初始污染菌检测所用的培养基

文件号: QS/CKL03B-ZJ-26-A/0 文件名称：初始污染菌检测SOP 编制 时间 审核 时间 批准 时间 受控状态 版本号 修改状态： 生效日期 发放号 一、目的 检测产成品初始污染菌是否符合要求

二、适用范围

适用于非灭菌的产成品检验

三、职责

化验室化验员按标准操作规程检测

四、仪器、设备

生化培养箱、洁净工作台、电子天平、PH计、压力蒸汽灭菌器、4℃冰箱、酒精灯、250Ml的三角烧瓶、30Ml试管、无菌镊子、无菌剪刀、试管架、90mm玻璃培养皿、放大镜。

五、检验方法

1.普通肉汤琼脂培养基的制备 1.1所用试剂 胨10g 氯化钠5g 琼脂15-20g 肉浸液1000ml

2.产品采集与样品处理

于同一批号的三个运输包装中至少抽取200个最小销售包装样品，1/4样品用于检测，1/4样品用于留样，另1/2样品（可就地封存）必要时用于复检。抽样的最小销售包装不应有破裂，检验前不得启开。

在100级净化条件下用无菌方法打开用于检测的至少10个包装，从每个包装中取样，准确称取25g±1g样品，剪碎后加入到225ml灭菌生理盐水中，充分混匀，得到一个生理盐水样液。液体产

产品初始污染菌检测记录

ISM-QR-0075-A/0 试样名称 生产批号 检验依据 规格型号 抽样数量 检验日期 供试液制备：取待测试产品，根据产品物性的大小，分别采用直接浸入法或棉拭子擦洗法或冲洗法收集洗脱液，制取1:10供试液。保温于45℃水浴中5~10min，不时振摇。 试验操作：1.取营养琼脂培养基个，分别接各种供试品各ml。 2.取营养琼脂培养基个加ml0.9%无菌氯化钠溶液做空白对照（阴性对照）。 3.转动平皿，使供试液与培养基充分混匀。将已经凝固的平板倒置于37℃培养箱中，一般培养48±2h。 计算平板上的菌落数。 培养基预培养：营养琼脂培养基：月日时 至月日时（16-18h） 紫外线消毒时间：实验前:时分 至时分（0.5h）实验后：时分 至时分（0.5h） 洁净台 菌落数 培养皿号 48h菌落数 平均菌落数 检验结果 培养基名称 培养温度 细 菌 平 数 行 样 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 菌落均值 菌落总数（cfu/件） 检定标准：菌落计数的报告，菌落数在100以内时，按实

产品初始污染菌检测记录

ISM-QR-0075-A/0 试样名称 生产批号 检验依据 规格型号 抽样数量 检验日期 供试液制备：取待测试产品，根据产品物性的大小，分别采用直接浸入法或棉拭子擦洗法或冲洗法收集洗脱液，制取1:10供试液。保温于45℃水浴中5~10min，不时振摇。 试验操作：1.取营养琼脂培养基个，分别接各种供试品各ml。 2.取营养琼脂培养基个加ml0.9%无菌氯化钠溶液做空白对照（阴性对照）。 3.转动平皿，使供试液与培养基充分混匀。将已经凝固的平板倒置于37℃培养箱中，一般培养48±2h。 计算平板上的菌落数。 培养基预培养：营养琼脂培养基：月日时 至月日时（16-18h） 紫外线消毒时间：实验前:时分 至时分（0.5h）实验后：时分 至时分（0.5h） 洁净台 菌落数 培养皿号 48h菌落数 平均菌落数 检验结果 培养基名称 培养温度 细 菌 平 数 行 样 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 菌落均值 菌落总数（cfu/件） 检定标准：菌落计数的报告，菌落数在100以内时，按实

嗜酸乳杆菌 试验方法

一株嗜酸乳杆菌产共轭亚油酸条件的优化 [J]. 中国酿造，2009 1、基础培养基(脱脂乳培养基)

12.0 g脱脂奶粉，蒸馏水100 mL，pH自然，115℃灭菌20 min。

2、MRS固体培养基

葡萄糖20.0g，蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母浸膏5.0g， 无水乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，柠檬酸氢二铵2.0g， MgSO4·7H2O 0.58g，MnSO4·H2O 0.33g，

琼脂15g，pH 6.8左右，加蒸馏水至1000mL，121℃灭菌20min。

3、产酶培养基：

脱脂乳培养基，并加入一定浓度的亚油酸来诱导产酶。

1 出发菌株的活化及纯化

保藏的嗜酸乳杆菌接种于液体MRS培养基，摇匀后置36℃恒温箱中培养12h，接种于液体培养基中活化2次。划线接种到MRS固体培养基，36℃恒温培养36h，嗜酸乳杆菌在120r／min的状态下培养有利于嗜酸乳杆菌的繁殖。长出单个菌落后，挑取菌落进行革兰氏染色镜检，确定是否纯种。

嗜酸乳杆菌的形态与菌落特征

在MRS琼脂培养基上需氧培养48h后，菌落微小，不规则，微隆起，有光泽，灰白色，呈透明的玻璃霜花样。10倍显微镜观察表面凸凹不平，边缘为丝

嗜酸乳杆菌 试验方法

一株嗜酸乳杆菌产共轭亚油酸条件的优化 [J]. 中国酿造，2009 1、基础培养基(脱脂乳培养基)

12.0 g脱脂奶粉，蒸馏水100 mL，pH自然，115℃灭菌20 min。

2、MRS固体培养基

葡萄糖20.0g，蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母浸膏5.0g， 无水乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，柠檬酸氢二铵2.0g， MgSO4·7H2O 0.58g，MnSO4·H2O 0.33g，

琼脂15g，pH 6.8左右，加蒸馏水至1000mL，121℃灭菌20min。

3、产酶培养基：

脱脂乳培养基，并加入一定浓度的亚油酸来诱导产酶。

1 出发菌株的活化及纯化

保藏的嗜酸乳杆菌接种于液体MRS培养基，摇匀后置36℃恒温箱中培养12h，接种于液体培养基中活化2次。划线接种到MRS固体培养基，36℃恒温培养36h，嗜酸乳杆菌在120r／min的状态下培养有利于嗜酸乳杆菌的繁殖。长出单个菌落后，挑取菌落进行革兰氏染色镜检，确定是否纯种。

嗜酸乳杆菌的形态与菌落特征

在MRS琼脂培养基上需氧培养48h后，菌落微小，不规则，微隆起，有光泽，灰白色，呈透明的玻璃霜花样。10倍显微镜观察表面凸凹不平，边缘为丝

龙源期刊网 http://www.qikan.com.cn

产细菌纤维素菌培养基的研究探讨

作者：应以坚 周丹丹 王雪奇

来源：《山东工业技术》2016年第14期

摘 要：本文研究产了纤维素菌培养基的优化，选取葡萄糖为碳源，蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、硫酸铵、脲、磷酸氢二铵、硝酸钾为不同氮源，选择最佳pH值。通过分析培养基的纤维素膜重、pH值、总酸、残糖、OD值，发现以葡萄糖为碳源，以牛肉膏为氮源，pH值为5时，纤维素菌生长情况比较好，而且纤维素产量也比较高。 关键词：纤维素菌；培养基；研究探讨 DOI：10.16640/j.cnki.37-1222/t.2016.14.209 0 引言

细菌纤维素的生物合成是一个复杂的过程，为了提高其产量可以从多方面人手，找寻其它适合的菌株和比较合适的有利于菌体生长的条件以及发酵方式是一个比较可行的途径。在发件培养基培养条件的优化方面，我们采取了Placket.Burrnan试验设计和响应面分析方法。在本次试验中通过培养基条件的优化，来提高细菌纤维素的产量。在培养基条件优化方面选取了几个不同的因素，以葡萄糖为碳源时，分别选取氮源、培

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

基本简介

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

主要特点

（1）氨基酸含量为依格尔培养基的2倍，且含有非必需氨基酸，如甘氨酸等； （2）维生素含量为依格尔培养基的4倍； （3）含有糖酵解途径中的重要物质——丙酮酸； （4）含有微量的铁离子。

主要成分

DMEM(A) 细胞培养基（粉末型）成分

序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 化合物名称 无水氯化钙 .2H 2 O 硝酸铁 .9H 2 O 氯化钾 无水硫酸镁 氯化钠 无水磷酸二氢钠 丁二酸 丁二酸钠 L-盐酸精氨酸 L-盐酸胱氨酸 甘氨酸 L-盐酸组氨酸 L-异亮氨酸 L-亮氨酸 含量 (mg/L) 265.00

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

基本简介

DMEM是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的。与MEM比较增加了各种成分用量，同时又分为高糖型（低于4500mg/L）和低糖型(低于1000mg/L)。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长，适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。

主要特点

（1）氨基酸含量为依格尔培养基的2倍，且含有非必需氨基酸，如甘氨酸等； （2）维生素含量为依格尔培养基的4倍； （3）含有糖酵解途径中的重要物质——丙酮酸； （4）含有微量的铁离子。

主要成分

DMEM(A) 细胞培养基（粉末型）成分

序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 化合物名称 无水氯化钙 .2H 2 O 硝酸铁 .9H 2 O 氯化钾 无水硫酸镁 氯化钠 无水磷酸二氢钠 丁二酸 丁二酸钠 L-盐酸精氨酸 L-盐酸胱氨酸 甘氨酸 L-盐酸组氨酸 L-异亮氨酸 L-亮氨酸 含量 (mg/L) 265.00

常用培养基的配制

（一）营养琼脂培养基

【用途】供细菌总数测定、保存菌种、细菌纯化、一般细菌培养、血琼脂培养基基础之用。

【成分】牛肉膏 3g

NaCl 5g 蛋白胨 10g 琼 脂 20g

【pH值】7.2±0.2

【制法】上述成分称取38g加蒸馏水1000ml，经121.3℃ 30min高压灭菌备用。 （二）蛋白胨水培养基

【用途】供细菌培养、吲哚试验之用。

【成分】蛋白胨 10g

氯化钠 5g

【pH值】7.6 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，过滤，分装于试管，每管2～3ml，经121.3℃ 20min高压灭菌备用。

（三）半固体培养基

【用途】供观察细菌动力、菌种保存、H抗原位相变异试验等。 【成分】蛋白胨 10g

氯化钠 5g 琼脂 2.5～3g

【pH值】7.6

【制法】上述成分加入1000ml蒸馏水中，加热溶解，分装于试管，每管3～4ml，经 121.3℃ 20min高压灭菌备用。

（四）营养肉汤培养基

【用途】供一般细菌培养、转种、复苏、增菌等，也可用于消毒效果的测定。 【成

文献综述

发酵培养基的优化

申请学位： 院 （系）： 专 业： 姓 名： 学 号： 指导老师：

二 O 一 五 年 六 月 五 日

学士学位 药学院 生物技术 张永芳 114080107 张小华（讲师）

文献综述：

发酵培养基的优化

张永芳：114080107 指导老师：刘向勇

【摘要】：发酵，这一门悠久的技艺，在古今中外的生产生活与科学研究中扮

演着不可或缺的角色。在实验室发酵过程中,经常需要通过试验来寻找研究对象的变化规律,这些对象包括培养基的设计、工艺参数等;而这些变化规律的寻找就要通过科学的试验设计与数据分析来实现。通过对规律的研究达到各种实用的目的,比如提高产量、降低消耗、提高产品质量等,特别对于新菌种、新产品的试验。本文对发酵培养基优化的基本方向进行了综述,并比较了常用的试验设计与数据分析方法。

【关键词】：发酵、发酵培养基、优化、最优组合、响应面法优化 【内容】：

在工业化发酵生产中，发酵培养基的设计是十分重要的，因为培养基的成分对产物浓度、菌体生长都有重要的影响。培养基优化，是指面对特定的微生物，通过实验手段配比和筛选找到一种最适合其生长及发酵的培养基，在原来的基础上提高发酵产物的产量，以期达到生产最大发酵