植物生理生化实验原理和技术

实验一 植物组织游离氨基酸含量测定—茚三酮试剂显色法 P199

原理：游离氨基酸与茚三酮共热时能定量生成二酮茚-二酮茚胺，产物呈蓝紫色，称Rubemans紫。其吸收峰在570nm，且在一定范围内吸光度与游离氨基酸浓度成正比，因此可用分光光度法测定其含量。 ①微酸、90℃：氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，茚三酮被还原成还原型茚三酮。

②脱水：还原型茚三酮与另一分子茚三酮和一分子氨进行缩合脱水，生成二酮茚-二酮茚胺。

材料：清水浸种吸涨的水稻、清水浸种萌发两天的水稻。

实验步骤：

分别取1g萌发、未萌发水稻于研钵中，加入5ml醋酸（使蛋白质变性，沉淀），研磨成匀浆后，用无氨蒸馏水稀释至100ml。用干燥滤纸过滤到三角瓶中。如下操作 试管编号 试剂 样品提取液ml 无氨蒸馏水ml 0.1抗坏血酸ml 水合茚三酮ml 570nmOD值 每管含氮量 0 0 空白1 0 2.0 0.1 3 0.130 1.26 样品1（未萌发） 2 2 0 0.1 3 0.123 1.19 3 2 0 0.1 3 0.188 1．83 样品2（萌发） 4 2 0 0.1 3 0.168 1.83 5 2 0 0.1 3 置于沸水中加热15min，取出用

面粉与米粉中可溶性糖含量的差异

蒋名鹏

（云南农业大学烟草学院 2011313546）

植物体内的可溶性糖是光合作用的产物【1】。可溶性糖以蔗糖为主，是植物糖类运输的主要形式。糖是人体所需的六大营养成分之一【2】，在我们的生活中，我们主要是从植物中获取糖分。而在我国南方人主要以大米为主食，北方人以面粉为主食。本文对于研究植物碳水化合物代谢，评价营养状况，分析农产品品质等均有必要测定可溶性糖含量，同时可掌握蒽酮法测糖的基本技术【3】；更进一步可分析比较米粉与面粉中可溶性糖含量，试说明米粉与面粉哪个糖分更高，为二者营养价值比较作参考。

一、材料和方法

供试材料为云南农业大学购买的粗米粉和粗面粉，经过一定的去杂处理。 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖

【4】

的含量成正比，故可用于糖的定量测定。 可溶性糖的测定可分为三步：1.绘制标准曲线；2.提取可溶性糖---干样浸提；3.测定糖含量，选用620nm波长在分光光度计上比色，查标准曲线，求得相应的

【5】

糖含量。

二、结果和分析 1.米粉

高温、低温等逆境胁迫对植物细胞膜脂过氧化作

用和细胞差别透性的影响

张中元

（西南大学环境生态类2010级10班 学号222010320210270）

摘要：植物细胞膜脂过氧化作用会生成一些复杂产物，其中丙二醛（MDA）可与蛋白

质和核酸反应，改变其结构，或使之产生交联反应，从而丧失功能，还可使纤维素分子间的桥键松弛，或抑制蛋白质的合成。故而，以MDA含量来反映植物膜脂过氧化水平和对细胞膜的伤害程度。本实验采用吸收光谱发来测定MDA浓度进而得其含量。实验表明：高温、低温等逆境胁迫使植物叶片膜脂过氧化加剧，丙二醛(MDA)含量和相对电导率显著增加。说明植物虽然受到了逆境胁迫的伤害，但仍具有通过自身生理调节缓解这种伤害的能力。

当植物细胞首到高温或低温处理后，细胞膜差别透性就会改变或丧失，导致细胞膜内的物质（尤其是电解质）大量外渗，导致组织浸出液的电导率增大，通过测定外液电导率的变化即可反映出质膜受害程度和植物抗性的强弱。本实验采用电导仪法测定外液电导率。实验表明：高温和低温都对质膜产生伤害，且高温胁使植物细胞的抗性在某种程度上得以增强。

关键词：高温低温胁迫；丙二醛（MDA）；膜脂过氧化作用；电导率；细胞差别透性

The Efect of High

试卷3

一、名词解释(每小题3分，共24分)

1. 2.

Tm值：就是DNA熔解温度，指把DNA的双螺旋结构降解一半时的温度。

ω—氧化：脂肪酸的ω-碳原子先被氧化成羧基，再进一步氧化成ω-羧基，形成α、ω-二羧

脂肪酸，以后可以在两端进行α-氧化而分解。

3. 解偶联剂：指一类能抑制偶联磷酸化的化合物。这些化合物能使呼吸链中电子传递所产生的

能量不能用于ADP的磷酸化,而只能以热的形式散发,亦即解除了氧化和磷酸化的偶联作用,因此解偶联剂又可称为拆偶联剂。

4. 5.

束缚水：细胞内靠近胶粒而被胶粒所束缚而不易自由流动的水分。

灰分：无机物，可以是锻烧后的残留物也可以是烘干后的剩余物。但灰分一定是某种物质中

的固体部分而不是气体或液体部分。

6.

春化作用：一般是指植物必须经历一段时间的持续低温才能由营养生长阶段转入生殖阶段生

长的现象。

7.

光合作用：指光养生物利用光能把无机物合成有机物的过程。同时也有将光能转变为有机物

中化学能的能量转化过程。

8. 衰老：通常指植物的器官或整个植株的生理活动和功能的不可逆衰退过程。

二、填空(每空1分，共24分)：

1、光合链中的电子传递体按氧化还原电位高低，电子传递链呈侧写的

Z 形。在光合链中，电

东北农业大学网络教育学院 植物生理生化网上作业题 第一章 植物的生物大分子

一、名词解释

1．蛋白质一级结构 : 多肽链中氨基酸种类和排列顺序 2．简单蛋白 : 水解时终产物只有氨基酸的蛋白质。

3．结合蛋白 : 水解时不仅产生氨基酸还产生其他化合物，即结合蛋白质由蛋白质和非蛋白质部分组成，非蛋白质部分成为辅因子。

4．盐析 : 在蛋白质溶液中加大量中性盐使蛋白质沉淀析出的现象.

5．蛋白质变性: 天然蛋白质受到某些物理或化学因素影响，使其分子内部原有的空间结构发生变化时，生物理化性质改变，生物活性丧失，但并未导致蛋白质一级结构的变化，该过程称为蛋白质变性.

二、填空题

1．氨基酸在等电点(pI)时，其所带电荷为（ 零 ），在pH>pI时以（ 负 ）离子存在，在pH

2．蛋白质的四级结构是由（ 两条或两条以上 ）条具有（三级 ）结构的多肽链聚合而成特定构象的蛋白质分子。

3．蛋白质二级结构的形式有（ α-螺旋 ）、（ β-折叠）和（ β-转角 ）等。 4．核苷酸是由（ 碱基 ）、（ 磷酸 ）和（ 戊糖 ）三种成分组成。 5．DNA的三级结构是（ 超螺旋 ）结构。 三、单项选择题

1.蛋白质一级结

东北农业大学网络教育学院 植物生理生化网上作业题 第一章 植物的生物大分子

一、名词解释 1．蛋白质一级结构 2．简单蛋白 3．结合蛋白 4．盐析 5．蛋白质变性

二、填空题

1．氨基酸在等电点(pI)时，其所带电荷为（ ），在pH>pI时以（ ）离子存在，在pH

2．蛋白质的四级结构是由（ ）条具有（ ）结构的多肽链聚合而成特定构象的蛋白质分子。 3．蛋白质二级结构的形式有（ ）、（ ）和（ ）等。 4．核苷酸是由（ ）、（ ）和（ ）三种成分组成。 5．DNA的三级结构是（ ）结构。

三、单项选择题

1.蛋白质一级结构的主要化学键是（ ） A、氢键 B、疏水键 C、二硫键 D、肽键 2.蛋白质变性后可出现的变化是（ ）

A.一级结构发生改变 B.构型发生改变 C.分子量变小 D.构象发生改变

3.DNA二级结构模型是（ ）

A.α-螺旋 B.走向相反的右手双螺旋 C.三股螺旋 D.β-折叠 4．蛋白质所形成的胶体颗粒，在下列哪种条件下不稳定（ ） A．溶液pH值大于pI

东北农业大学网络教育学院 植物生理生化网上作业题 第一章 植物的生物大分子

一、名词解释

1．蛋白质一级结构 : 多肽链中氨基酸种类和排列顺序 2．简单蛋白 : 水解时终产物只有氨基酸的蛋白质。

3．结合蛋白 : 水解时不仅产生氨基酸还产生其他化合物，即结合蛋白质由蛋白质和非蛋白质部分组成，非蛋白质部分成为辅因子。

4．盐析 : 在蛋白质溶液中加大量中性盐使蛋白质沉淀析出的现象.

5．蛋白质变性: 天然蛋白质受到某些物理或化学因素影响，使其分子内部原有的空间结构发生变化时，生物理化性质改变，生物活性丧失，但并未导致蛋白质一级结构的变化，该过程称为蛋白质变性.

二、填空题

1．氨基酸在等电点(pI)时，其所带电荷为（ 零 ），在pH>pI时以（ 负 ）离子存在，在pH

2．蛋白质的四级结构是由（ 两条或两条以上 ）条具有（三级 ）结构的多肽链聚合而成特定构象的蛋白质分子。

3．蛋白质二级结构的形式有（ α-螺旋 ）、（ β-折叠）和（ β-转角 ）等。 4．核苷酸是由（ 碱基 ）、（ 磷酸 ）和（ 戊糖 ）三种成分组成。 5．DNA的三级结构是（ 超螺旋 ）结构。 三、单项选择题

1.蛋白质一级结

东北农业大学网络教育学院 植物生理生化网上作业题 第一章 植物的生物大分子

一、名词解释

1．蛋白质一级结构 : 多肽链中氨基酸种类和排列顺序 2．简单蛋白 : 水解时终产物只有氨基酸的蛋白质。

3．结合蛋白 : 水解时不仅产生氨基酸还产生其他化合物，即结合蛋白质由蛋白质和非蛋白质部分组成，非蛋白质部分成为辅因子。

4．盐析 : 在蛋白质溶液中加大量中性盐使蛋白质沉淀析出的现象.

5．蛋白质变性: 天然蛋白质受到某些物理或化学因素影响，使其分子内部原有的空间结构发生变化时，生物理化性质改变，生物活性丧失，但并未导致蛋白质一级结构的变化，该过程称为蛋白质变性.

二、填空题

1．氨基酸在等电点(pI)时，其所带电荷为（ 零 ），在pH>pI时以（ 负 ）离子存在，在pH

2．蛋白质的四级结构是由（ 两条或两条以上 ）条具有（三级 ）结构的多肽链聚合而成特定构象的蛋白质分子。

3．蛋白质二级结构的形式有（ α-螺旋 ）、（ β-折叠）和（ β-转角 ）等。 4．核苷酸是由（ 碱基 ）、（ 磷酸 ）和（ 戊糖 ）三种成分组成。 5．DNA的三级结构是（ 超螺旋 ）结构。 三、单项选择题

1.蛋白质一级结

1、氮蓝四唑（NBT）法测定超氧化物岐化酶（SOD） 2、POD（过氧化物酶）活性的测定——愈创木酚法 3、CAT(过氧化氢酶)测定

4、抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性的测定 5、谷胧甘肽还原酶(GR)的活力测定: 6、O2-产生速率的测定

7、过氧化氢(H2O2)含量的测定——碘化钾分光光度法 8、丙二醛（MDA）含量的测定

9、还原型抗坏血酸（ASA）和脱氢抗坏血酸（DHA）的测定 10、谷胱甘肽还原酶测定

11、MDAR(单脱氢抗坏血酸还原酶)活性的测定 12、可溶性总糖的测定

13、考马斯亮蓝G-250染色法测定可溶性蛋白含量 14、叶绿素含量的测定 15、石蜡制片的制作

16、激素Indole-3-Acetic Acid（IAA）、Abscisic Acid（ABA）、GA3和ZA的测定

17、cDNA扩增片段长度多态性技术（cDNA-AFLP）

18、3′/5′RACE 扩增基因全长 19、根系活力的测定（TTC法）

1

一 氮蓝四唑（NBT）法测定超氧化物岐化酶（SOD）

【实验原理】

SOD是含金属辅基的酶。高等植物含有两种类型的SOD：Mn－SOD和Cu.Zn－SOD，它们都催化下列反应：

由于超氧自由基（O2

植物生理生化网上作业题

第一章 植物的生物大分子

一、名词解释

1．蛋白质一级结构 多肽链中氨基酸种类和排列顺序。 2．简单蛋白：水解时只有氨基酸的蛋白质。

3．结合蛋白：水解时不仅产生氨基酸还产生其他化合物，即结合蛋白质由蛋白质和非蛋白质部分组成，非蛋白质部分成为附因子。 4．盐析：在蛋白质溶液中加大量中性盐使蛋白质沉淀析出的现象。

5．天然蛋白质受到某些物理或化学因素影响，使其分子内部原有的空间结构发生变化时，生物理化性质改变，生物活性丧失，但并未导致蛋白质一级结构的变化，该过程称为蛋白质变性。 二、填空题

1．氨基酸在等电点(pI)时，其所带电荷为（ 零 ），在pH>pI时以（ 负 ）离子存在，在pH

1.蛋白质一级结构的主要化学键是（ D ） A、氢键 B、疏水键 C、二硫键 D、肽键 2.蛋白质变性后可出现的变化是（ D ）

A.一级结构发生改变 B.构型发生改变 C.分子量变小 D.构象发生改变 3.DNA二级结构模型是（ B ）

A.α-螺旋 B.走向相反的右手双螺旋 C.三股螺旋 D.β-折叠 4．蛋白质所形成的胶体颗粒，在下列哪种条件下不稳定（ C ） A．