免疫共沉淀中的ip和ib

免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤

一、原理：

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

其优点为：（1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；（2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；（3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为：（1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；（2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；（3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正

免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤

一、原理：

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

其优点为：（1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；（2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；（3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为：（1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；（2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；（3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正

免疫共沉淀 from WHU SKY

1用细胞刮子收细胞，3000rpm，5min，离心，去上清；或者弃培养基后直接用裂解液裂解细胞。从细胞裂解开始要保持低温，冰上或4度冰箱或4度离心机。

2 PBS清洗，重复步骤1

3选择合适的bufer裂解细胞，现加1000XAL（一般核质均分布的建议使用NP-40，核内分布的建议使用High Salt ，只要求拉下抗原的建议使用RIPA buffer），加入1ml Buffer (106-107个细胞)，4℃,30min（在功能旋转仪上旋转裂解）。 4 12000rpm，15min，离心取上清（若上清仍浑浊，可重复离心1-2次）50ul上清作为 Input，其它各取400ul分别加入特异性抗体和对照IgG均1ug（可根据抗体效价酌情增减），4℃,旋转2-4h，

加抗体时要计算使用相同抗体的样品数，取（N+1~2）*1ug，用小量裂解buffer

稀释，再均分到各样品中，以保证抗体加入量的一致。 5细胞裂解液和抗体孵育期间，准备Protein G（一个反应20ul纯beads，如果beads原管中液体和beads体积比是1:1，一个样品取总体积40ul，多个样品需要多取1-2个样品的beads/液体混合物）

高三年级调考试题

自选模块

注意事项：

1．本试题卷共18题，全卷共12页。满分60分，考试时间90分钟。

2．答卷前，考生务必将自己的姓名和考号用黑色字迹的签字笔或钢笔填写在答题纸上。 3．将选定的题号按规定要求用2B铅笔或黑色水笔填写在答题纸上的―题号‖框内，否则答题

视为无效。

4．考生可任选6道题作答；所答试题与题号一致；多答视为无效。

语 文

题号：01

―中国古代诗歌散文欣赏‖模块（10分） 阅读下面的一篇散文，然后回答问题。

晚游六桥①待月记

[明]袁宏道

西湖最盛，为春为月②。一日之盛，为朝烟，为夕岚③。今岁春雪甚盛，梅花为寒所勒，与杏桃相次开发，尤为奇观。石篑④数为余言：傅金吾园中梅，张功甫玉照堂故物也，急往观之。余时为桃花所恋，竟不忍去湖上。湖上由断桥至苏堤一带，绿烟红雾，弥漫二十余里。歌吹为风，粉汗为雨，罗纨之盛⑤，多于堤畔之草，艳冶极矣。然杭人游湖，止午未申三时；其实湖光染翠之工，山岚设色之妙，皆在朝日始出，夕舂⑥未下，始极其浓媚。月景尤不可 言，花态柳情，山容水意，别是一种趣味。此乐留与僧游客受用，安可为俗士道哉！ 【注释】①六桥：西湖苏堤上的六座桥，由南向北依次名为映波、锁澜、望山、压堤、东浦、跨虹。 ②为春为

无机及分析化学

塔里木大学化学与化工系

第9章

沉淀平衡和沉淀滴定法

Chapter 9 Precipitation-dissolution equilibrium and Precipitation Titration

本章内容§9.1§9.2

溶度积和溶解度沉淀-溶解平衡的移动

§9.3§9.4

影响沉淀溶解度的因素影响沉淀纯度的因素

§9.5§9.6

沉淀的形成条件沉淀分析法

§9.1 溶度积和溶解度实验现象：

实验步骤：

几滴 KI溶液

在上层清液中滴 加KI溶液后，有 黄色沉淀产生。

静置，待上层 液体变澄清

结论解释：PbI2(s) Pb2+(aq) + 2I-(aq)

将少量的 PbI2固 体加入装有适量水 的试管中，震荡。

PbI2

PbI2在水中溶解平衡

Pb2+ l-

尽管PbI2固体难溶于水， 但仍有部分Pb2+和I-离开 固体表面进入溶液，同时 进入溶液的Pb2+和I-又会 在固体表面沉淀下来，当 这两个过程速率相等时， Pb2+和I-的沉淀与PbI2固 体的溶解达到平衡状态即 达到沉淀溶解平衡状 态.PbI2固体在水中的沉 淀溶解平衡可表示为：

溶解

PbI2(s)沉淀

Pb2+(aq) + 2

稳定成就未来！bcc7f23d571252d380eb6294dd88d0d233d43cd4 Linux(CentOS)服务器中添加单个IP 和批量添加多个IP 的方法针对于现在越来越多的站长朋友选择独立服务器，那么用centos 系统服务器怎么添加单个IP 或者批量添加多个IP 呢。下面关于这个问题稳网互联龙腾来介绍下步骤：

一、添加单个IP 地址：

在/etc/sysconfig/network-scripts/中新建文件ifcfg-eth0:*，*为数字序号，多个IP 则依次增大

以0为例，建立文件ifcfg-eth0:0

cd /etc/sysconfig/network-scripts/

vi ifcfg-eth0:0

输入内容格式：

DEVICE=eth0:0

TYPE=Ethernet

ONBOOT=yes

BOOTPROTO=static

IPADDR=要添加绑定的IP 地址

稳定成就未来！bcc7f23d571252d380eb6294dd88d0d233d43cd4 NETMASK=子网掩码

GATEWAY=网关地址

二、批量添加多个IP 地址：

在/etc/sysconfig/network-scripts/中新建文件ifcfg-eth0-rang

试验二 成层沉淀和压缩沉淀实验

（一） 实验原理

该实验是研究浓度较高的悬浮颗粒的沉淀规律。沉淀过程中有明显的清水和浑水分界面，称为浑液面，浑液面缓慢下沉，直到泥沙最后完全压实为止。

颗粒间的絮凝过程越好，交界面就越清晰，清水区的悬浮物就越少。

在沉淀过程中，清水区高度逐渐增加，压实区高度也逐渐增加，而等浓度区的高度则逐渐减小，最后不复存在。变浓度区的高度开始是基本不变的，但当等浓度消失后，也就逐渐消失。变浓度区消失后，压实区仍然继续压实，直到这一区的悬浮物达到最大密度为止。当沉降达到变浓度区刚消失的位置时，称为临界沉降点(C点)。

如以交界面为纵坐标，沉淀时间为横坐标，可得交界面沉降过程曲线。曲线a-b为上凸的曲线，可解释为颗粒间的凝聚，由于颗粒凝聚变大，使下降速度逐渐变大。b-c段为直线，表明交界面等速下降。曲线c-d段为下凹的曲线，表明交界面下降速度逐渐变小。此时B区和C区已消失，C点称为沉降临界点，交界面下的浓度均大于C。c-d段表示B、C、D三区重合后，沉淀物压实的过程。随着时间的增长，压实变慢，最后压实到高度H?为止。 （二） 实验目的

1. 通过实验掌握成层沉淀和压缩沉淀的过程和规律； 2. 绘制成层沉淀和压缩沉淀的试验曲线。

无机及分析化学

塔里木大学化学与化工系

第9章

沉淀平衡和沉淀滴定法

Chapter 9 Precipitation-dissolution equilibrium and Precipitation Titration

本章内容§9.1§9.2

溶度积和溶解度沉淀-溶解平衡的移动

§9.3§9.4

影响沉淀溶解度的因素影响沉淀纯度的因素

§9.5§9.6

沉淀的形成条件沉淀分析法

§9.1 溶度积和溶解度实验现象：

实验步骤：

几滴 KI溶液

在上层清液中滴 加KI溶液后，有 黄色沉淀产生。

静置，待上层 液体变澄清

结论解释：PbI2(s) Pb2+(aq) + 2I-(aq)

将少量的 PbI2固 体加入装有适量水 的试管中，震荡。

PbI2

PbI2在水中溶解平衡

Pb2+ l-

尽管PbI2固体难溶于水， 但仍有部分Pb2+和I-离开 固体表面进入溶液，同时 进入溶液的Pb2+和I-又会 在固体表面沉淀下来，当 这两个过程速率相等时， Pb2+和I-的沉淀与PbI2固 体的溶解达到平衡状态即 达到沉淀溶解平衡状 态.PbI2固体在水中的沉 淀溶解平衡可表示为：

溶解

PbI2(s)沉淀

Pb2+(aq) + 2

论BFD技术在IP承载网中的应用和部署

摘要：

IP承载网承载电信级业务，对可靠性要求非常高。IP承载网中常用的可靠性技术包括各种FRR保护倒换技术和路由快收敛等，决定FRR和路由收敛快慢的主要因素是故障检测时间。BFD技术能有效缩短故障检测时间，通过和FRR活路由协议联动，实现了IP承载网不同场景下的保护功能。本文主要讨论BFD技术在IP承载网如何与其它保护技术联动，实现IP承载网的高可靠性。

正文：

一、 BFD与路由协议联动

? IP承载网的骨干网通常运行IS-IS路由协议做为IGP协议。为了加快IS-IS收敛，常用的技术有：使用智能定时器缩短SPF计算间隔、加快LSP的泛洪；使用I-SPF算法和PRC算法缩短SPF的计算时间。这些都是在IS-IS检测到链路故障和邻居故障后使用的快收敛技术。IS-IS收敛快慢的瓶颈却是故障检测时间。现有的故障检测方法主要包括：

? 硬件检测：例如通过SDH（Synchronous Digital Hierarchy，同步数字体系）告警检测链路故障。硬件检测的优点是可以很快发现故障，但并不是所有介质都能提供硬件检测。

? 慢Hello机制：通常是指路由协议的Hello机制。这种机制检测到故障

本文详细介绍了设置IP地址和DNS的方法。

手动设置IP地址和DNS的方法

ADSL上网，有时会提示受限制或无连接，我们可以不要自动获取，手动设置IP地址和DNS来解除故障。

首先用右键单击桌面“网上邻居”─→属性─→本地连接─→属性─→选中“Internet协议（TCP/IP）”并双击，此时打开的窗口就是我们要手动设置的IP地址和DNS（如图所示）。

在上图中“使用下面的IP地址” 中，应该这样填写：

IP地址：192.168.1.118（此项的118可以使0—255之间的任意数字）

子网掩码：255.255.255.0（在空白处点一下就会自动出来）

默认网关：192.168.1.1（注意，如果这样上不了网的话，你将此项改成：192.168.0.1，

本文详细介绍了设置IP地址和DNS的方法。

IP地址相应地改为：192.168.0.118）

绝大多数路由器的IP地址是192.168.1.1，则电脑的TCP/IP设置按图所说的去填即可。少数路由器并不是上述地址，比如路由器的地址是：192.168.8.1，则电脑的IP地址须填为：192.168.8.xxx，默认网关为：192.168.8.1，其它部分不变。

下面IT部落窝()网站为大家罗列了一些常见问题，供大家学