化学发光免疫分析的原理

化学发光免疫分析陈仓医院检验科：

一、化学发光免疫技术的概念 二、化学发光免疫分析基本原理 三、化学发光免疫分析的类型 四、临床应用 五、发展与展望

一、化学发光免疫技术的概念化学发光免疫技术：化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光 的强度来确定物质含量的分析方法。化学发光免疫分析是将化学发光 系统与免疫反应相结合，用化学发光相关的物质标记抗体或抗原，与 待测的抗原或抗体反应后，经过分离游离态的化学发光标记物，加入 化学发光系统的其它相关物产生化学发光，进行抗原或抗体的定量或

定性检测。

化学发光免疫分析 (Chemiluminescence Immunoassay,CLIA)是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析。它 具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污

染、仪器简单经济等优点。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者，是免疫分析重要的发展方向。CLIA发展迅猛，已占各种免疫 分析的首位，是目前放射免疫分析和酶联免疫分析最佳的取代者。

是目前世界公认先进的标记免疫测定技术，化学发光 免疫分析技术具有高度的准确性和特异性，成为检验方法 中最为重要的技术之一。化学发光免疫分析技术作为疾病 诊断的主要手段已被广泛用于机

常见化学发光免疫分析技术比较

1、化学发光免疫分析

化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay，CLIA)， 英音：[,kemi,lju:mi'nes?ns] [,imju:n?u?'sei]

是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。

CLIA是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。

1.1、化学发光免疫分析原理

化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hv) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直

PATHFAST?化学发光免疫分析仪

仪器性能：

日本三菱研发的PATHFAST?化学发光免疫分析系统是一个全自动的，精确全定量的免疫分析系统。它快速，简便的操作使它既适合用于临床实验室，同时也是床边快速检测的理想选择。其快速的，平行多参数检测正是床边检测的最佳先决条件。17分钟完成5个心功能标志和一个血栓标志检测，也可根据临床需要自由选择一个或多个检测，使这台设备成为心血管科，急诊科，以及重症监护等多个临床科室的最佳选择。

快速平行处理

6个平行独立的检测通道，同步定量分析。17分钟呈现6个检测结果。无论是同一样本的多个参数检测，或是不同样本的不同参数检测，速度都一样。PATHFAST?这唯一独特的速度，为临床带来了快速，方便，灵活的诊断手段。

概念和应用

简洁，轻便的设计使得PATHFAST?分析系统适用于临床实验室，也适用于急诊实验室和床边检测。空间节省和优化的机动性设计，及可直接采用全血检测，让床边检测成为可能，而其快速，精确的定量检测更能等同，甚至优于实验室大型全自动分析系统。PATHFAST?分析系统也是中心实验室主要分析设备的一个理想的补充。它可在任何时候进行小量或批量检测，而不影响其它常规检验分析的正常进行。

设备和网络

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本文根据各化学发光免疫分析方法所使用标记物质的不同,将化学发光免疫分析方法分为化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法,并对各方法经典标记物质及分析方法原理进行了分析。同时,介绍了化学发光免疫分析方法在医学检验、食品安全及环境科学方面的应用进展情况。

本文由：华夏学术传媒网 提供

摘 要：本文根据各化学发光免疫分析方法所使用标记物质的不同，将化学发光免疫分析方法分为化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法，并对各方法经典标记物质及分析方法原理进行了分析。同时，介绍了化学发光免疫分析方法在医学检验、食品安全及环境科学方面的应用进展情况。

关键词：化学发光免疫分析；分类；研究进展

化学发光是在常温下由化学反应产生的光的发射。其发光机理是：反应体系中的某些物质分子，如反应物、中间体或者荧光物质吸收了反应释放的能量而由基态跃迁到激发态，当中间体由激发态回到基态时会释放等能级的光子，对光子进行测定而实现定量分析［1］。

化学发光免疫分析方法是将化学发光与免疫反应相结合的产物，因化学发光具有荧光的特异性，但与荧光产生需要激发光不同，化学发光由化学反应产生光强度，并不需要激发光，从而避免了荧光分析中激发光杂散光的影响。化学发光免疫

浅谈化学发光免疫分析的研究进展

建立在放射免疫分析技术理论基础上的化学发光免疫分析，是一种非放射标记免疫分析法，这种免疫分析方法主要以标记发光剂为示踪物信号建立起来。近十年来在世界范围内发展迅速，它具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染、仪器简单经济等优点。

1 化学发光免疫分析技术的研究历史背景

免疫分析的发展伴随着抗体制备技术的改进而不断提高。美国科学家Yalow等人首先将标记技术引入免疫分析，他们首先用放射免疫分析法(RIA)进行测定胰岛素。由于这种试验方法限制了试剂的寿命，难以获得长期稳定的检测标准，同时由于存在同位素的使用，不仅会损害操作人员身体健康，也会带来污物处理困难的问题。为了找到更为合理的免疫分析法成为以后20年来研究的热点。直到70年代末，国外有学者将免疫反应与化学发光测定技术相结合，这种集高灵敏度和高特异性的技术称之为化学发光免疫分析法，化学发光免疫技术优势比较明显，主要有以下几点：第一，灵敏度高，检测限范围更精准;第二，自动化程度高，并且没有放射性辐射危害;第三，发光标记物稳定，有效期长，同时应用范围宽，对于分子大小不同的抗原、半抗原及抗体都可检测。因此，化学发光免疫分析在临床、卫生

美国贝克曼库尔特

化学发光免疫分析临床应用手册

【2012版】

贝克曼库尔特商贸（中国）有限公司

广州市沃克贸易有限公司(粤北总代理)

前 言

标记免疫分析实现了医学生物学超微量的分析，对许多疾病的临床诊断、危险分层、治疗方案选择和预后评估具有重大意义。

化学发光免疫分析技术发展于上世纪90年代，通过对标记的化学发光物质发光的控制及测量，检测相应的生物标志物，因具有灵敏度高、检测快速、试剂稳定无生物毒性、易全自动化，成为非放射性免疫分析技术中最具有发展前景的方法之一。

美国贝克曼库尔特是这一检测技术领域的先锋，其系列发光免疫分析系统采用最新的第三代辉光型发光物质-AMPPD，结合优秀的仪器设计，以方法学先进、灵敏度高（可达10mol/L）、线性范围宽、菜单丰富和检测速度快等优点，成为现代临床诊断的有力助手！

手册旨在对其临床应用起抛砖引玉的作用，鉴于收集的资料及经验有限，不足之处在所难免，恳请有关专家和同道批评指正。

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甲状腺功能

总三碘甲状腺原氨酸（T3）

总甲状腺素（T4）

游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）

游离甲状腺素（FRT4）

促甲状腺激素（超敏）（hTSH）

甲状腺球蛋白（Tg）

抗甲状腺球蛋白抗体（ThgAb）

甲状腺激素摄取率（TU）

抗甲状腺过氧化物酶抗体（

电化学发光的基本原理

电化学发光免疫测定（ECLI ）是一种在电极表面由电化学引发的特异性发光反应，包括电化学和化学发光两个部分。分析中应用的标记物为电化学发光的底物三联吡啶钌或其衍生N- 羟基琥珀酰胺（NHS）酯，可通过化学反应与抗体或不同化学结构抗原分子结合，制成标记的抗体或抗原。ECLL 的测定模式与ELISA 相似。

基本原理：发光底物二价的三联吡啶钉及反应参与物三丙胺在电极表面失去电子而被氧化。氧化的三丙胺失去一个H+而成为强还原剂，将氧化型的三价钌还原为激发态的二价钌，随即释放光子而恢复为基态的发光底物。医学教育网搜|集整理这一过程在电极表面周而复始地进行，不断地发出光子而常保持底物浓度的恒定。

电化学发光是化学发光方法与电化学方法相互结合的产物，是指通过电化学方法来产生一些特殊的物质，然后这些电生的物质之间或电生物质与其它物质之间进一步反应而产生的一种发光现象。

电化学发光保留了化学发光方法所具有的灵敏度高、线性范围宽、观察方便和仪器简单等优点；同物时具有许多化学发光方法无法比拟的优点，如重现性好、试剂稳定、控制容易和一些试剂可以重复使用等优点，广泛地应用于生物、医学、药学、临床、环境、食品、免疫和核酸杂交分析和工业分析等领域。在21

罗氏电化学发光原理

电化学发光免疫分析原理杨明忠 12/2014

罗氏电化学发光原理

免疫检测技术的发展 电化学发光系统及其原理 电化学发光技术的优势

罗氏电化学发光原理

免疫检测技术的发展 电化学发光系统及其原理 电化学发光技术的优势

罗氏电化学发光原理

技术创新领先的免疫检测新技术-ECL

电化学发光

放免

酶免 荧光免疫 化学发光

1960‘S

1970~80‘S

2000‘S

1,抗体技术的革命，从使用多克隆抗体向使用单克隆抗体转变 2,从手工操作向全自动分析仪的转变 3,从液相放射免疫技术向均相和固相免疫分析技术的转变

罗氏电化学发光原理

放射免疫测定法1959年Berson和Yalow建立了放射免疫分析方法(RIA),大大提高了 免疫测定的敏感度，这种标记免疫测定开拓了医学检验的新领域 。

缺点半衰期短，试剂货架期不长。 标记物不断变化，试剂批间、批内变化大，标准曲线不能保存。 反应时间长，操作步骤很难自动化。 使用放射性核素，对人体有一定的危害性。 分析的限度为 10 mol/ml 或 10 g/ml。

在一定时期内曾被采用，正在被逐步取代。

罗氏电化学发光原理

酶免疫测定法1971年Engvall和Perlman建立了固相酶免疫测定方法(EL

罗氏电化学发光原理

电化学发光免疫分析原理杨明忠 12/2014

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免疫检测技术的发展 电化学发光系统及其原理 电化学发光技术的优势

罗氏电化学发光原理

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罗氏电化学发光原理

技术创新领先的免疫检测新技术-ECL

电化学发光

放免

酶免 荧光免疫 化学发光

1960‘S

1970~80‘S

2000‘S

1,抗体技术的革命，从使用多克隆抗体向使用单克隆抗体转变 2,从手工操作向全自动分析仪的转变 3,从液相放射免疫技术向均相和固相免疫分析技术的转变

罗氏电化学发光原理

放射免疫测定法1959年Berson和Yalow建立了放射免疫分析方法(RIA),大大提高了 免疫测定的敏感度，这种标记免疫测定开拓了医学检验的新领域 。

缺点半衰期短，试剂货架期不长。 标记物不断变化，试剂批间、批内变化大，标准曲线不能保存。 反应时间长，操作步骤很难自动化。 使用放射性核素，对人体有一定的危害性。 分析的限度为 10 mol/ml 或 10 g/ml。

在一定时期内曾被采用，正在被逐步取代。

罗氏电化学发光原理

酶免疫测定法1971年Engvall和Perlman建立了固相酶免疫测定方法(EL

雅培(Abbott) AxSYM

雅培(Abbott)公司Axsym全自动微粒子酶免疫化学发光仪是集微粒子酶免分析技术(MEIA)、离子捕获免疫分析技术（ICIA）、荧光偏振免疫分析仪技术（FPLA）三种先进技术于一体的先进仪器，不同方法的结合使用，扩大了检测范围，并可根据不同被检测物的特点设计不同的反应步骤，具有灵敏度高、线性范围宽、检测速度快及检测项目齐全等特点。

Axsym(雅培化学发光仪)简易维修手册

http://www.doc88.com/p-6661637955883.html

全自动化学发光免疫分析仪（雅培Axsym）操作

http://www.doc88.com/p-7803709690226.html 全自动化学发光免疫分析仪（雅培Axsym）操作

http://www.doc88.com/p-7478875715794.html

Axsym(雅培化学发光仪)简易维修手册

http://www.doc88.com/p-9317129686762.html

美国雅培i2000化学发光法

发光免疫分析法是将发光反应与免疫反应相结合而产生的一种免疫分析法。我科引进美国雅培i-2000全自动化学发光免疫