细胞冻存和复苏为什么要慢冻快融?

细胞的冻存

细胞深低温保存的基本原理是：在－70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键，在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内，水晶呈针状，极易招致细胞的严重损伤。 总的原则是缓慢冻存！！！ 一 材料：

生长良好之培养细胞，新鲜培养基，DMSO，无菌塑料冷冻保存管，血球计数盘与盖玻片。

二步骤：

2.1 冷冻前一日前更换半量或全量培养基，观察细胞生长情形，最好细胞应该处于对数生长期。 2.2. 配制冷冻保存溶液(使用前配制)：将DMSO加入新鲜培养基中，最后浓度为5–10％，混合均匀，置于室温下待用。避免因临时配制产热而伤害细胞。

2.3. 依细胞继代培养之操作，收集培养之细胞与冻存管内，取少量细胞悬浮液(约0.1 mL)计数细胞浓度。

2.4. 先将冻存管放入4℃冰箱，约40min。

2.5 接着置于–20℃冰箱，约30–60min。20 °C 不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入–80°C 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 2.6. 置于–80超低温冰箱中放置过夜。 2.7. 置于液氮罐中长期保存。

2.8 同时做好冻存记录，在自己的笔

细胞冻存与复苏

细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是无限的。细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。

细胞的冻存 【用品】

（1） 5%胰蛋白酶

（2） 含10%~20%血清培养液

（3） DMSO（分析纯）或无色新鲜甘油（15磅蒸汽高压消毒） （4） 吸管、离心管、冻存管 【步骤】

（1） 从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但最好为对数生长期细胞，已经长满的细胞冻存后生存率低。在冻存前一天最好换一次培养液。

（2） 用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则不需处理。依据传代方法把消化好的细胞收集于离心管并计数，离心。

（3） 去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入配制好的冻存培养液（含10%DMSO或甘油），冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml~1×107/ml。用吸管轻轻吹打使细胞均匀，然后分装入无菌冻存管中。

（4） 装完细胞后的冻存管即可直接冻存。以本教研室对L929的冻存程序作为大家进行细胞冻存的参考：将冻存管放入4℃冰箱 2hr；-20℃冰箱2hr；液氮表面过夜。以后取出冻存管移入液氮容器内。在放入液氮时，要带手套操作以免冻伤。

篇一：为什么要春捂

“春捂”就是说在春季，气温刚转暖时，不要过早脱掉棉衣，使身体产热散热的调节与冬季的环境温度，处于相对的平衡状态。由冬季转入初春，乍暖还寒，气温变化又大。俗话说“春天孩子儿脸，一天变三变”。过早脱掉棉衣，一旦气温降低，给宝宝的神经系统、体温调节中枢来个突然袭击，会使其措手不及，难于适应，会使身体抵抗力下降。同时进入春季，病菌大量繁殖，乘虚侵袭宝宝机体，容易引发各种呼吸系统疾病及冬春季传染病。

宝宝春捂，你“捂”对了吗？

家里有老人帮着带孩子的妈妈经常会听到一些“老话儿”，有时听着有道理，有时却让人感到疑惑。这些老理儿到底有没有道理呢？

春天最常听到的老话就是“春捂秋冻”了，但是我觉得小孩子火气大，是不是不能捂得太厉害了？况且，捂得太多了，孩子流汗后不是更容易感冒吗？

儿童对于温度的自身调节能力较差，一旦打破平衡的环境，病菌、病毒容易乘虚袭击机体，引发各种疾病。但的确如这位妈妈所说，孩子要“捂”也得“捂”得正确：

把握时机许多疾病的发病高峰与冷空气南下和降温持续的时间密切相关。比如感冒、消化不良，在冷空气到来之前便捷足先登。因此，捂的最佳时机，是在气象台预报的冷空气到来之前24－48小时，再晚便是“雪后送炭”了。

把握气温 15℃是“春捂”

甘油、DMSO细胞冻存液冻存效果的比较实验研究

【摘 要】目的采用两种不同的细胞冻存液对Vero细胞的冻存效果进行研究。方法 本实验主要研究甘油和二甲基亚砜这两种细胞冷冻保护剂，以及他们与血清、基础培养基的不同配比与细胞冻存效果之间的关系。 结果发现不同的细胞冻存液在一定的所占比例内与细胞复苏后的成活率有一定的相关性，即在一定比例的冷冻剂保护下，细胞冻存的效果才会达到最佳。结论保护剂，无论是DMSO，还是甘油，其比例只有在10%-15%之间，细胞复苏后的成活率才达到最佳状态，即有利于细胞的冻存。且冷冻解冻后的细胞呈现正常的分裂增殖生长模式。

【关键词】DMSO；甘油；Vero细胞；细胞冻存

细胞培养是研究活组织和活细胞的良好方法。长期传代势必会影响细胞对微生物及一些有害有毒物质没有抵抗能力，也会造成资源浪费[1]。目前最常用的细胞冻存剂是DMSO和甘油，因此本实验主要研究这两种冷冻保护剂对细胞冻存效果的比较。本研究以DMEM为细胞培养液， 以DMSO或甘油作为冷冻保护剂，并添加胎牛血清组成冷冻保护液[2-3]，通过两种冻存液的不同配方及其不同配比对细胞冻存效果的比较采取最佳冷冻保护剂的比例将细胞冻存，为以后的工作提供更多便利，同时也节省了大

常用字生物标本处理办法

一般的生物标本包括有：

血液、体液、内脏器官、粪便、胃液、活检组织、组织提取液、天然孔分泌物及各种表达系统的表达产物等

一般为无菌操作，低温保存（-80℃、液氮）

一．如果采集的实质器官则要求： 1、 器官实质不能太小

2、 以采集实质性病灶区为佳：如淋巴结、心脏、非、肺、脾以及肠管等病毒、病菌聚集的

地方为佳

3、 同一病例装入同一容器，并做好标记 4、 应在0-8℃的低温储存和运输 5、 实质性器官的处理：

5.1、取实质性器官约0.5mg左右，充分剪碎或研磨 5.2、加入约500ml的PBS/生理盐水，充分混匀 5.3、离心5000rmp x10min，去上清

5.4、-20℃保存，作为待检标本（切勿反复冻融）

二．体液（常见的包括血清、血浆、唾液以及尿液等）的处理方式

1、血液包括血浆和血清，它们的主要区别就是：血清凝血而血浆不凝血，所以它们的处理方式也就不一样

1.1、采集血浆时一般不加抗凝剂（主要为枸橼酸眼和柠檬酸盐），采集后立即离心800-1000rmp x 5min分离，取上清，-20℃或4℃保存备用；

1.2、如要采集血清，一般要加入总体积1%的抗凝剂，采集后先室温或4℃静置半小时后，800-10

常用字生物标本处理办法

一般的生物标本包括有：

血液、体液、内脏器官、粪便、胃液、活检组织、组织提取液、天然孔分泌物及各种表达系统的表达产物等

一般为无菌操作，低温保存（-80℃、液氮）

一．如果采集的实质器官则要求： 1、 器官实质不能太小

2、 以采集实质性病灶区为佳：如淋巴结、心脏、非、肺、脾以及肠管等病毒、病菌聚集的

地方为佳

3、 同一病例装入同一容器，并做好标记 4、 应在0-8℃的低温储存和运输 5、 实质性器官的处理：

5.1、取实质性器官约0.5mg左右，充分剪碎或研磨 5.2、加入约500ml的PBS/生理盐水，充分混匀 5.3、离心5000rmp x10min，去上清

5.4、-20℃保存，作为待检标本（切勿反复冻融）

二．体液（常见的包括血清、血浆、唾液以及尿液等）的处理方式

1、血液包括血浆和血清，它们的主要区别就是：血清凝血而血浆不凝血，所以它们的处理方式也就不一样

1.1、采集血浆时一般不加抗凝剂（主要为枸橼酸眼和柠檬酸盐），采集后立即离心800-1000rmp x 5min分离，取上清，-20℃或4℃保存备用；

1.2、如要采集血清，一般要加入总体积1%的抗凝剂，采集后先室温或4℃静置半小时后，800-10

围绕siRNAs的相关实验详细步骤及总结

实验一：细胞传代培养

材料：15ml离心管、枪（头1ml、200ul、10ul）、无菌吸管、培养瓶、含10?S的RPMI—1640(OVCAR-3)、M5A(SKOV-3)、PBS、trypsin等

步骤：（以下均在超净台内，酒精灯旁操作）（SKOV-3）

1、打开超净台，将离心管、枪（头）、吸管等工具置于紫外线下照射30min；含10?S的RPMI—1640、trypsin、PBS放在37°C水浴恒温箱中预热。

2、取一个生长良好的细胞培养瓶（密度适中，细胞成梭形连接，贴壁良好），弃旧培养基，PBS 2ml 清洗2次（切勿用力吹打）。

3、用移液枪取trypsin 1ml沿细胞生长壁对侧壁注入，然后放平培养瓶，使贴壁细胞与trypsin充分接触，置于CO2培养箱2min左右（时间不能太长，以免损伤细胞）。

4、往培养瓶中加入1640 1~2ml，随后用移液枪将悬液移到15ml离心管中，离心1000 r/min，5min。

5、弃上清液，加入少量10?S的1640培养基使成细胞悬液。

6、分装，按1:2~3传代，每瓶4~5ml。倒置显微镜下观察（细胞突起消失变圆

FD：真空冷冻干燥技术

一．什么是FD？

“FD”：中文全称真空冷冻干燥，在约零下30-50度低温下，真空状态下利用升华原理，使预先冻结食品中的水分不经过冰的融化，直接以冰态升华为水蒸汽被除去，从而使食品干燥。

二．冻干技术使用历史

FD冻干技术，起源于19世纪20年代，首先由俄罗斯的科学家，在实验室进行FD产品的小型试验，获得成功。冻干技术的诞生，使宇航员在太空工作期间食品的保鲜和营养问题得到根本解决，被俄罗斯、美国以及我国的航天领域所应用，因此也叫宇航冻干技术。在经历了几十年的起伏与徘徊后，在20多年中取得了长足的发展。国内FD技术的发展高峰是在2000年左。

三．冻干果蔬的生产工艺流程

原料选择→整理→预冻结→升华干燥→后处理→包装、贮藏。

四．冻干食品的特点

由于冻干食品避免了传统脱水技术方法带来的变色、变味、营养成分损失大、复水性差等缺陷，具有保持食品形、色、香、味、营养不变、复水性好、重量轻、可常温贮藏等优点。因此，冻干食品在国际市场的价格是热风干燥食品4-6倍，是速冻食品7-8倍。它在登山、航海、探险、军队野战等特殊场合中具有不可替代的地位，也是宇航员在太空中的主要食品。

五．冻干食品的发展

目前国内拥有FD冻干设备的

第一章 为什么要拜拜？ 为什么要拜拜？

理由很简单，有灾可以消灾解厄，无事还可保平安、发大财，外加发挥孝道怀念祖先，这么好的事，为什么不拜？警察破案要拜拜，电影开拍要拜拜，工地破土要拜拜，过年过节要拜拜，婚丧喜庆要拜拜，祭袓扫墓也要拜拜；对中国人而言，拜拜已经跨越了宗教信仰的范畴，成为文化的一部份。不管信不信教，信什么教，拜拜总能使人心安。透过拜拜，中国人得以和袓先、神、鬼和谐相处，这是一种互惠的沟通方式，人们按时的祭拜仪式，提醒着衪们别忽略对人的庛护，其真实性呢？无论科学印证的结果如何，正所「心诚则灵」， 拜拜的效果犹如「潜能开发」， 可以唤起人心深处的强大能量，并呼应瀚未知的大自然，而形成某种坚定的气势。

拜拜是属于道教的仪式，而道教乃是唯一由中国人创立的宗教。道教的学术思源自于公元前四、五千年的三皇五帝以至黄帝时期，再历经公元前两千二、三百年的尧、舜、禹三代；到了公元前一千七、八百年的商汤至西周间则是儒、道不分家。直至春秋战国时期，约当公元前七百余年，道教与道家学术思想才开始分野。魏晋南北朝时，因为佛教的输入中国，促使中国人自觉该建立自己的宗教，终于在唐代开国时，正式宣布道教为李唐时代的国教。

道教之所以在唐朝能与佛教分庭抗礼，同

为什么要大声读书

早、午、晚读时，有人大声诵读、有人小声读、有人在默读。千恣百态，效果各异。现择名人巨匠、成功人士对大声读书的心得教育后生，望领悟实施。 如下是大声读书的好处：

1、可以提高专注的程度。大声读书也有提高专注程度的作用，如果您觉得读书一直无法专心，请你读出声来，一会儿你就会更专心了！

2、可以排除杂念。其实我们在读书的时候常常是散心杂念的，如果你可以学会大声读书的方法，那么不专心的问题大约可以解决一大半，如果每天都确实地做到，我相信不用多久，你的进步可以很明显地看出来。 3、可以提振精神。大声读书可读到全身发热，那么就有达到提振精神的效果了。 4、结合口到和心到。只是用嘴巴读，有时会像“小和尚念经”一样，有口无心。不过大声读书就不同了，您想不用心都不行，因为您的精神力、专注力都提升了，自然心口都会合一，而达到口到与心到结合的目的。

5、大声读书，倾听自己的声音，能给自己带来自信，获得充实和满足感。 6、一夜好睡，早上头脑清静，思路清晰，记忆效率高，大声读书有利于理解和记忆知识；

7、大声读书，眼、耳、手、口、脑各种记忆器官的综合运用，有利于良好学习习惯的形成和智力的开发；

8、早上大声读书，调动了口腔、鼻腔、喉咙、肺部、胸腔