水中叶绿素a的测定

叶绿素a与叶绿素b含量的测定

叶绿素a与叶绿素 含量的测定 叶绿素 与叶绿素b含量的测定 与叶绿素

叶绿素a与叶绿素b含量的测定

实验目的和意义 叶绿素a与叶绿素b是高等植物叶绿体色素的重 要组分，约占到叶绿体色素总量的75%左右。 叶绿素在光合作用中起到吸收光能、传递光能 的作用(少量的叶绿素a还具有光能转换的作用), 因此叶绿素的含量与植物的光合速率密切相关， 在一定范围内，光合速率随叶绿素含量的增加 而升高。另外，叶绿素的含量是植物生长状态 的一个反映，一些环境因素如干旱、盐渍、低 温、大气污染、元素缺乏都可以影响叶绿素的 含量与组成，并因之影响植物的光合速率。因 此叶绿素含量a与叶绿素b含量的测定对植物的 光合生理与逆境生理具有重要意义。

叶绿素a与叶绿素b含量的测定

实验原理 叶绿素提取液中同时含有叶绿素a和叶绿素b, 二者的吸收光谱虽有不同，但又存在着明显的 重叠，在不分离叶绿素a和叶绿素b的情况下同 时测定叶绿素a和叶绿素b的浓度，可分别测定 在663nm和645nm(分别是叶绿素a和叶绿素b 在红光区的吸收峰)的光吸收，然后根据 Lambert-Beer定律，计算出提取液中叶绿素a和 叶绿素b的浓度。 A663=82.04Ca+9.2

实验三 富营养化湖中藻量的测定（叶绿素a法）

一、实验目的

富营养化湖由于水体受到污染，尤以氮磷为甚，致使其中的藻类旺盛生长。此类水体中代表藻类的叶绿素a浓度常大于10微克/升。

本实验通过测定不同水体中藻类叶绿素a浓度，以考查其富营养化情况。 二、器材与用品

1、分光光度计（波长选择大于750nm，精度为0.5－2nm）。 2、比色杯（1cm；4cm）。 3、台式离心机（3500r/min）

4、离心管（15ml具刻度和塞子）；冰箱 5、匀浆器或小研钵。

6、蔡氏滤器；滤膜（0.45微克，直径47mm）。 7、真空泵（最大压力不超过300kpa）。

8、MgCO3悬液：lg MgCO3细粉悬于100ml蒸馏水中。 9、90％的丙酮溶液：90份丙酮＋10份蒸馏水。 10、水样：两种不同污染程度的湖水水样各2L. 三、方法和步骤

1、按浮游植物采样方法，湖泊、水库采样500ml，池塘300ml。采样点及采水时间同“浮游植物”。

2、清洗玻璃仪器：整个实验中所使用的玻璃仪器应全部用洗涤剂清洗干净，尤其应避免酸性条件下而引起的叶绿素a分解。 3、过滤水样；在蔡氏滤器上装好滤膜，每种测定水样取50－500ml减压过滤。待水样剩余若干毫升之前加入0.

叶绿素含量的测定

一、原理

根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。

根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL

式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。

如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。 已知叶绿素a、叶绿素b的80%丙酮溶液在红外区的最大吸收峰分别位于663、645nm处。已知在波长663nm下叶绿素a、叶绿素b在该溶液中的吸光系数的分别为82.04和9.27；在波长645nm处的吸光系数分别为16.75和45.60。根据加和性原

叶绿素含量的测定

一、 实验目的

1. 了解分光光度计的工作原理； 2. 掌握不同型号分光光度计的操作方计；

3. 通过本实验的学习掌握叶绿素含量测定的一种常见的方法------分光光度

法。

二、 实验原理

叶绿素是脂溶性色素，主要存在于以叶绿体为首的色素体中。在活体中，叶绿素与脂蛋白结合并受到还原系统的保护，对氧和光是稳定的。

叶绿素的80%丙酮提取液在波长663nm，645nm有吸收峰，叶绿素a和叶绿素b的浓度符合以下公式：

Ca=0.0127A663-0.00259A645

Cb=0.0229A645-0.00467A663 浓度单位是：g/L

Ca=12.7A663-2.59A645

Cb=22.9A645-4.67A663 浓度单位是：mg/L

叶绿素总浓度为： CT=Ca+Cb 若以试液中色素含量来表示，则

C(mg/L)?提取液总体积(ml)叶绿素含量（mg/g鲜样）?

样品重(g)?1000

三、 仪器、试剂和材料 1. 仪器

紫外-可见分光光度计、研体、25ml容量瓶、玻璃漏斗、玻璃棒、皮头滴管 2. 试剂

丙酮（分析纯）、85%丙酮、

实验五 水中铬的测定——分光光度法 一、理论或实际意义

铬是“中国环境优先污染物黑名单”上优先监测的重金属之一。铬的化合物中Cr（六价）、Cr（三价）毒性依次减小，金属铬可以认为无毒。Cr（六价）被认为是具有致癌作用的物质，国家规定排放废水中Cr（六价）的最大允许质量浓度为0.5mg/L 二、 国内外动态

测定水中铬的方法常见的有二苯碳酰二肼分光光度法、原子吸收光度法和滴定法。自50年代至今，二苯碳酰二肼广泛地用于各种样品中痕量铬的测定，但试剂和配合物的稳定性差，随着科学技术的发展，对水中铬的预处理方法的撤销和新的测定方法不断问世。 三、 实验目的

掌握用分光光度法测定六价铬和总铬的原理和方法；熟练应用分光光度计。 四、实验原理

废水中铬的测定常用分光光度法，其原理基于：在酸性溶液中，六价铬离子与二苯碳酰二肼反应，生成紫红色化合物，其最大吸收波长为540nm，吸光度与浓度的关系符合比尔定律。如果测定总铬，需先用高锰酸钾将水样中的三价铬氧化为六价，再用本法测定。 五、实验内容：

（一）六价铬的测定

1、实验仪器：分光光度计、比色皿、50mL具塞比色管、移液管、容量瓶等。 2、实验试剂：（1+1）硫酸、（1+1）磷酸、铬标准使用液、二苯碳酰二

废水中甲醛测定

1． 方法原理

在过量铵盐存在下，甲醛与乙酰丙酮生成黄色化合物，该有色化合物在波长414nm处有最

－－

大吸收。在显色条件下表观摩尔吸光系数为7.2×103L.mol1.cm1。有色物质在3h内吸光度基本不变。化学反应式为：

OHCHOOCH2CCH3H3COCH2H3CCCCH2HCCNHCCCH2HCCH3O+NH3+2+3H2O

2． 干扰及消除

在测定条件下，水样中含有5mg/L的丙酮、丁醛、丙稀醛无干扰。乙醛在4mg/L以下无干扰。此外，当甲醛为20mg/L，苯醛为50mg/L，游离氰为1mg/L时未见干扰。 3． 方法的适用范围

本方法的最低检出浓度为0.05mg/L甲醛；测定上限为3.20mg/L。 4． 仪器

① 分光光度计 ② 恒温水浴

③ 0~100℃温度计 5.试剂

① 4%氢氧化钠溶液

② （1+5）硫酸溶液；3%硫酸溶液。 ③ 碘标准溶液（1/2I2=0.05mol/L）：称取20g碘化钾溶于少量蒸馏水，假如6.35g碘，

待溶解后，稀释至1000mL。 ④ 重铬酸钾标准溶液（1/6K2CrO7=0.050mol/L）：准确称取经105~110℃烘干2h的重铬

酸钾2.4516g于烧杯中，用水溶解后移入1

水中总硬度的测定 (螯合滴定法) 螯合滴定法)

一、目的要求1、掌握配合滴定法的基本原理和方法; 掌握配合滴定法的基本原理和方法; 通过铬黑T指示剂的应用， 2、通过铬黑T指示剂的应用，了解金属 指示剂的特点和使用条件。 指示剂的特点和使用条件。 学习水质硬度的测定方法。 3、学习水质硬度的测定方法。

二、实验原理配合滴定：利用配合反应进行物质含量测定的 配合滴定 分析方法。由于通常采用的配合剂是氨羧配合 剂，它们与金属离子发生螯合反应，生成稳定 的螯合物，因此又称为螯合滴定法 螯合滴定法。 螯合滴定法 氨羧配合剂：乙二胺四乙酸二钠盐 (EDTA) 氨羧配合剂

EDTA标定的基准物： CaCO3 标定的基准物： 标定的基准物 指示剂：金属指示剂， 指示剂：金属指示剂，能与金属离子生成与其本身 具有明显不同颜色的配合物而指示终点。 具有明显不同颜色的配合物而指示终点。 铬黑T 铬黑T pH 7~11:M2+ + HIn2:(蓝色) 蓝色)

MIn- + H+(红色) 红色)4

CaY2- > MgY2- >MgIn- > CaInMg2+ + HIn2(蓝色) 蓝色)

MgIn- + H+(红色) 红色)

Ca2+ + HIn2H2Y2-

水中总硬度的测定 (螯合滴定法) 螯合滴定法)

一、目的要求1、掌握配合滴定法的基本原理和方法; 掌握配合滴定法的基本原理和方法; 通过铬黑T指示剂的应用， 2、通过铬黑T指示剂的应用，了解金属 指示剂的特点和使用条件。 指示剂的特点和使用条件。 学习水质硬度的测定方法。 3、学习水质硬度的测定方法。

二、实验原理配合滴定：利用配合反应进行物质含量测定的 配合滴定 分析方法。由于通常采用的配合剂是氨羧配合 剂，它们与金属离子发生螯合反应，生成稳定 的螯合物，因此又称为螯合滴定法 螯合滴定法。 螯合滴定法 氨羧配合剂：乙二胺四乙酸二钠盐 (EDTA) 氨羧配合剂

EDTA标定的基准物： CaCO3 标定的基准物： 标定的基准物 指示剂：金属指示剂， 指示剂：金属指示剂，能与金属离子生成与其本身 具有明显不同颜色的配合物而指示终点。 具有明显不同颜色的配合物而指示终点。 铬黑T 铬黑T pH 7~11:M2+ + HIn2:(蓝色) 蓝色)

MIn- + H+(红色) 红色)4

CaY2- > MgY2- >MgIn- > CaInMg2+ + HIn2(蓝色) 蓝色)

MgIn- + H+(红色) 红色)

Ca2+ + HIn2H2Y2-

实验一 碘量法测定水中的DO

溶解在水中的分子态氧称为溶解氧。天然水的溶解氧含量取决于水体与大气中氧的平衡。溶解氧的饱和含量和空气中氧的分压、大气压力、水温有密切关系。清洁地面水溶解氧一般接近饱和。由于藻类的生长，溶解氧可能过饱和。水体受有机、无机还原性物质污染，使溶解氧降低。当大气中的氧来不及补充时，水中溶解氧逐渐降低，以至趋近于零，此时厌氧菌繁殖，水质恶化。废水中溶解氧的含量取决于废水排出前的工艺过程，一般含量较低，差异很大。

一、方法的选择

水样有色或含有氧化性及还原性物质、藻类、悬浮物等干扰测定。氧化性物质可使碘化物游离出碘，产生正干扰；某些还原性物质可把碘还原成碘化物，产生负干扰；有机物（如腐植酸、丹宁酸、木质素等）可能被部分氧化，产生负干扰。所以大部分受污染的地面水和工业废水，必需采用修正的碘量法或膜电极测定。

（1）清洁水可直接采用碘量法测定；

（2）水样中亚硝酸盐氮含量高于0.05mg/L，二价铁低于1mg/L时，采用叠氮化钠修正法. 此法只用于多数污水及生化处理出水；

（3） 水样中二价铁高于1mg/L时，采用高锰酸钾修正法；

（4） 水样有色、藻类及消耗碘的悬浮物，采用明矾絮凝修正法；

（5） 水样中含有活性污泥及悬浊物的

废水中主要组分的测定

1 总铁含量的测定

由于盐酸酸洗废液中总铁含量较大，釆用邻菲啰啉分光光度法测定需稀释很大倍数，易造成误差扩大，故选用三氯化钛法测定全铁含量。

1) 测定原理

在酸性溶液中, 滴加三氯化钛溶液将三价铁离子还原为二价, 过量的三氯化钛会将钨酸钠指示剂进一步还原使溶液呈现蓝色, 在铜盐的催化下, 利用水中的溶解氧氧化过量的三氯化钛,待溶液蓝色消失后, 即以二苯胺磺酸钠为指示剂, 用重铬酸钾标准溶液滴定（注意：这是废水中可能存在三价铁离子时的滴定方法，若废水是新排出的或和铁屑刚刚反应完的，可以忽略其中的三价铁离子，直接使用二苯胺磺酸钠为指示剂, 用重铬酸钾标准溶液滴定）。

反应方程式为:

Fe3+ + Ti3+ = Fe2+ + Ti4+

6Fe2+ + Cr2O72- + 14H+ = 6Fe3+ + 2Cr2+ +7H2O

2) 测定方法

称取约0.2-0.3 g试样, 精确至0.0002 g, 置于250mL锥形瓶中, 依次加入盐酸溶液10mL、硫酸溶液10mL和25g/L钨酸钠指示剂1 mL。逐滴加入三氯化钛溶液并不断摇动, 直至溶液刚好出现蓝色为止。用蒸馏水冲洗瓶壁, 并稀释至约150 mL, 加入两滴5 g/L硫酸