圆二色谱和紫外吸收的关系

圆二色谱应用技术

一、实验目的

1、了解圆二色（CD）光谱的工作原理。 2、学会运用圆二色谱测氨基酸，蛋白质，DNA。

二、实验原理

对R和L两种圆偏振光吸收程度不同的现象。这种吸收程度的不同与波长的关系称圆二色谱，是一种测定分子不对称结构的光谱法。圆二色光谱是一种差光谱，样品在左旋偏振光照射下的吸收光谱与其在右旋吸收光谱照射下的偏振光之差。物质的吸收光谱决定物质的颜色。如果一个物质对左旋偏振光和对右旋偏振光的吸收 不同,那么称该物质具有圆二色性(circulardi2chroism,简称CD)。同样,如果一个物质对于不同方向的线偏振光的吸收不同,那么该物质具有线二色性。很多各向异性的晶体具有线二色性;而很多生物大分子和有机分子具有圆二色性在分子生物学领域中主要用于测定蛋白质的立体结构，也可用来测定核酸和多糖的立体结构。

圆二色谱仪由光源、单色器、起偏器、圆偏振发生器、试样室和光电倍增管组成。

三、实验步骤

1.通高纯氮气45min后，开机

2.点亮氙灯:打开主机电源INSTRUMENTPOWER;打开氙灯电源XENONLMAPPOWER;等待LMAPready灯亮；按红色IGNITELMAP按钮

3.打开主板电源INSTRUMENTPO

圆二色谱应用技术

一、实验目的

1、了解圆二色（CD）光谱的工作原理。 2、学会运用圆二色谱测氨基酸，蛋白质，DNA。

二、实验原理

对R和L两种圆偏振光吸收程度不同的现象。这种吸收程度的不同与波长的关系称圆二色谱，是一种测定分子不对称结构的光谱法。圆二色光谱是一种差光谱，样品在左旋偏振光照射下的吸收光谱与其在右旋吸收光谱照射下的偏振光之差。物质的吸收光谱决定物质的颜色。如果一个物质对左旋偏振光和对右旋偏振光的吸收 不同,那么称该物质具有圆二色性(circulardi2chroism,简称CD)。同样,如果一个物质对于不同方向的线偏振光的吸收不同,那么该物质具有线二色性。很多各向异性的晶体具有线二色性;而很多生物大分子和有机分子具有圆二色性在分子生物学领域中主要用于测定蛋白质的立体结构，也可用来测定核酸和多糖的立体结构。

圆二色谱仪由光源、单色器、起偏器、圆偏振发生器、试样室和光电倍增管组成。

三、实验步骤

1.通高纯氮气45min后，开机

2.点亮氙灯:打开主机电源INSTRUMENTPOWER;打开氙灯电源XENONLMAPPOWER;等待LMAPready灯亮；按红色IGNITELMAP按钮

3.打开主板电源INSTRUMENTPO

圆二色谱应用技术

一、实验目的

1、了解圆二色（CD）光谱的工作原理。 2、学会运用圆二色谱测氨基酸，蛋白质，DNA。

二、实验原理

对R和L两种圆偏振光吸收程度不同的现象。这种吸收程度的不同与波长的关系称圆二色谱，是一种测定分子不对称结构的光谱法。圆二色光谱是一种差光谱，样品在左旋偏振光照射下的吸收光谱与其在右旋吸收光谱照射下的偏振光之差。物质的吸收光谱决定物质的颜色。如果一个物质对左旋偏振光和对右旋偏振光的吸收 不同,那么称该物质具有圆二色性(circulardi2chroism,简称CD)。同样,如果一个物质对于不同方向的线偏振光的吸收不同,那么该物质具有线二色性。很多各向异性的晶体具有线二色性;而很多生物大分子和有机分子具有圆二色性在分子生物学领域中主要用于测定蛋白质的立体结构，也可用来测定核酸和多糖的立体结构。

圆二色谱仪由光源、单色器、起偏器、圆偏振发生器、试样室和光电倍增管组成。

三、实验步骤

1.通高纯氮气45min后，开机

2.点亮氙灯:打开主机电源INSTRUMENTPOWER;打开氙灯电源XENONLMAPPOWER;等待LMAPready灯亮；按红色IGNITELMAP按钮

3.打开主板电源INSTRUMENTPO

MOS450+SFM300 CD动力学测量操作方法

1、调整Xe(Hg)灯为测量光源，具体步骤参照《光源的选择和调整》。 2、确认波长准确度，具体步骤参照《MOS450波长校正》。

3、安装快速动力学检测池及检测器位置的调换，具体步骤参照《MOS450+SFM300动力学实验前准备条件》。

4、打开MPS-70、ALX-250、MM-450、PMS-450电源。

5、打开电脑，点击图标，进入操作软件界面。

6、点击Device—Transient Recorder

图1

出现如下界面。

图2

7、点击图2主界面左上方的

（1）

按钮，进行加样和样品量的定位。

当Syringe1、Syringe2、Syringe3中的注射杆上升到最高位置时，点击图3中的

，使软件中Syringe1、Syringe2、Syringe3的量清空。

（2）

如图4，把样品装入塑料注射器并赶走注射器中的气泡后，插入Syringe1上口，同时把选择阀扳到R的位置。

点击图3中的Syringe1位置，使Syringe1栏被红框圈定，一直点击Syringe1中加入样品。然后点击

，向

（3）

几下，推出一部分样品同时推出Syringe1

中的气泡，重复加样推样几次，完全赶走Syr

实验一 中药提取液HPLC梯度洗脱条件的优化

一、目的

1．掌握高效液相色谱分析中，梯度洗脱条件的决定因素。 2．熟悉HPLC梯度洗脱条件优化的思路。 二、提要

对于成分复杂的中药提取液，测定其HPLC指纹图谱一般采用梯度洗脱的方法。而梯度洗脱条件主要受梯度范围（梯度起始浓度和终止浓度）、梯度斜度及强溶剂种类的影响。其中梯度范围和梯度斜度决定流动相的洗脱强度，可以通过调整梯度范围和梯度斜度，使样品组分的k’值符合1＜k’＜20范围；而强溶剂的种类决定流动相的选择性。本实验主要考察不同洗脱系统的溶剂强度对于梯度分离条件的影响。

三、实验条件 1．高效液相色谱仪；

2．ODS柱（C18, 4.6mm×150mm, 5μm或4.6mm×250mm, 5μm）； 3．流动相：乙腈－水；流速：1ml/min。 4．检测器：DAD检测器，检测波长254nm。 5．样品：大黄70%甲醇超声提取液 6. 进样量：20 μL

7. 柱温：35 ℃。

四、操作步骤

1．以乙腈—水（5:95），90min至乙腈（100%），保持10min，观察样品分离效果。 2．根据分离结果，调整梯度范围和斜度，即调整乙腈的起始浓度和终止浓度，及浓度变化速率，使中药提取液各主要

实验一 中药提取液HPLC梯度洗脱条件的优化

一、目的

1．掌握高效液相色谱分析中，梯度洗脱条件的决定因素。 2．熟悉HPLC梯度洗脱条件优化的思路。 二、提要

对于成分复杂的中药提取液，测定其HPLC指纹图谱一般采用梯度洗脱的方法。而梯度洗脱条件主要受梯度范围（梯度起始浓度和终止浓度）、梯度斜度及强溶剂种类的影响。其中梯度范围和梯度斜度决定流动相的洗脱强度，可以通过调整梯度范围和梯度斜度，使样品组分的k’值符合1＜k’＜20范围；而强溶剂的种类决定流动相的选择性。本实验主要考察不同洗脱系统的溶剂强度对于梯度分离条件的影响。

三、实验条件 1．高效液相色谱仪；

2．ODS柱（C18, 4.6mm×150mm, 5μm或4.6mm×250mm, 5μm）； 3．流动相：乙腈－水；流速：1ml/min。 4．检测器：DAD检测器，检测波长254nm。 5．样品：大黄70%甲醇超声提取液 6. 进样量：20 μL

7. 柱温：35 ℃。

四、操作步骤

1．以乙腈—水（5:95），90min至乙腈（100%），保持10min，观察样品分离效果。 2．根据分离结果，调整梯度范围和斜度，即调整乙腈的起始浓度和终止浓度，及浓度变化速率，使中药提取液各主要

Agilent 7890A GC Operation and Maintenance 一、 ECD使用时的开机及关机步骤 1. 开机步骤：

?设置检测器的气体（Makeup气的流量及种类）??把INJ\\COL\\DET的温度设置在室温 ?按[Start GC]开始控制?

?等到ECD池中的空气完全被Makeup气和载气所代替时 ?设置检测器的温度及current

?等到DET的温度到达设定值后，等待10min，然后设定INJ和COL的温度?

?等到基线平稳后，调零，进样。 2. 关机步骤：

?应先降INJ和COL的温度到室温??然后等待5min后再降DET的温度?

?待DET的温度降到室温后，继续通载气及Makeup气一段时间（10min）??最后关闭系统（Systemoff）?二、 柱子及ECD的老化方法

1. 柱子的老化：用程序升温老化柱子，老化柱子时要把ECD封上，可以通上30ml/min的Makeup气 2. ECD的老化方法：

?柱子的选择：空心无液相的柱子为首选 In case of a capillary column :

A fused silica tube (option : for instance FQ tube 0.

实验二 ?-胡萝卜素紫外可见吸收光谱的测绘、摩尔消光系数的测定及溶剂效应

一、 实验目的

1、了解?-胡萝卜素紫外可见吸收光谱的特征及其与分子结构的关系； 2、通过测定摩尔消光系数进一步理解朗伯-比尔定律及其应用 3、观察溶剂对吸收光谱的影响

二、 实验原理（请预习《仪器分析》第十三章）

类胡萝卜素为自然界广泛存在的一类重要的天然色素，其长的共轭体系决定了在可见区产生丰富而特征的光吸收信息。?-胡萝卜素是胡萝卜中含量最丰富的天然色素，其全反式结构具有11个共轭双键（其中9个为全反式，2个为顺式构型），在可见区S2态吸收带可以看到清晰的振动结构。

利用紫外可见吸收光谱定性鉴定有机化合物的方法是在相同条件（溶剂、浓度、温度、pH值）下比较未知物与已知纯化合物的吸收光谱，或与相同条件下绘制的标准图谱对比，若二者完全相同，则基本可以认为是同一化合物。

溶剂的性质对有机化合物的紫外可见吸收光谱有一定的影响，这是溶剂分子与溶质分子间相互作用的结果。 三、 仪器试剂

1、仪器：Varian Cary 50紫外可见分光光度计（UV-visible spectrophotometer）；1 cm石英比色皿；100 mL容量瓶；25 mL容量瓶；5 mL移液管；

实验二 ?-胡萝卜素紫外可见吸收光谱的测绘、摩尔消光系数的测定及溶剂效应

一、 实验目的

1、了解?-胡萝卜素紫外可见吸收光谱的特征及其与分子结构的关系； 2、通过测定摩尔消光系数进一步理解朗伯-比尔定律及其应用 3、观察溶剂对吸收光谱的影响

二、 实验原理（请预习《仪器分析》第十三章）

类胡萝卜素为自然界广泛存在的一类重要的天然色素，其长的共轭体系决定了在可见区产生丰富而特征的光吸收信息。?-胡萝卜素是胡萝卜中含量最丰富的天然色素，其全反式结构具有11个共轭双键（其中9个为全反式，2个为顺式构型），在可见区S2态吸收带可以看到清晰的振动结构。

利用紫外可见吸收光谱定性鉴定有机化合物的方法是在相同条件（溶剂、浓度、温度、pH值）下比较未知物与已知纯化合物的吸收光谱，或与相同条件下绘制的标准图谱对比，若二者完全相同，则基本可以认为是同一化合物。

溶剂的性质对有机化合物的紫外可见吸收光谱有一定的影响，这是溶剂分子与溶质分子间相互作用的结果。 三、 仪器试剂

1、仪器：Varian Cary 50紫外可见分光光度计（UV-visible spectrophotometer）；1 cm石英比色皿；100 mL容量瓶；25 mL容量瓶；5 mL移液管；

2010年色谱仪器新品大盘点 发布日期：[2011-2-10] 共阅[416]次

Agilent 1200 Infinity 液相色谱系列

安捷伦科技公司1200 Infinity系列包括新的Agilent 1220 Infinity LC和Agilent 1260 Infinity LC、以及增强型Agilent 1290 Infinity LC。

1200 Infinity 系列产品是色谱柱技术、仪器以及软件的完美结合，确保实现极高的工作效率。1220 和1260 Infinity LC以HPLC 的价格提供了增强的HPLC和RRLC 性能。所有 1220 和 1260 Infinity LC系统的标准配置都具有600 bar 的系统耐压、80 Hz 的数据采集速率和 2 倍或 10 倍以上的 UV 检测灵敏度。 1220 和 1260 Infinity LC 与 HPLC 方法完全兼容，确保对现有的1100 或1200系列仪器进行无风险的替换或升级。此外，全新的1260 Infinity Bio-inert四元液相色谱系统在生物分析与生物纯化领域提供最佳性能。 Waters ACQUITY UPLC H-Cla