理因素或化学因素的作用下，蛋白质分子内部的非共价键断裂，天然构象被破坏，从而引起理化性质改变，生物活性丧失，这种现象称为蛋白质变性。

7． Tm值1

在DNA变性时，A260达到最大值一半时的温度，即DNA变性一半时的温度，称为解链温度。

8． 酶的专一性3

一种酶只能作用于一种或一类作用物，或一定的化