二代测序和一代验证

三代基因组测序技术原理简介

摘要：从1977年第一代DNA测序技术（Sanger法），发展至今三十多年时间， 测序技术已取得了相当大的发展，从第一代到第三代乃至第四代，测序读长从长到短，再从短到长。虽然就当前形势看来第二代短读长测序技术在全球测序市场上仍 然占有着绝对的优势位置，但第三和第四代测序技术也已在这一两年的时间中快速发展着。测序技术的每一次变革，也都对基因组研究，疾病医疗研究，药物研发， 育种等领域产生巨大的推动作用。在这里我主要对当前的测序技术以及它们的测序原理做一个简单的小结。

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图1：测序技术的发展历程

生命体遗传信息的快速获得对于生命科学的研究有着十分重要的意义。以上（图1）所描述的是自沃森和克里克在1953年建立DNA双螺旋结构以来，整个测序技术的发展历程。

第一代测序技术

第一代DNA测序技术用的是1975年由桑格（Sanger）和考尔森（Coulson）开创的链终止法或者是1976-1977年由马克西姆 （Maxam）和吉尔伯特（Gilbert）发明的化学法（链降解）. 并在1977年，桑格测定了第一个基因组序列，是噬菌体X174的，全长5375个碱基1。自此，人类获得了窥探生命遗传差异本质 的能力，并以此为开端步入基

二代测序领域最新进展总结

二代测序技术给生命科学领域带来了彻底的改变，而NGS领域本身也在经历着某种意义导上的变革。本文对二代测序领域的最新进展做了小结，其涉及的公司包括454 Life 读 Sciences, Illumina, Life Technologies, Pacific Biosciences, Oxford Nanopore等。

自从哈佛大学遗传学家George Church和454 Life Sciences公司Jonathan Rothberg掀起二代测序NGS的革命以来，已经过去了将近十年。毫不夸张地说，这段时间以来NGS技术已经发生了翻天覆地的变化，在测序通量突飞猛进的同时，测序成本直线下降。

想当年454 Life Sciences公司测序580-kb的细菌基因组，需要四小时的工作循环。而今年一月份Illumina公司发布的HiSeq X Ten测序系统，能够以千元成本测序完整的人类基因组，最多每天能测序600 billion bp。

如今，二代测序技术给生命科学领域带来了彻底的改变。而NGS领域本身也在经历着某种意义上的变革。正因如此，基因组学Archon X奖（Archon Genomics X Prize）不得不于去

摘要： 2005年454公司首推划时代的新一代测序仪，从而引发了测序市场上454、Illumina、ABI等公司在新一代测序技术上的比拼高潮。也正是这种你追我赶，让绘制人类全基因组图谱由过去的耗费4.37亿美元和13年时间，骤然缩短到如今SOLiD 3运行一次即获得50GB可定位测序数据。生物通6月重磅推出新一代测序技术专题，将逐个为你解析Illumina、ABI、Roche（454）的新一代测序仪，并汇集世界各大基因组中心诸多牛人对新一代测序仪的选择标准及使用反馈。敬请期待！

过去20年，美国应用生物系统公司（ABI）在测序方面一直占据着垄断地位。自公司的共同创始人Leroy Hood在上世纪80年代中期设计了第一台自动荧光测序仪之后，生命科学研究就摆脱了手工测序的繁琐和辛劳，骄傲地迈入自动测序的新时代。直到2005年，454推出了FLX焦磷酸测序平台，ABI的领先地位开始有些动摇。之后，ABI迅速收购了一家测序公司——Agencourt Personal Genomics，并在2007年底推出了SOLiD 新一代测序平台。从SOLiD到如今的SOLiD 3，短短一年多时间，它已经上演了一出精彩的“一级方程式赛车”。

SOLiD全称为s

摘要： 2005年454公司首推划时代的新一代测序仪，从而引发了测序市场上454、Illumina、ABI等公司在新一代测序技术上的比拼高潮。也正是这种你追我赶，让绘制人类全基因组图谱由过去的耗费4.37亿美元和13年时间，骤然缩短到如今SOLiD 3运行一次即获得50GB可定位测序数据。生物通6月重磅推出新一代测序技术专题，将逐个为你解析Illumina、ABI、Roche（454）的新一代测序仪，并汇集世界各大基因组中心诸多牛人对新一代测序仪的选择标准及使用反馈。敬请期待！

过去20年，美国应用生物系统公司（ABI）在测序方面一直占据着垄断地位。自公司的共同创始人Leroy Hood在上世纪80年代中期设计了第一台自动荧光测序仪之后，生命科学研究就摆脱了手工测序的繁琐和辛劳，骄傲地迈入自动测序的新时代。直到2005年，454推出了FLX焦磷酸测序平台，ABI的领先地位开始有些动摇。之后，ABI迅速收购了一家测序公司——Agencourt Personal Genomics，并在2007年底推出了SOLiD 新一代测序平台。从SOLiD到如今的SOLiD 3，短短一年多时间，它已经上演了一出精彩的“一级方程式赛车”。

SOLiD全称为s

《二代开封府》

话说这一年，江湖上突然出现了个新人物。 一个名叫展昭的年青人。

江湖上有很多人名叫展昭，当然他不可能是唯一的一个。就好比在他小时候就听过一个叫南侠展昭的侠客，后来在开封府做了护卫，皇上钦赐御猫的名号。

但是这位南侠御猫展昭在十八年前就突然销声匿迹了，和他一起消失的还有江湖上赫赫有名的陷空岛五鼠弟兄之一的锦毛鼠白玉堂。

江湖上的传闻很多，有的说他们在华山之峰决战，最后双双毙命。也有人说这二人早就化干戈为玉帛，两人携手同江湖去了。

其实哪一种都不可靠。第一，华山之峰上是座庙宇，那里香火鼎盛，谁会在那么多人的地方决斗还死了？第二，十八年前开始江湖上就再也没有人见过这二人，又怎么可能是去同游江湖？

这位展昭不懂，其实他有很多事不懂。别看他也叫展昭，可叫展昭的人再多也不可能都和人家南侠一个智慧。

不过今天这位叫展昭的年轻人要做一件大事，一件关系到他终生的大事。他要去投靠开封府，学一学当年的展南侠为国效力，保护青天包大人。他自认自己学艺十余载，要护卫青天还是有那个能力的。况且，就冲自己也叫展昭的份上，包大人总不会赶自己出来吧？ 于是这位虽然只有二十七岁，却看起来有些超越年龄般老成的展昭踏上的前往东京汴梁的路。

包大人此时正在书房中喝茶，

第二代和第三代慢病毒

包装系统

标准化管理处编码[BBX968T-XBB8968-NNJ668-MM9N]

第二代和第三代慢病毒包装系统

将HIV-1 基因组中的顺式作用元件(如包装信号、长末端重复序列) 和编码反式作用蛋白的序列进行分离。载体系统包括包装成分和载体成分：包装成分由 HIV-1 基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能反式提供产生病毒颗粒所需的蛋白；载体成分与包装成分互补，含有包装、逆转录和整合所需的 HIV-1顺式作用序列。同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。

第一代包装系统中，除vpu之外的辅助基因都被保留下来，Env包膜蛋白由VSV-G蛋白代替，应用 VSV-G 包膜的假构型慢病毒载体扩大了载体的靶细胞嗜性范围，而且增加了载体的稳定性。3质粒系统，包括包装质粒、包膜蛋白质粒和转移质粒。其中包装质粒在 CMV 启动子的控制下，表达 HIV 21 复制所需的全部反式激活蛋白，但不产生病毒包膜蛋白及辅助蛋白vpu；包膜蛋白质粒编码水泡性口炎病毒G蛋白 (VSV 2G)，应用 VSV 2G 包膜的假构型慢病毒载体扩大了载体的靶细胞嗜性范围，而且增加了载体的稳定性，允许通过高速离心对载体进行浓缩，

第二代和第三代慢病毒

包装系统

标准化管理处编码[BBX968T-XBB8968-NNJ668-MM9N]

第二代和第三代慢病毒包装系统

将HIV-1 基因组中的顺式作用元件(如包装信号、长末端重复序列) 和编码反式作用蛋白的序列进行分离。载体系统包括包装成分和载体成分：包装成分由 HIV-1 基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能反式提供产生病毒颗粒所需的蛋白；载体成分与包装成分互补，含有包装、逆转录和整合所需的 HIV-1顺式作用序列。同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。

第一代包装系统中，除vpu之外的辅助基因都被保留下来，Env包膜蛋白由VSV-G蛋白代替，应用 VSV-G 包膜的假构型慢病毒载体扩大了载体的靶细胞嗜性范围，而且增加了载体的稳定性。3质粒系统，包括包装质粒、包膜蛋白质粒和转移质粒。其中包装质粒在 CMV 启动子的控制下，表达 HIV 21 复制所需的全部反式激活蛋白，但不产生病毒包膜蛋白及辅助蛋白vpu；包膜蛋白质粒编码水泡性口炎病毒G蛋白 (VSV 2G)，应用 VSV 2G 包膜的假构型慢病毒载体扩大了载体的靶细胞嗜性范围，而且增加了载体的稳定性，允许通过高速离心对载体进行浓缩，

篇一：读《一代人》有感

当我读到顾城的这首《一代人》时，我愣住了，因为这首诗尽然只有两句话，这一下激起了我的兴趣。

“黑夜给了我黑色的眼睛，我却用它寻找光明”，这是诗的全部内容，先不说对由于他的赏析，因为我基本也是理解的模模糊糊，但我却从中领悟到了一个人生道理：量变引起质变。。诗题为《一代人》，可以理解为和也给了“一代人”黑色的眼睛，，使一代人开始觉醒，并越来越强烈地去寻找光明，从而使“一代人”拥有强大的面对黑暗的力量。众所周知，黑是因为不反射光的缘故，是扼杀光明的结果，这本就是一个量变的过程，于是，“一代人”便拼命地用黑色的眼睛寻找并吸收光明。

从古至今，这一哲理一直存在，从秦朝的陈胜吴广起义到那“一代人”的年代人民群众的奋起反抗，再到现在学习生活中，许多学生从中等生变为尖子生的过程，无不是验证了这一长存却又永不会过时的哲理，也证明了他在生活中具有广泛的影响力。

任何事的成功都没有捷径，都需要进过一个努力拼搏，冷静思考的量变过程，只有认识到这一点，脚踏实地才能获得成功。

篇二：魏佳俐顾城的诗《一代人》

《一代人》

——顾城的诗

“黑夜给了我黑色的眼睛

我却用它寻找光明”

理解：黑夜是比喻当时社会的黑暗。给了我们黑色的眼睛是指给了当时的正义人士这样一个黑暗的环境

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一代名将 杜聿明

1948淮海战役期间，眼神忧郁的蒋中正和杜聿明

杜聿明，字光亭，陕西米脂人，国民党陆军中将，爱国将领，著名的军事家、统帅。学 籍： 黄埔军校一期 字 号： 光亭 党 派： 中国国民党 籍 贯： 陕西省米脂军 衔： 国民革命军陆军中将 生 卒： 1904-1981 军 职： 徐州“剿总”副总司令兼第2兵团司令官

1930年初，蒋介石成立教导第二师，张治中任师长，杜聿明任该师第二旅第五团一营中校营长，不久升为该师第六团上校团长。1930年冬，教导第二师改番号为陆军第四师，杜为第十二旅第二十四团团长。1932年初，徐庭瑶的第四师奉命开皖北参加大别山“围剿”红军，在霍丘被红军旷继勋部击败。在关键时刻，徐令第二十四团全力反攻，杜聿明率部穿插，突入霍丘，使红军损失重大。徐庭瑶为他记首功，并上报晋升杜为少将团长。这年冬，徐升任第十七军军长，杜被委为该军第二十五师第七十三旅旅长，不久升为该师副师长(师长关麟征)。 1933年2月日本侵略军分兵三路进攻热河，军西义第一军第八师团及骑兵第三旅团迅速突破左翼第一一二师阵地，进占古北口关

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口，并乘胜向第二十五师阵地发起攻击。关鳞

篇一：《一代宗师》观后感

《一代宗师》观后感 念念不忘，必有回响。是台词里的。自昨晚看完《一代宗师》之后，就忍不住想说点什么。虽然没怎么看懂，但是很喜欢。

先说剧情。被剪后的影片长125分钟。当时看到四分之一的时候以为是武打片,看到四分之二又觉得应该是爱情片,看完四分之三之后感觉又像是传记片,直到出片尾字幕了才发觉可能只是MV??表示期待一下原长4时的版本。个人感觉这部电影禅机太多了，多到一不留神就会不知道为啥下一个镜头就变成了那样。典型的王家卫式叙事风格啊,跳跃性强，散文一样的，不熟悉的人如我就会觉得碎。但也有人表示了：其实故事很明朗啊！主要讲的就是宫二的复仇嘛：大师兄弄死了师傅,师傅的女儿也就是大师兄的小师妹于是弄死了大师兄,然后小师妹就对师傅曾经的接班叶问开始了蒙太奇式的单相思（忍不住插一句：悲催的宫二啊,要是当时有电话打给叶问,那还不得分分钟就搞定了大师兄?）。期间还有小沈阳和本山大叔露脸,同时穿插《2046》版的叶问,打斗剧情就是《圣斗士星矢》的“大家还没看清楚什么事,就完成格斗了,其实一秒种他已经打出了无数的天马流星拳!!! ”??

再说画面。去之前知道有梁朝伟章子怡,也知道有本山大叔和小沈阳，一入座才发现原来乔妹也在啊,话很不多,差