sgRNA设计

SgRNA设计方法

SgRNA（small guide RNA简称），是CRISPR基因敲除敲入系统中重要的组成部分，早先发现的guide RNA，由两部分组成—tracRNA和crRNA, 两部分融合表达后，即sgRNA也能很好的行使guide的功能，与cas9蛋白结合，引导cas9酶靶向基因组DNA进行剪切。

SgRNA脱靶问题一直备受关注，如何设计特异性好的靶点成为大家关注的焦点，很多实验室开发了不同的设计软件，大体原则如下：

（1）对于sgRNA的长度，一般应为20 nt左右； （2）对于sgRNA序列的碱基组成，可选3'末端含GG的sgRNA，同时sgRNA种子序列尽量避免以4个以上的T结尾，GC%含量最佳为40%~60%；

（3）sgRNA的种子序列与脱靶位点的匹配数尽可能低 （4）如果构建U6或T7启动子驱动sgRNA的表达载体，需考虑sgRNA的5' 碱基为G或GG，以提高其转录效率； （5）对于sgRNA靶向基因的结合位置，如需造成基因移码突变，需尽量靠近基因编码区的ATG下游，最好位于第一或第二外显子；

（6）检查sgRNA靶向结合位点基因组序列是否存在SNPs； （7）如采用Cas9单切口酶，设计paired-gRNA需

Hereditas (Beijing) 2015年11月, 37(11): 1125―1136 www.chinagene.cn

综 述 CRISPR/Cas9系统中sgRNA设计与脱靶效应评估

谢胜松1，张懿2，张利生1，李广磊1，赵长志1，倪攀1，赵书红1

1. 华中农业大学，农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室，武汉 430070； 2. 中国人民解放军第161医院妇产科，武汉 430010

摘要： 基于CRISPR/Cas9系统介导的第三代基因组编辑技术，已成功应用于动物、植物和微生物等诸多物种

的基因组改造。如何提高CRISPR/Cas9技术的基因组编辑效率和最大限度降低脱靶风险一直是本领域的研究热点，而使用高效且特异的sgRNA(Small guide RNA)是基因组改造成功的关键性因素之一。目前，已有多款针对CRISPR/Cas9技术的sgRNA设计和/或脱靶效应评估软件，但不同的软件各有优缺点。本文重点对16款sgRNA 设计和脱靶效应评估在线和单机版软件的特点进行了阐述，通过制定38项评估指标对不同软件进行了比较分析，最后对11种用于检测基因组编辑效率和脱靶的实验方法，以及如何筛选高效且特异的sgRNA进行了归纳总结

题 目； Dreamweaver 网页设计 系(部)院： 信息工程学院

专 业： 教育技术 作者姓名： 冯彩娟 指导教师： 马月进 完成日期： 2011年 6 月 20 日

陇东学院信息工程学院教育技术班

Dreamweaver网页设计

摘 要:

Dreamweaver网页设计，简单的说就是教会你怎么制作网站。通常由个人或者专门的部门设计、开发、维护。本文给出了网站设计详细设计与开发过程，本网站是基于html语言、css、javascricp代码，在Dreamweaver 8.0环境下完成的。网站实现了向广大网络用户展示如何设计网站，如确定主题、网站规划、素材收集、风格设计、内容设计、发布维护等。网友可以在线留言给本网站，达到用户与网络管理员的互动，从而提高网站的信息面。

关键词：规划；风格；设计

目 录

第一章 引 言 ................................................................................

高三开学第一课优秀教案【一】

有一种苦涩的甜美叫高三，有一段难忘的记忆叫永恒，我们携手走过，让高三这段日子变成我们永恒的记忆。

亲爱的孩子们，人生能有几回搏，青春易逝，韶华难再，我们不应该让青春留下遗憾，火热的青春就应该与满腔热血相伴。让我们大声喊出：“高三，我们来了。”

你或许会疑惑：“老师，高三到底什么样儿?”

我会告诉你：“傻样!”

高三是清晨睁开惺忪的眼，就想起昨天记住的那个公式;蹲在厕所，就不由自主地重复那些默写的名句;照着镜子，就看到一个个化学元素;对着打饭的长龙，就想去进行排列组合;在激烈的争论中，就把同伴的饭吃个底朝天;自习课若被别人打扰，就会非常生气;偶尔放松一下，若不小心超时，就会生出极大的罪恶感;临睡前，闭上眼，所有的知识就会在大脑中跳舞;沉沉睡去，就连梦话讲的都是英语。

傻吧?二吧?如果你没有这样傻过、二过，你的高三是不完整的。

当然，高三并非只有打了鸡血般的兴奋状态，深入其中，你会感到枯燥乏味，你会感到孤独无助，你会感到失落绝望，高三这一年，谁都不会过得很轻松，你一定要明白：眼泪、抱怨统统没用，你要学会自我激励，“我一定要成功”的信念，要像催化剂般激发我们的斗志，一次次催化，一次次激励，一下下坚持，就这样把我们变成了可爱的傻模样。

第一章 产品及工艺路线的介绍 1.1 产品名称、化学结构及理化性质 1.1.1 产品名称

中文名：2-氨基-5-氯二苯甲酮 俗 名：氨基酮

化学名：2-氨基-5-氯二苯甲酮

英文名：2-amino-5-chlorobenzophenone 1.1.2 化学结构、分子式及分子量

1.1.3 理化性质

本品为黄色或壳黄色针状结晶，MP95—99℃，无臭，味苦，微溶于水，可溶于二氮甲烷，氯仿，乙醚等。

1.2还原岗位的工艺流程框图 1.2.1流程图

异噁唑 还原

铁粉 新甲苯 盐酸

废水层 弃去（三废） 废铁渣

反应 分水

回收甲苯

压滤

甲苯回收

弃去（三废）

水洗结晶

残废液

水洗废水

弃去（三废）

离心甩料

弃去（三废）

离心母液

氨基酮粗品

1.2.2 工艺过程

将甲苯、水、异噁唑成品、盐酸依次加入到还原反应釜，开搅拌，通蒸汽加热。再将铁粉加入，升温至95℃。回流反应3h后停止搅拌，并迅速将废水层分去，将甲苯层通入压滤罐，将废铁渣滤除，将滤液压入水洗结晶罐，将水洗用水加入进行水洗，通蒸汽升温至60℃，保温30min后分去水层。重复3次后，通入常温水冷却降温析晶，降至35℃时，改用冰盐水冷却，使结晶充分，降至20

企业标志设计 VI设计

什么是CIS

CIS在现代工商业界风行世界已有半个世纪之久。从“欧美型CIS”，到“日本型CIS”，再探索我们的“中国型CIS”理论与实践，我们确实需要对CIS的确切涵义有一个全新的认识！

我们认为：对CIS认识的深度与广度，决定CIS开发的力度。发现不少人由于停留在对CIS的肤浅认知和对CIS的表象开发上而未得到理想的效果，从而得出VIS就是CIS的错误结论。到目前为止，世界各国对CIS的定义各有不同，尤其在我国，自1980年代起，由于CIS发展时间较短，更是五花八门。

以上海复大品牌研究所为依托的上海复为品牌策划有限公司，于1998年受行业机构的委托，根据我国本土文化和国民经济发展特点，结合西方发达国家对CIS的研究成果，给予CIS以下定义。

CIS（CORPORATE IDENTITY SYSTEM），翻译为中文是企业识别系统，简称为CIS或CI。CIS包括企业理念识别(MI)、行为识别(BI)和视觉识别(VI)三个子系统。起源于19世纪欧洲，属市场经济的产物，是把企业文化、经营理念、管理行为等融入到现代商业策划设计和企业管理活动中，使之系统化、规范化、标准化。对内规范企业行为，强化员工的凝聚力和向心力，形成自我认同，提高

XX理工大学课程设计论文

引言

现代汽车工业具有世界性，是开发型的综合工业，竞争也越来越激烈。我国自1953年创建第一汽车制造厂至今，已有130多家汽车制造厂，700多家汽车改装厂。随着我国国民经济的快速发展和人们生活水平的不断提高，对汽车的使用功能不断提出新的要求。目前大部分汽车采用离合器作为汽车的动力传递机构。

多年的实践经验使人们逐渐趋向于采用单片干式摩擦离合器。它具有从动部分转动惯量小，散热性好，结构简单，调整方便，尺寸紧凑，分离彻底等优点。而且只要在结构上采取一定措施，也能使其接合平顺。如今，单片干式摩擦离合器在结构设计方面也相当完善：采用具有轴向弹性的从动盘，提高了离合器的接合平顺性；离合器中装有扭转减振器，防止了传动系统的共振，减少了噪音；以及采用了摩擦较小的分离杆机构等。另外，采用了膜片弹簧作为压簧，可同时兼起到分离杠杆的作用，使离合器结构大为简化，并显著地缩短了离合器的轴向尺寸。膜片弹簧和压盘的环行接触，可保证压盘上的压力均匀。由于膜片弹簧本身的特性，当摩擦片磨损时，弹簧的压力几乎没有改变，且可减轻分离离合器时所需要的踏板力。为了提高离合器的传扭能力，在重型汽车上多采用多片干式离合器。

此外，近年来由于多片湿式离合器在技术上

桥梁设计毕业设计

篇一：桥梁专业毕业设计模板

西 南 交 通 大 学 本科毕业设计

86m+162m+86m公路预应力 混凝土连续刚构桥设计 年 级： 土木20XX级 学 号： 20XX0568 姓 名： 陈 梓 专 业： 土木工程 指导老师： 张清华 20XX年6月

院 系 土木工程学院 专 业 土木工程年 级 20XX级詹天佑班 姓 名 陈梓 题 目 （86m+162m+86m)公路预应力混凝土连续刚构桥 指导教师

评 语 陈梓的毕业设计题目为86+162+86m公路预应力混凝土双薄壁墩连续刚构桥设计，论文所完成的主要工作包括结构尺寸拟定、结构内力分析、预应力筋估算、结构内力组合和验算等。设计中考虑了采用悬臂浇筑施工方法条件下施工过程对于成桥内力状态的影响，考虑了预应力、混凝土收缩徐变、温度效应和支座不均匀沉降等因素所引起的次内力，在此基础上进行了施工阶段应力的控制验算；并根据内力组合结果按照规范对结构进行了承载力极限状态验算和正常使用状态验算。论文计算基本正确、设计基本合理、设计图纸和相关资料基本符合规定要求。论文达到本科毕业设计要求，同意进行答辩。

雨燕1.3L乘用车普通锥齿轮差速器及半浮式半轴

设计说明书

摘要:普通的对称式圆锥齿轮差速器由差速器左右壳，两个半轴齿轮，四个行星齿轮，行星齿轮轴，半轴齿轮垫片及行星齿轮垫片等组成。由于其具有结构简单、工作平稳可靠、质量较小、制造方便、用于公路汽车上也很可靠等优点，故广泛用于各类车辆上。本文参照传统差速器的设计方法进行了雨燕1.3L乘用汽车差速器的设计。本文首先根据经验公式，然后参考圆锥行星齿轮差速器的结构尺寸，确定出差速器齿轮的主要设计参数；最后对差速器齿轮的强度进行计算和校核。本文是采用普通圆锥齿轮差速器作为雨燕1.3L乘用汽车的差速器进行设计的。

半浮式半轴以靠近外端的轴颈直接支承在置于桥壳外端内孔中的轴承上，而端部则以具有锥面的轴颈及键与车轮毂相固定，或以突缘直接与车轮轮盘及制动鼓相联接，因此，半浮式半轴除传递转矩外，还要承受车轮传来的垂向力、纵向力（驱动力或制动力）及侧向力所引起的弯矩。可见，半浮式半轴承受的载荷复杂，但它具有结构简单、质量小、尺寸紧凑、造价低廉等优点。用吞质量较小、使用条件较好、承载负荷也不大的轿车和轻型载货汽车。雨燕1.3L小型乘用车的结构紧凑，整备质量小，适合选用半浮式半轴。

关键字：对称式、锥齿轮、差速器、行星齿轮、

PCIE的PCB设计总结

封装：

常见的PCIE连接器有X1、X4、X8、X16，其中数字代表的是有多少条lane，例如X1,表示1条lane，即1对接收差分信号和1对发送差分信号。不同连接器的管脚数量不同，如下图，为X8连接器。通过管脚号，可以判断是哪种slot,其中：

PCIeX1(A18B18)---1条lane；PCIeX4(A32B32)---4条lane； PCIeX8(A49B49)---8条lane；PCIeX16(A82B82)---16条lane；

PCIE速率：

PCIE信号属于高速数字信号，版本越高，速率越高，目前的服务器和主板上比较常见的是PCIE3.0。PCIE速率见下表；

PCI Express

Introduced Line Transfer Throughput[i]

version code rate[i] ×1 ×2 ×4 ×8 ×16

1 2003 8b/10b 2.5 GT/s 250 MB/s 0.50 GB/s 1.0 GB/s 2.0 GB/s 4.0 GB/s

2 2007 8b/10b 5.0 GT/s 500 MB/s 1.