2015版药典微生物限度检查法

1101 无菌检查法

无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。

培养基

硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌培养；胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。

培养基的制备及培养条件

培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非封闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。

1. 硫乙醇酸盐流体培养基

胰酪胨15.0g 氯化钠

2.5g

酵母浸出粉 5.0g 新配制的0.1% 刃天青

微生物限度/无菌方法学验证流程

1.：提交单位购买申请菌种的购买：需要1.5个月

单位介绍信证明工作用途等文件，并向中检院网站提交申请，接到申请后一个月后中检院会把有

的菌种邮寄到使用单位，中检院菌种经常缺货并不是很齐全，不能一次买齐所需要的8种菌一次性买齐，

2. 每种从菌复活、分离、纯化复壮：共需要30天

药典规定进行药品检验所需8种标准阳性菌，购买中检院冻干菌粉后进行复活与保藏

1大肠埃希菌 2金黄色葡萄球菌 3枯草芽孢杆菌 4生孢梭菌 5铜绿假单胞菌 6沙门菌

（细菌每种冻干菌粉复活到分离纯化保藏各需要3-4天时间） 7白色念珠菌 8黑曲霉菌

（霉菌酵母菌冻干菌粉从复活到分离纯化制备孢子菌悬液需要至少7天时间）

3.培养基适用性/灵敏度验证：需要60-80天

实验中使用的培养基需要进行与中检院提供的标准培养基进行培养基适用性验证 每种培养基不同批号之间也需要进行验证之后方可以进行微生物检验用

药检室现有培养基种类20余种，每种培养基验证需要3-4天，完成所有培养基适用性验证需要60-80天。

恩替卡韦分散片微生物限度方法学适用性验证：

1. 回收率验证：回收率验证实验共需要26天

（若回收率达不

目录

A、验证方案 1.概述 2.适用范围 3.验证目的

4.验证小组及职责分工 4.1 验证小组 4.2 职责分工 5.验证内容

6.漏项与偏差及采取的纠偏措施. 7.验证结论 8.验证方案批准 B、验证报告 1.概述 2.适用范围 3.验证目的

4.验证小组及职责分工 4.1 验证小组 4.2 职责分工 5.确证内容

6.漏项与偏差及采取的纠偏措施. 7.验证结论 8.最终批准 9. 再验证周期

1 概述

由于某些供试品抗菌活性，在建立测定方法或原测定法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性、重现性进行验证。验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。

2 适用范围

适用于进厂的原辅料葡萄糖微生物限度检查——平皿法的验证。 3 验证目的

建立葡萄糖微生物限度分析方法，包括细菌数、霉菌数及酵母菌数的检查以及控制菌的检查，并对分析方法进行验证，以证明所采用的方法适合于葡萄糖微生物限度的检查，为日常的检测工作提供依据。

4 验证小组及职责分工 成 员 组 长 职 责 负责验证期间各部门的协调及整个验证过程的具体实施。 负责验

微生物限度/无菌方法学验证流程

1.：提交单位购买申请菌种的购买：需要1.5个月

单位介绍信证明工作用途等文件，并向中检院网站提交申请，接到申请后一个月后中检院会把有

的菌种邮寄到使用单位，中检院菌种经常缺货并不是很齐全，不能一次买齐所需要的8种菌一次性买齐，

2. 每种从菌复活、分离、纯化复壮：共需要30天

药典规定进行药品检验所需8种标准阳性菌，购买中检院冻干菌粉后进行复活与保藏

1大肠埃希菌 2金黄色葡萄球菌 3枯草芽孢杆菌 4生孢梭菌 5铜绿假单胞菌 6沙门菌

（细菌每种冻干菌粉复活到分离纯化保藏各需要3-4天时间） 7白色念珠菌 8黑曲霉菌

（霉菌酵母菌冻干菌粉从复活到分离纯化制备孢子菌悬液需要至少7天时间）

3.培养基适用性/灵敏度验证：需要60-80天

实验中使用的培养基需要进行与中检院提供的标准培养基进行培养基适用性验证 每种培养基不同批号之间也需要进行验证之后方可以进行微生物检验用

药检室现有培养基种类20余种，每种培养基验证需要3-4天，完成所有培养基适用性验证需要60-80天。

恩替卡韦分散片微生物限度方法学适用性验证：

1. 回收率验证：回收率验证实验共需要26天

（若回收率达不

表：2.1-024

微生物限度检查记录（通用）

检验编号 剂 型 完成日期 g 样品名称 批 号 检验日期 1.常规法：取供试品10ml,用胰酪大豆胨液体培养基稀释至100ml，用匀浆仪等适宜的方法混匀，制成1:10供试液。 供试液制备 2.薄膜过滤法：取供试品10ml,用胰酪大豆胨液体培养基稀释至100ml，用匀浆仪等适宜的方法混匀，制成1:10供试液。吸取1:10的供试液10ml，过滤，加0.1%无菌蛋白胨水溶液300ml分三次冲洗，每次100ml；冲洗后，将滤膜正贴于胰酪大豆胨固体培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基上，每种培养基平行制备2个平皿。按平皿法测定其菌数。 一、需氧菌总数检查（30～35℃，3～5天） 胰酪大豆胨琼脂培养基（配制批号： ） 培养 时间 1天 2天 3天 4天 5天 6天 7天 均值 结果 — — 10 -1g 二、霉菌、酵母菌总数检查（20℃～25℃，5～7天） 沙氏葡萄糖琼脂培养基（配制批号： ） 10 -110 -210 -3阴性对照 10 -210 -3阴性对照 皿

××××××××××公司GMP文件 编码：SOP-QC-TY-02-033

非无菌药品微生物限度检查操作规程 起草人 审核人 批准人 日 期 日 期 日 期 年 月 日 执行日期 2015年12月01日 年 月 日 年 月 日 颁发部门 质保部 分 发 部 门 质保部（）份 质检部（）份 变更记载： 修订号 执行日期 生产部（）份 物资部（）份 设备部（）份 采供部（）份 00 2012年06月01日 销售部（）份 行政部（）份 01 2014年05月01日 财务部（）份 02 2015年12月01日

1. 目的：建立非无菌药品微生物限度检查检验标准操作规程，规范检验操作，确保检验结果准确。

2. 适用范围：适用于本公司所有采用非无菌药品微生物限度检查法测定的供试品。

3. 责任者：QC检验员、QC经理。 4. 正文：

4.1 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法 4.1.1 简述

微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。

当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的

*******有限公司验证文件

纯化水微生物限度检查法验证方案

题目：纯化水微生物限度检查法验证方案 起草： 日期： 颁发部门： 生效日期： 质量部

编号：VDP-JY-010-01-1 共 页 审核： 批准： 日期： 日期： 分发部门：工程设备部、质量部 第 页 1

纯化水微生物限度检查法验证方案

起草、审核、批准： 起草人： 起草日期： 颁发部门： 质量部

验证组织：

验证小组名称： 纯化水微生物限度检查法验证方案验证小组 组 长 组 员 1 质量部经理 QC主管 负责组织、实施 负责验证方案的起草 负责检测数据的复核 负责出具检验报告 2 QA主管 负责验证方案的确认 负责方法评价 3 微生物限度检验员 负责测试操作和操作原始记录 审核人： 审核日期： 分发部门： 质量部 批准人： 批准日期： 1

目录

1. 验证目的 2. 验证人员职责 3. 参照标准 4. 验证项目内容 5. 评价合格标准 6. 验证试验材料 7. 验证实施计划 8. 菌液制备 9. 供试液制备 10.计数方法验证 11.控制菌检查方法验证 12.验证结论和评价

纯化水微生物限度检查法验证方案

1. 验证目的：

纯化水微生物限度

无菌检查法-2015版中国药典

无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。

无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。日常检验还需对试验环境进行监控。 无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。 培养基

硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器

非无菌产品微生物学检查：微生物计数检查法

USP61中英对照版

<61> MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF NONSTERILE PRODUCTS: MICROBIAL ENUMENRATION TESTS

非无菌产品微生物学检查：微生物计数检查法

INTRODUCTION 导言

The tests described hereafter will allow quantitative enumeration of mesophilic bacteria and fungi that may grow under aerobic conditions.

以下所描述的这些检测将使得对在有氧的条件下生长的嗜温性细菌和真菌进行定量计数成为可能。

The tests are designed primarily to determine whether a substance or preparation complies with an established specification for microbiological quality. When used for such purposes, follow the

文件编号 文件名称 制 定 人 审 核 人 批 准 人 生效日期 管理部门 质量部 序号 01

分发部门 微生物限度检查操作规程 版本号 制定日期 审核日期 批准日期 00 QB-WI/10-005-00 页码 2017.03.08 修订原因及目的 文件新建 总经理□ 技术部□ 质量部□ 生产部□ 管理者代表□ 商务部□ 销售部□ 行政部□ 仓库□ 修订内容 /

文件编号 文件名称 1. 目的

规范微生物限度检查方法及操作，使纯化水、内包材、环境监测、清洁验证及其他要素的微限 检查符合ChP2015规定。 2. 适用范围

适用于纯化水、内包材、环境监测及其他要素的微限检查。 3. 引用/参考文件 ChP2015

实用药品微生物检验检测技术指南 《取样及留样管理规程》 4. 职责

质量控制实验室负责执行对相关要素的微限检查，QA负责执行监督并参与OOS调查。 5. 程序 5.1 仪器用具

高压蒸汽灭菌锅、洁净工作台、生化培养箱、霉菌培养箱、