反转录pcr与常规pcr的异同

“反转录pcr与常规pcr的异同”相关的资料有哪些？“反转录pcr与常规pcr的异同”相关的范文有哪些？怎么写？下面是小编为您精心整理的“反转录pcr与常规pcr的异同”相关范文大全或资料大全，欢迎大家分享。

反转录PCR-步骤和方法

标签：文库时间：2024-10-04

【bwwdw.com - 博文网】

反转录PCR

科技名词定义

中文名称：

反转录PCR

英文名称：

reverse transcription PCR;RT-PCR

定义：

扩增mRNA的一种实验技术。先将mRNA反转录成cDNA，然后再以cDNA为模板，用PCR方法加以扩增。

应用学科：

遗传学（一级学科）；基因组学（二级学科）

以上内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布目录

一、反转录酶的选择

二、合成cDNA引物的选择三、操作步骤四、注意事项

RT-PCR反应原理

反转录PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）又称为逆转录PCR。其原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、

[1]

合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。 RT- PCR（Reverse

Transcription-Pol

查看全文

反转录PCR-步骤和方法

标签：文库时间：2024-10-04

【bwwdw.com - 博文网】

反转录PCR

科技名词定义

中文名称：

反转录PCR

英文名称：

reverse transcription PCR;RT-PCR

定义：

扩增mRNA的一种实验技术。先将mRNA反转录成cDNA，然后再以cDNA为模板，用PCR方法加以扩增。

应用学科：

遗传学（一级学科）；基因组学（二级学科）

以上内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布目录

一、反转录酶的选择

二、合成cDNA引物的选择三、操作步骤四、注意事项

RT-PCR反应原理

[1]

合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。 RT- PCR（Reverse

Transcription-Pol

查看全文

反转录PCR操作手册1

标签：文库时间：2024-10-04

【bwwdw.com - 博文网】

RT-PCR实验步骤

一．实验器具：

1.移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2.5μl 2.吸头：1ml、200μl、20μl 3.匀浆管：5ml

4.EP管：1.5ml、500μl、200μl

5.试剂瓶：棕色试剂瓶(广口，放75%乙醇) 6.量筒：100ml 7.容量瓶：1000ml

8.试管架：5ml、1.5ml、20μl 9.铝制饭盒：1-2个 10.大瓷缸：1个 11.锡泊纸：一卷 12.卷纸：2卷

13.三角烧瓶：带盖，稍大

二．实验器具处理

1.塑料制品：(包括枪头、EP管、匀浆管等)先将DEPC水从容量瓶中倒入瓷缸中，将塑料制品逐个浸泡其中(注意：小枪头要充分浸泡，必要时需要针筒打入DEPC水)，过夜后取出(注意：DEPC水很难自然晾干，所以建议先将刚取出的DEPC物品甩干，枪头装入枪头盒后甩干，EP管和匀浆管装入饭盒后甩干，然后在37度孵箱烘干)。高压后烤干备用。如果DEPC处理过的物品时间已超过一个星期，再次使用前应再次高压。

2.玻璃制品：泡酸过夜，冲洗干净，先泡1‰DEPC过夜，再蒙锡纸烤干备用。 3.匀浆器：(包括剪刀、镊子)先洗净后，超声消毒即可(不需要泡DE

查看全文

日本TAKARA公司逆转录和定量PCR体系

标签：文库时间：2024-10-04

【bwwdw.com - 博文网】

逆转录PCR

反应体系如下表： 5×PrimerScript Buffer PrimerScript RT Enzyme Mix Random 6 mers (100 μM) Oligo dT Primer (50 μM) Total RNA RNase Free dH2O Total 反应条件：

37 ℃，15 min逆转录反应；85 ℃，5 s逆转录酶的失活反应；4℃，反应结束，产物为cDNA。若短期内不使用cDNA，应将其放于－80 ℃冰箱保存备用。

荧光定量PCR

反应体系如下表：

SYBR? Premix Ex TaqTM( 2×) PCR Primer Forward、 Reverse (10 μM) Rox

RNase Free dH2O cDNA template Total 反应条件：

95 ℃预变性30 s，95 ℃变性5 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共40个循环。扩增产物于4 ℃冰箱保存。

0.5 μL 9 μL 2 μL 25 μL 12.5 μL 各0.5 μL

2 μL 0.5 μL 0.5 μL 0.5 μL

(500 ng/RNA的浓度) μL

补至10 μL

10 μL

查看全文

DMSO in PCR

标签：文库时间：2024-10-04

【bwwdw.com - 博文网】

1. 如果要增加特异性，要考虑是否升温，复性时候的较高温度有利于筛选特定片段，减少其他GC丰富片段的竞争。

2. 考虑使用甘油：加甘油也可以的,一般终浓度在10%左右.我的实验也曾遇到过GC高达73%的情况,加过甘油非特异性改善了很多,你不妨试一下.

3. 使用甜菜碱：

DMSO can usually give results in GC-rich regions when used at a final

concentration of 5%, although there are reports in the literature of

genes which required 10% DMSO, so a bit of experimentation may be

necessary to optimise the concentration for your genes. Alternatively,

addition of Betaine to concentrations of 1M in reactions can also be

beneficial in GC-rich regions.

There was a comparison pub

查看全文

PCR步骤

标签：文库时间：2024-10-04

【bwwdw.com - 博文网】

RT-PCR实验步骤

一、总RNA提取

1）试剂配制

1. 0.1TPC水：1000mL双蒸水中加入1mLDEPC，室温下静置4小时。（①用来泡使用

器具处理12小时；②在120℃下高压灭菌30分钟后室温放置备用用来溶解RNA。） 2. 氯仿 3. 异丙醇

4. 75%乙醇：用无水乙醇和高压后的DPEC水配制，现配现用。

2）操作步骤：

1. 样品处理

a. 组织：将组织放在液氮中磨碎（低温处理）。每50-100mg组织加1mL裂解液TRZOL，

用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过裂解液TRZOL体积的十分之一。 b. 单层培养细胞；直接在培养板上加入裂解液TRZOL裂解细胞，每10cm2面积加1mL

TRZOL。用取样器抽打几次。（注意：裂解液RZ的加入量根据培养瓶面积决定，不是由细胞数决定。如果加量不足，可能导致提取的RNA中有DNA污染。）

c. 细胞悬液：离心取细胞，弃上清。每5-10×106动物细胞和植物细胞加入1mL裂解液RZ。

加裂解液RZ前不要洗涤细胞，以免降解RNA。

d. 血液：直接取新鲜血液，加入3倍体积RZ（推荐0.25mL血液+0.75mLRZ），充分震荡

混匀。

2. 将裂解样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白质复合

查看全文

qPCR与RT-PCR

标签：文库时间：2024-10-04

【bwwdw.com - 博文网】

虽然Real-time PCR（实时荧光定量PCR）和Reverse transcription PCR（反转录PCR）看起来都可以缩写为RT-PCR，但是，国际上的约定俗成的是：RT-PCR特指反转录PCR，而Real-time PCR一般缩写为qPCR（quantitative real-time PCR）。

更正楼主的观点：qPCR不一定与反转录相关，除了可以用cDNA作为模板，也可以用基因组DNA等作为模板。而反转录PCR也不一定非要与荧光定量相关，从mRNA中反转录得到cDNA，然后PCR扩增出目的基因，这也是反转录PCR。

综上，那RT-qPCR（也有人写成qRT-PCR）就很好理解了，就是结合了荧光定量技术的反转录PCR：先从RNA反转录得到cDNA（RT），然后用Real-time PCR进行定量分析（qPCR）。有兴趣的话可以看看维基百科：

http://en.wikipedia.org/wiki/Reverse_transcription_polymerase_chain_reaction Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) is a varia

查看全文