溶菌酶实验结果分析

溶菌酶的提取和系列性质测定

实验报告

学院： 生物科学与工程学院 班级：

姓名： 学号：

组别： 第七组 组员：

一、实验内容：

溶菌酶的提取和系列性质测定

在研究酶的性质、作用、反应动力学等问题时都需要使用高度纯化的酶

制剂以避免干扰。酶的提纯工作往往要求多种方法交替应用，才能得到较为满意的效果。常用的提纯方法有盐析、有机溶剂沉淀、选择性变性、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析等。酶蛋白在分离提纯过程中易变性失活，为能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯操作中要始终注意保持酶的活性如在低温下操作等，这样才能收到较好的分离提纯效果。

溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶、球蛋白G，是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1，4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使病毒失活。溶菌酶相对分子质量约为1.44×104，是一种强碱性蛋白质，等电点在10

蛋清中提取溶菌酶

南京师范大学生命科学学院 姓名：穆旭 学号：09130333 摘要：本实验通过离子交换层析提取蛋清中的溶菌酶，掌握静态和动态离子交换的方法；

和从生物材料中提取活性蛋白质方法，并用超滤法分离溶菌酶和盐析浓缩溶菌酶，掌握超滤分离技术的原理和操作。并且用SDS-PAGE检测溶菌酶的纯度和含量，从而掌握SDS－PAGE的原理和操作。

关键词：溶菌酶，柱层析，离子交换树脂，超滤，盐析，SDS-PAGE

研究材料与实验方法 1.柱层析前的准备工作 实验材料：

树脂：724型阳离子交换树脂、层析柱：φ1.6cm×30cm、溶液：0.1M NaOH，0.1M HCl、其他材料：布氏漏斗，抽滤瓶，铁架台，恒流泵，核酸蛋白检测仪等。 1.1预处理724型阳离子交换树脂

碱－酸－碱的方法（Na型），每次用0.1N NaOH或者0.1N HCl溶液（体积约为树脂的2—3倍）浸泡树脂10—15min后，都要用蒸馏水将碱液、酸液冲洗掉。 1.2装填离子交换层析柱（重力沉降法）

固定层析柱，保持层析柱垂直；将蒸馏水倒入层析柱中，以排出管道中的空气，当蒸馏水高度约为层析柱高的一半时，将层析柱下端的塑料管夹紧；用玻璃棒将树脂搅拌均匀，倒入层析柱内，

Western实验步骤

1. 电泳(Electrophoresis)

（1）SDS-PAGE凝胶配制

SDS-PAGE凝胶进行配制，配方试剂去离子水，Arc-HCL(29:1)，10%APS，SDS,TEMED。 一般按分子大小配胶，现实验分离胶配12%-15%的胶，浓缩胶10%的胶。 配胶步骤：

1.清洗玻璃板，装好（注意不要漏即玻璃板要对齐）。 2.按比例配分离胶（8ml-10ml）

3.加水压胶，待分离胶凝固后（可见有分离胶与水有分隔线，一般凝固时间30分钟-1小时左右），吸走上层水面

4.按比例配浓缩胶（3ml-4ml），加入分离胶上层，插入梳子，（注意别有气泡），待凝。（如果今日不上样可以放入4°C冰箱）

注意：玻璃板要洗得干净；玻璃板要装好，不要漏；制胶过程中，一定要充分混匀，而且避免有气泡；

（2）样品处理

1.准备无菌EP管，向EP管内加入样品蛋白质体积的1/4体积的SDS缓冲液（5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液，现样品加3.5ul），之后加入相应蛋白样品（要制冰，蛋白质样品要放置在冰上），充分吹打混匀

2.100℃水浴加热5分钟，以充分变性蛋

茶多酚的分离提取实验改进及结果分析

冯愉慷 卢羽茜 康绮云

摘要：重点介绍了以绿茶为原料提取茶多酚的实验室制法。该实验室制法在原有的金属离子沉淀法，有机溶剂直接萃取法的基础上进行改进，使之成为一个适合实验教学的实验． 关键词：茶多酚；提浸；实验室制法；

茶多酚(Tea Polyphenols，TP），是从天然植物茶叶中分离提纯的多酚类化合物的复合体，约占茶叶干重的25。其中儿茶素类在茶多酚中占比倒最大，约80% ，且抗癌防癌活性最强。儿茶素属黄烷醇类，据报道：其抗癌活性按如下次序递减；(一)表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)>(一)表儿茶素没食子酸酯(ECG)>(一)表没食子儿茶索(EGC)>(一)表儿茶索(EC)。各种儿茶索在茶多酚中所占的比倒分别为(%)[1]：EGCG 50~60，ECG 15～2O，EGClO～15，EC 4～6；它们的结构见图1。

茶多酚的提取工艺目前已有了相当的研

究，其中溶剂浸提、金属离子沉淀是研究和报道较多的提取法，近几年来还出现了一些新的方法如树脂吸附法、超临界流体萃取法、超声波浸提法及微波浸提法等。

1.传统方法回顾

1.1金属离子沉淀法

金属离子沉淀法是利用茶

茶多酚的分离提取实验改进及结果分析

冯愉慷 卢羽茜 康绮云

摘要：重点介绍了以绿茶为原料提取茶多酚的实验室制法。该实验室制法在原有的金属离子沉淀法，有机溶剂直接萃取法的基础上进行改进，使之成为一个适合实验教学的实验． 关键词：茶多酚；提浸；实验室制法；

茶多酚(Tea Polyphenols，TP），是从天然植物茶叶中分离提纯的多酚类化合物的复合体，约占茶叶干重的25。其中儿茶素类在茶多酚中占比倒最大，约80% ，且抗癌防癌活性最强。儿茶素属黄烷醇类，据报道：其抗癌活性按如下次序递减；(一)表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)>(一)表儿茶素没食子酸酯(ECG)>(一)表没食子儿茶索(EGC)>(一)表儿茶索(EC)。各种儿茶索在茶多酚中所占的比倒分别为(%)[1]：EGCG 50~60，ECG 15～2O，EGClO～15，EC 4～6；它们的结构见图1。

茶多酚的提取工艺目前已有了相当的研

究，其中溶剂浸提、金属离子沉淀是研究和报道较多的提取法，近几年来还出现了一些新的方法如树脂吸附法、超临界流体萃取法、超声波浸提法及微波浸提法等。

1.传统方法回顾

1.1金属离子沉淀法

金属离子沉淀法是利用茶

实验二 离散傅立叶变换及谱分析预做实验

一、 实验目的

1．掌握离散傅里叶变换的计算机实现方法。 2．检验实序列傅里叶变换的性质。 3．掌握计算序列的圆周卷积的方法。

4．熟悉连续信号经理想采样前后的频谱变化关系，加深对时域采样定理的理解。 5．学习用DFT对连续信号和时域离散信号进行谱分析的方法，了解可能出现的分析误差，以便在实际中正确应用DFT。 二、 实验内容

1．实现离散傅里叶变换。 2．计算序列圆周卷积。

3．计算实序列傅里叶变换并检验DFT性质。

4．实现连续信号傅里叶变换以及由不同采样频率采样得到的离散信号的傅里叶变换。 5．实现补零序列的傅里叶变换。

6．实现高密度谱和高分辨率谱，并比较二者的不同。 三、实验结果

例1．计算离散傅里叶变换

设序列为 x(n)={ 1 2 3 4 5 6 7 8},对Circular -even component其进行DFT 10n=0:10;

5x=10*(0.8).^n;

[xec,xoc]=circevod(x);

0subplot(2,1,1);stem(n,xec); 012345678910ntitle('Circular -even component') Circ

正交实验如何数据分析

我们把在试验中考察的有关影响试验指标的条件称为因素（也叫

因子），把在试验中准备考察的各种因索的不同状态(或配方)称为水平。在研究比较复杂的工程问题中，往往都包含着多个因素，而且每个因素要取多个水平。

对于包含五个因素、五个水平的工程项目，理论计算必须进行55＝3125次试验。显然，所需要的试验次数太多了，工作量太大。实践告诉我们，合理安排试验和科学分析试验，是试验工作成败的关键。

试验方案设计的好，试验次数就少，周期也短，这样不仅节省了大量人力、物力、财力和时间，而且可以得到理想的结果。相反，如果试验设计安排的不好，即使进行了很多次试验，浪费了大量材料、人力和时间，也不一定能够得到预期的结果。

正交试验法，就是在多因素优化试验中，利用数理统计学与正交性原理，从大量的试验点中挑选有代表性和典型性的试验点，应用“正交表”科学合理地安排试验，从而用尽量少的试验得到最优的试验结果的一种试验设计方法。

正交试验法也叫正交试验设计法，它是用“正交表”来安排和分析多因素问题试验的一种数理统计方法。这种方法的优点是试验次数少，效果好，方法筒单，使用方便，效率高。

由于试验次数大大减少，使得试验数据处理非常重要。我们可以从所有的试验

正交实验如何数据分析

我们把在试验中考察的有关影响试验指标的条件称为因素（也叫

因子），把在试验中准备考察的各种因索的不同状态(或配方)称为水平。在研究比较复杂的工程问题中，往往都包含着多个因素，而且每个因素要取多个水平。

对于包含五个因素、五个水平的工程项目，理论计算必须进行55＝3125次试验。显然，所需要的试验次数太多了，工作量太大。实践告诉我们，合理安排试验和科学分析试验，是试验工作成败的关键。

试验方案设计的好，试验次数就少，周期也短，这样不仅节省了大量人力、物力、财力和时间，而且可以得到理想的结果。相反，如果试验设计安排的不好，即使进行了很多次试验，浪费了大量材料、人力和时间，也不一定能够得到预期的结果。

正交试验法，就是在多因素优化试验中，利用数理统计学与正交性原理，从大量的试验点中挑选有代表性和典型性的试验点，应用“正交表”科学合理地安排试验，从而用尽量少的试验得到最优的试验结果的一种试验设计方法。

正交试验法也叫正交试验设计法，它是用“正交表”来安排和分析多因素问题试验的一种数理统计方法。这种方法的优点是试验次数少，效果好，方法筒单，使用方便，效率高。

由于试验次数大大减少，使得试验数据处理非常重要。我们可以从所有的试验

PKPM电算结果分析

二 振型曲线的评定

结构基本自振周期的计算方法有三种：能量法，等效质量法，顶点位移法。但是有钢筋混凝土框架的经验公式值：第一振型T1=(0.12-0.15)n，第二振型T2=(1/3-1/5) T1，第三振型T3=(1/5-1/7) T1。详见《高层建筑混凝土结构技术规程》4.2.3，调入PKPM电算结果： 考虑扭转耦联时的振动周期(秒)、X,Y 方向的平动系数、扭转系数

振型号 周 期 转 角 平动系数 (X+Y) 扭转系数 1 0.6323 92.50 0.88 ( 0.00+0.87 ) 0.12 2 0.6194 29.58 0.41 ( 0.31+0.10 ) 0.59 3 0.6159 168.83 0.72 ( 0.69+0.03 ) 0.28 4 0.2030 93.38 0.87 ( 0.00+0.87 ) 0.13 5

PKPM电算结果分析

二 振型曲线的评定

结构基本自振周期的计算方法有三种：能量法，等效质量法，顶点位移法。但是有钢筋混凝土框架的经验公式值：第一振型T1=(0.12-0.15)n，第二振型T2=(1/3-1/5) T1，第三振型T3=(1/5-1/7) T1。详见《高层建筑混凝土结构技术规程》4.2.3，调入PKPM电算结果： 考虑扭转耦联时的振动周期(秒)、X,Y 方向的平动系数、扭转系数

振型号 周 期 转 角 平动系数 (X+Y) 扭转系数 1 0.6323 92.50 0.88 ( 0.00+0.87 ) 0.12 2 0.6194 29.58 0.41 ( 0.31+0.10 ) 0.59 3 0.6159 168.83 0.72 ( 0.69+0.03 ) 0.28 4 0.2030 93.38 0.87 ( 0.00+0.87 ) 0.13 5