细胞克隆形成实验的目的

细胞克隆形成实验

当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞，大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测。

细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大：

一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。

实验方法：

平板集落形成实验、软琼脂集落形成实验

(a) 平板集落形成实验：本法适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞

(b) 软琼脂集落形成实验：本法适用于非锚着依赖性生长的细胞，如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系。

平板克隆形成实验基本步骤：

1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。

2、将细胞悬液作梯度倍数稀

细胞克隆形成实验

当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞，大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测。

细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大：

一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。

实验方法：

平板集落形成实验、软琼脂集落形成实验

(a) 平板集落形成实验：本法适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞

(b) 软琼脂集落形成实验：本法适用于非锚着依赖性生长的细胞，如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系。

平板克隆形成实验基本步骤：

1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。

2、将细胞悬液作梯度倍数稀

常用分子克隆实验方法I

一、植物总DNA的小量提取

方法1：提取吸附法。无须巯基乙醇、氯仿等有毒物质，产物无须Rnase处理。

(1) 充分研磨。称取约0.2克植物组织，加入液氮充分研磨3-5min，稍后加约1ml溶液

A，继续研磨至略粘稠的组织匀浆，用大口1ml吸头将所有溶液移至1.5ml离心管中，55℃水浴30min；

(2) 高速离心去杂质。10,000rpm离心5min，取约600ul上清至新1.5ml离心管； (3) 核酸吸附。往上清液中加入1倍的异丙醇，轻轻混匀，再加入总体积1/4已混匀的

溶液B，静置3min;

(4) 低速离心沉淀。5000rpm离心1min，轻轻倒掉上清，并用吸水纸轻吸离心管口，

再用移液枪吸走大部分残余液体；

(5) 75%乙醇清洗。加入1ml75%乙醇，5000rpm离心30s，轻轻倒掉上清，用吸水纸稍

吸离心管口。重复该步骤一次，再5000rpm离心30s，然后用移液枪吸走管底的残液，晾干5min；

(6) 核酸洗脱。加入约55ul TE（PH8.0）至管底，轻轻重悬硅土，静置3min，10,000rpm

离心1min，用小枪头轻轻吸取出50ul管底溶液，冷藏。

方法2：CTAB法，此为在经典方法基础上，经过摸

整个基因克隆实验规程

完整

Document serial number【KK89K-LLS98YT-SS8CB-SSUT-SST108】

一、组织总RNA 的提取

相关试剂：T rizol；氯仿；苯酚；异丙醇；75%乙醇；RNase-free水

相关仪器：制冰机；液氮&研钵/生物样品研磨仪；高速离心机；移液器（1ml、200μl、

100μl/50μl）；涡旋振荡仪；恒温金属浴。

相关耗材：解剖工具，冰盒，离心管，离心管架，吸头（1ml，200μl/300μl），一次性手套，实验手套。

实验步骤

1.取暂养草鱼，冰上放置一段时间，然后解剖，剪取肠道50~100mg，放入研钵中，加入液氮迅

速研磨，然后加入1ml 预冷TRIzol试剂，充分研磨至无颗粒物存在。

2.转移到离心管中，室温放置5min，使细胞充分裂解；

3.按1ml Trizol加入200μl氯仿，盖上盖子，迅速充分摇匀15s，然后室温放置3min；

4.4℃，,12000g 离心15min；

此时混合物分为三层，下层红色的苯酚氯仿层，中间层和上层无色水相；RNA存在于无色水相中；

5.小心吸取上清液，千万不要吸取中间界面，否则有DNA污染；转移至一个新的离心管，加入等

体积的异丙醇，轻轻混匀；

6.室温放置10

学习目标：1.列表比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的异同2.理解和掌握动物细胞融合的原理、过程和意义自主学习：1.动物细胞融合常探究交流知识点一.动物细胞融合课堂反馈1.下图表示

选修三学案 胶州四中高二生物

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体

学习目标：

1.列表比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的异同

2.理解和掌握动物细胞融合的原理、过程和意义

3.理解和掌握单克隆抗体制备的过程的步骤和应用

学习重难点：1.动物细胞融合的原理、过程和意义。2.单克隆抗体制备的过程的步骤和应用

知识回顾：1、植物体细胞杂交过程应用了那些技术?

2、植物与动物细胞结构有何区别？

自主学习：

1．动物细胞融合常用的诱导因素有、点是 。

2．制备单克隆抗体的技术流程是：用羊的红细胞对小鼠进行注射，使小鼠产生反应。然后，把

相应的 细胞和 细胞融合，再用 进行筛选，在该培养基上， 未融合的

亲本 细胞和

实验一细胞的凝集反应

一、实验目的

了解细胞膜的表面结构； 二、实验原理

凝集素是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，能与细胞外被的寡糖链相连接，使细胞发生凝集。 三、实验用品

1 ．器材: 显微镜、天平、载玻片、滴管、离心管、烧杯、10ml移液管、试管、试管架 2 ．材料: 土豆块茎、 2％鸡血红细胞 3 ．试剂: 抗凝血剂（ 3.8%柠檬酸钠）、PBS缓冲液（pH 7.4 0.2mol/L Na2HPO4 49ml + 0.2mol/L NaH2PO4 51ml, PBS缓冲液一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用）、0.17mol/L氯化钠。

四、实验步骤

1２％鸡血红细胞悬液制备

取已加抗凝剂的新鲜鸡血1 mL，加等量生理盐水轻轻混匀后2000 r/min离心５ min，重复3次，按红细胞压积用生理盐水配成２％鸡血红细胞悬液（淡红色）。 2 土豆凝集素制备

土豆２克切成薄片后加10 ml PBS，浸泡0.5-2 h（写具体时间，80min） 3 细胞凝集反应

制备不同浓度梯度的红细胞液：取1ml已制备好的2%的鸡血细胞悬液，通过系列稀释将血细胞悬液制备成不同浓度：在1ml的试管上编号为2%；在标号2%的试管中取0.5ml于另一只试管中，在试管

实验一 细胞大小的显微测量【实验目的】1、学会使用测微尺，掌握显微测量细胞的方法。

【实验用品】1、材料 ： 鸡血细胞。 2、器材 ： 配有目镜测微尺的显微镜、镜台测微尺、血球计 数板、胶头滴管、载玻片、盖玻片、吸水纸

【实验原理】测微尺分目镜测微尺和镜台测微尺，两尺配合使用。 目镜测微尺：是一个放在目镜像平面上的玻璃圆片。 圆片中央刻有一条直线，此线被分为 若干格，每格代表的长度随不同物镜 的放大倍数而异。因此，用前必须测定。 镜台测微尺：是在一个载片中央封固的尺，长1毫米 (1000μm),被分为100格，每格长度是10um

【实验步骤】 一、细胞的显微(大小)测量1、测微尺的使用方法 (1)目镜内已经装有目镜测微尺。目镜可以旋转。 (2)将镜台测微尺有刻度一面朝上放在载物台上夹好， 使测微尺刻度位于视野中央。10倍物镜下调焦至 看清镜台测微尺的刻度。 (3)小心移动镜台测微尺和旋转目镜测微尺，使两尺左边 的“0”点直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合 的直线。

(4)记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。 按下式计算目镜测微尺每格的长度(μm):目镜测微尺每格的长度(μm)

=

镜台测微尺的格数 目镜测微尺的格数

X 10

(5)从显微镜载

《神奇的克隆》说课稿

一、说教材

《神奇的克隆》是九年义务教育六年制苏教版小学五年级语文下册第二单元的一篇讲读课文，主要介绍了什么是克隆的一般知识，说明了克隆技术是造福人类的科技成果，指出克隆技术有着诱人的前景。

文章条理清楚，语言简练明白。全文没有什么难以理解的语句。根据《语文课程标准》阅读说明性文章：“要能抓住要点，了解文章的基本说明方法”这一要求，我确定了以下教学重难点。 教学目标：

第一、理解课文内容，初步了解克隆的知识。

第二、反复朗读课文，理解说明文的一般特点和常用的说明方法。

第三、有感情的朗读课文，感受克隆技术的神奇，激发学生热爱科学、畅想科学、探索科学的思想感情。 重难点：

让学生初步了解克隆知识，激发学生热爱科学的情感以及了解本文说明中心突出、科学性强、条理清楚等特点和所运用的说明方法。

二、说教法

文章内容浅显，脉络清楚。学生完全可以学习生字词之后，通过反复朗读，理解说明文的一般特点和说明方法。因此，在教学时，我通过三读法让学生了解克隆的定义，自然界的植物、低等生物和高等动物的克隆现象及克隆的前景，接着师生互动，理解说明文的一般特

实验一 细胞多糖的PAS反应

目的：掌握细胞中多糖（如淀粉、细胞壁纤维素等）原位显示的PAS反应原理，熟悉PAS的技术。 一、PAS反应原理

过碘酸（HI04·2H20）作为一种强的氧化剂，能够打开C—C键,将-CHOH-CHOH-、-CHOH-CHO、-CHOH-COOH、-CHOH-CH2NH2等的羟基氧化为醛基。但它不继续氧化新形成的醛基。所以，有充分的醛基与Schiff试剂中的无色碱性品红化合而形成紫红色物质，使细胞中的多糖（如淀粉、细胞壁纤维素等）原位显示出来。 二、器材、试剂及材料 1、器材

显微镜，载/盖玻片、镊子、刀片、吸水纸。 2、试剂

（1）过碘酸酒精溶液

过碘酸（HI04·2H20） 0.4g 95%乙醇 35ml 0.2M醋酸钠（27.2g+1000mlH2O） 5ml 蒸馏水 10ml （2） Schiff试剂

先将100ml蒸馏水煮沸，然后加人0.5g碱性品红，充分搅拌，必要时可再煮

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

1. 2. 3. 4. 5.

实验前准备

? 根据自己实验的情况提前预定超净台 ? 进入细胞室之前必须穿鞋套，戴手套

? 将实验所需要的实验仪器放入超净台内紫外照射灭菌15-20min

高压灭菌操作

将所需灭菌的枪头，EP管等仪器放入枪头盒或饭盒中，并用报纸将枪头盒包好。

将仪器放入灭菌锅之前，首先要检测一下锅内的水位是否超过锅底的圆圈，若没有超过则需加水。

检测水位之后，将包好的器材放入锅内，盖上锅盖并拧紧螺丝。 插上电源，先将电压调至250V，目的在于排尽锅内的空气，（当排气阀有白气冒出时，说明空气已排尽）空气排尽后，关闭排气阀。

关闭排气阀后指针上升，当指针竖直时，将电压调至125V，保持锅内压力的稳定。

开始计时，灭菌30min。结束时关闭电源，等至指针慢慢降下即可。 拿出锅内的器材放入恒温烘箱中烘干，2天后即可拿出。

（组织内）蛋白质提取过程

对癌组织和癌旁正常组织进行称重，记录数值。

根据RIPA裂解液Ⅲ说明书（每100mg组织中加入1ml溶液A，1ul溶液B，5ul溶液C）按照组织块得大小配好ABC混合液。

将组织块加入匀浆器中，并加入相应量得ABC混合液，冰上静置5-10min，开