sgRNA设计时包括PAM吗?

SgRNA设计方法

SgRNA（small guide RNA简称），是CRISPR基因敲除敲入系统中重要的组成部分，早先发现的guide RNA，由两部分组成—tracRNA和crRNA, 两部分融合表达后，即sgRNA也能很好的行使guide的功能，与cas9蛋白结合，引导cas9酶靶向基因组DNA进行剪切。

SgRNA脱靶问题一直备受关注，如何设计特异性好的靶点成为大家关注的焦点，很多实验室开发了不同的设计软件，大体原则如下：

（1）对于sgRNA的长度，一般应为20 nt左右； （2）对于sgRNA序列的碱基组成，可选3'末端含GG的sgRNA，同时sgRNA种子序列尽量避免以4个以上的T结尾，GC%含量最佳为40%~60%；

（3）sgRNA的种子序列与脱靶位点的匹配数尽可能低 （4）如果构建U6或T7启动子驱动sgRNA的表达载体，需考虑sgRNA的5' 碱基为G或GG，以提高其转录效率； （5）对于sgRNA靶向基因的结合位置，如需造成基因移码突变，需尽量靠近基因编码区的ATG下游，最好位于第一或第二外显子；

（6）检查sgRNA靶向结合位点基因组序列是否存在SNPs； （7）如采用Cas9单切口酶，设计paired-gRNA需

2013届本科生毕业设计

题目：800米第一名计时电路的设计

作 者 姓 名： xyh

学 号： 2009 系 (院): 机械与电子工程学院 专 业： 电气工程及其自动化 指导教师姓名： 曹老师 指导教师职称： 副教授

2013年 5月 1日

SuZhou University

Year 2013 Bachelor Graduation Design

800 Meter First Timing Circuit Design

Author:

Student ID:2009080404

Department: Electronic and Electrotonically Engineering

Major:Electrotonically Engineering and Automation Instructor:

Hereditas (Beijing) 2015年11月, 37(11): 1125―1136 www.chinagene.cn

综 述 CRISPR/Cas9系统中sgRNA设计与脱靶效应评估

谢胜松1，张懿2，张利生1，李广磊1，赵长志1，倪攀1，赵书红1

1. 华中农业大学，农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室，武汉 430070； 2. 中国人民解放军第161医院妇产科，武汉 430010

摘要： 基于CRISPR/Cas9系统介导的第三代基因组编辑技术，已成功应用于动物、植物和微生物等诸多物种

的基因组改造。如何提高CRISPR/Cas9技术的基因组编辑效率和最大限度降低脱靶风险一直是本领域的研究热点，而使用高效且特异的sgRNA(Small guide RNA)是基因组改造成功的关键性因素之一。目前，已有多款针对CRISPR/Cas9技术的sgRNA设计和/或脱靶效应评估软件，但不同的软件各有优缺点。本文重点对16款sgRNA 设计和脱靶效应评估在线和单机版软件的特点进行了阐述，通过制定38项评估指标对不同软件进行了比较分析，最后对11种用于检测基因组编辑效率和脱靶的实验方法，以及如何筛选高效且特异的sgRNA进行了归纳总结

2013届本科生毕业设计

题目：800米第一名计时电路的设计

作 者 姓 名： xyh

学 号： 2009 系 (院): 机械与电子工程学院 专 业： 电气工程及其自动化 指导教师姓名： 曹老师 指导教师职称： 副教授

2013年 5月 1日

SuZhou University

Year 2013 Bachelor Graduation Design

800 Meter First Timing Circuit Design

Author:

Student ID:2009080404

Department: Electronic and Electrotonically Engineering

Major:Electrotonically Engineering and Automation Instructor:

2013届本科生毕业设计

题目：800米第一名计时电路的设计

作 者 姓 名： xyh

学 号： 2009 系 (院): 机械与电子工程学院 专 业： 电气工程及其自动化 指导教师姓名： 曹老师 指导教师职称： 副教授

2013年 5月 1日

SuZhou University

Year 2013 Bachelor Graduation Design

800 Meter First Timing Circuit Design

Author:

Student ID:2009080404

Department: Electronic and Electrotonically Engineering

Major:Electrotonically Engineering and Automation Instructor:

华北水利水电学院 课程设计报告

数字电子技术课程设计

——60秒计时器

指导教师:姚淑霞、孙新娟

学院： 信息工程学院 班级： 电信120 姓名：李 晓（200912014）

秦超峰（200912029）

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华北水利水电学院 课程设计报告

60秒倒计时器的设计

一、 设计要求与任务

1、学习调试电子电路，锻炼实际动手能力。

2、理解555定时器工作原理，制作60秒计时器。

二、设计原理

1、1秒的信号用555定时器产生

其中R1、R2都是51KΩ,电容为C1=C2=9μF.

2、60秒计数器可以由两块MSI计数器构成，一块十进制，一块六进制，组合起来就构成六十进制计数器。实验室可提供的MSI计数器有T213、T217、74LS90、74LS190、74LS192、74LS160等，在这里我采用74LS190设计，74LS190是十进制同步加法/减法计数器，具有直接清零、异步置数功能。

3、减法计数器的输出经过4511译码器译码之后，传给八段数码管，显示出60秒的各个状态。

4、60秒的一个循环由或门芯片74LS32完成。实

本 科 生 毕 业 论 文 （申请学士学位）

论文题目 综合计时系统的设计 作者姓名 刘建 所学专业名称 电子科学与技术 指导教师 丁健

2011年 4 月 13 日

学 号：论文答辩日期：指 导 教 师：2007210041 2011年 月

（签字）

日

滁州学院本科毕业设计（论文）原创性声明

本人郑重声明：所呈交的设计（论文）是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。

作者签名： 刘建 2011年 4 月13 日

目录

摘要………………………………………………………………………………………………..1 Abstract…………………………………………………………………………………………….1 1. 绪论

1.1计时器发展

方案设计包括哪些内容

确定设计方案，首先要清楚设计的目的和所要达到的效果。那么，方案设计包括哪些内容呢？下面大家就随小编一起看看吧！

一定地块内总建筑面积与建筑用地面积的比值。计算建筑物的总建筑面积时，通常不包括±000以下地下建筑面积。 一定地块内所有建筑物的基底总面积占总用地面积的比例。

向公众开放，有一定游想设施的绿化用地，包括其范围内的水域。

一定地块内各类绿地面积的总和，包括公共绿地、建筑物所属绿地、道路绿地、水域等。不包括屋顶、晒台、墙面及室内的绿化。

一定地块内绿地总面积占总用地面积的比例。 设计范围内道路、公共广场、停车场用地面积的总和。 城市道路两侧控制沿街建筑物或构筑物靠临街面的界线。用建筑物后退道路红线的距离标注。也称建筑控制线。 原称施工坐标。

建筑电气包括了以往常称的\强电\、\弱电\两项内容。\强电\、\弱电\对于现代建筑电气设计，已很难将其完全分开。我国将实行的\建筑电气注册工程师\制度，也无\强电\、\弱电\之分，故现统称为建筑电气。

方案设计阶段，一般只提供设计说明书，说明书应表述本建筑物对城市公用事业的要求、拟设置的建筑电气系统情况及对环境的影响等。

关于

四川师范大学成都学院本科毕业设计

四川师范大学成都学院本科毕业设计

—篮球比赛计时计分器设计

学生姓名 学 号 所 在 系 专业名称 班 级 指导教师

通信工程系 通信工程 2010级一班

四川师范大学成都学院 二○一二年十一月

四川师范大学成都学院本科毕业设计

篮球比赛计时计分器设计

学生： 指导教师：

内容摘要：篮球比赛计时计分器是为了解决篮球比赛时计分与计时准确方便，灵活适

用的问题。此装置利用单片机AT89S52完成了计时和计分的功能。本文详细地介绍了系统硬件与软件的设计过程，采用该装置可根据实际情况进行比分修改和时间的准确显示，具有低功耗，可靠性，安全性以及低成本等特点。

关键词：单片机 篮球赛 LCD

I

四川师范大学成都学院本科毕业设计

The design of game timing and scoring device

Abstract: This ‘game timing and scoring device’ is designed to solve the

game scoring and the precision timing problem . This d

《篮球竞赛30秒定时器》课程设计

2010-11-12 14:42:15| 分类： 课程设计 | 标签： |字号大中小 订阅

《数字电子技术》课程设计报告

课题： 篮球竞赛30秒定时器

1．设计目的 2．设计要求

1、设计一个30秒计时电路，并具有时间显示的功能。 2、设置外部操作开关，控制计时器的直接清零、启动和暂停/连续计时。

3、要求计时电路递减计时，每隔1秒钟，计时器减1。

4、当计时器递减计时到零(即定时时间到)时，显示器上显示00，同时发出

光电报警信号。

3．总体设计

在篮球比赛中，规定了球员的持球时间不能超过30秒，否则就视为犯规。本课程设计的“篮球竞赛30秒定时器”，可用于篮球比赛中对球员持球时间作30秒时间限制。一旦球员的持球时间超过了30秒，它自动报警，从而判定此球

员犯规。

本设计主要能完成：显示30秒倒计时功能；系统设置外部操作开关，控制定时器的直接清零/启动和暂停/连续功能；在直接清零时，数码管显示器灭灯；定时器为30秒递减计时，其计时间隔为1秒；定时器递减计时到零时，数码管显示器不灭灯，同时发出光电报警信号等。同时本课程设计是脉冲数字电路的简

单应用，设计了篮球竞赛30秒定时器。此定时器功能