sgRNA设计在反义链上

SgRNA设计方法

SgRNA（small guide RNA简称），是CRISPR基因敲除敲入系统中重要的组成部分，早先发现的guide RNA，由两部分组成—tracRNA和crRNA, 两部分融合表达后，即sgRNA也能很好的行使guide的功能，与cas9蛋白结合，引导cas9酶靶向基因组DNA进行剪切。

SgRNA脱靶问题一直备受关注，如何设计特异性好的靶点成为大家关注的焦点，很多实验室开发了不同的设计软件，大体原则如下：

（1）对于sgRNA的长度，一般应为20 nt左右； （2）对于sgRNA序列的碱基组成，可选3'末端含GG的sgRNA，同时sgRNA种子序列尽量避免以4个以上的T结尾，GC%含量最佳为40%~60%；

（3）sgRNA的种子序列与脱靶位点的匹配数尽可能低 （4）如果构建U6或T7启动子驱动sgRNA的表达载体，需考虑sgRNA的5' 碱基为G或GG，以提高其转录效率； （5）对于sgRNA靶向基因的结合位置，如需造成基因移码突变，需尽量靠近基因编码区的ATG下游，最好位于第一或第二外显子；

（6）检查sgRNA靶向结合位点基因组序列是否存在SNPs； （7）如采用Cas9单切口酶，设计paired-gRNA需

一、 近义词：

穿戴— 鲜艳— 招呼— 敬爱— 飘扬— 安静— 盛开— 常常— 玩耍— 使劲— 假装— 快乐— 快乐— 合拢— 笔陡— 似乎— 发颤— 鼓舞— 居然— 汲取— 散发— 飘荡— 欢快— 诚实— 打量— 著名— 考察— 准备— 粗心— 快活— 炎热— 道别— 辽阔— 灼伤— 辨认— 大概— 清闲— 哄— 闻名— 传授— 漆黑— 勤劳— 一定— 严寒— 突然— 吩咐— 兴趣— 震惊— 奇怪— 憧憬— 飞舞— 凉爽— 振动— 绽开— 淡

芳烃侧链上的反应

教学目标：掌握芳烃侧链上的氧化、卤代等反应 教学重点：芳烃侧链 α—H 原子的氧化及卤代反应 教学安排：F10—>G6；30min

烷基苯的烷基与苯环相连的碳原子称为α-碳原子，其上的氢称为α-氢。在分子构造上芳烃侧链的 α-氢与烯烃的 α-氢相似，受苯环的影响比较活泼。

一、α—氢的卤代反应

在光照或加热的条件下，烷基苯的 α-H 被卤素取代，生成 α-卤代烷基苯。例如：

α-H 氯代反应机理与烷烃卤代反应机理相同，为自由基型反应：

苯基自由基比烷基自由基更稳定，因为苯基自由基的单电子的电子云可以分散到环上：

苯氯甲烷可以继续氯化生成多卤代产物：

其它烷基苯的α—H也能被卤代：

溴代反应也可以用N-溴代丁二酰亚胺（NBS）做溴化试剂，反应缓和，易控制：

二、α—氢的氧化反应

烷基苯比苯容易被氧化，但通常是烷基被氧化，苯环则比较稳定。用强氧化剂如KMnO4、K2Cr2O7、HNO3的氧化下，或在催化剂的作用下，用空气或氧气氧化，含 α—H 的烷基被氧化成羧基，而且不论烷基的碳链长短，一般都生成苯甲酸。例如：

甲苯的氧化

芳烃侧链上的反应

这是因为 α-氢

Hereditas (Beijing) 2015年11月, 37(11): 1125―1136 www.chinagene.cn

综 述 CRISPR/Cas9系统中sgRNA设计与脱靶效应评估

谢胜松1，张懿2，张利生1，李广磊1，赵长志1，倪攀1，赵书红1

1. 华中农业大学，农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室，武汉 430070； 2. 中国人民解放军第161医院妇产科，武汉 430010

摘要： 基于CRISPR/Cas9系统介导的第三代基因组编辑技术，已成功应用于动物、植物和微生物等诸多物种

的基因组改造。如何提高CRISPR/Cas9技术的基因组编辑效率和最大限度降低脱靶风险一直是本领域的研究热点，而使用高效且特异的sgRNA(Small guide RNA)是基因组改造成功的关键性因素之一。目前，已有多款针对CRISPR/Cas9技术的sgRNA设计和/或脱靶效应评估软件，但不同的软件各有优缺点。本文重点对16款sgRNA 设计和脱靶效应评估在线和单机版软件的特点进行了阐述，通过制定38项评估指标对不同软件进行了比较分析，最后对11种用于检测基因组编辑效率和脱靶的实验方法，以及如何筛选高效且特异的sgRNA进行了归纳总结

本文构建了具有一般意义的企业供应链系统及各环节对利润贡献的算法,首次运用吸收马链吸收概率的计算原理, 通过对该系统各链点遍历状态和不返回状态的转换计算,对企业供应链的优化判断提供了新的数理依据,同时进行了实证分析。

21世纪青年学者论坛

世界科技研究与发展

　　　　2004年10月

吸收马氏链在供应链优化

11(1.;2.四川旅游学院,成都610031)

摘　要:,首次运用吸收马

,通过对该系统各链点遍历状态和不返回状态的转换计算,对企业供应链的优化判断提供了新的数理依据,同时进行了实证分析。关键词:供应链　吸收马链　优化

ApplicationsofAbsorptionMarkovChainin

SupplyChainOptimalJudgmentJIANGChaozhe1　HUPei1　XUFang2

(1.SchoolofEconomic&Management,SouthwestJiaotongUniversity,Chengdu610031;

2.SichuanTourismUniversity,Chengdu610031)

Abstract:Thispaperbuildsanewenterprise’ssupplychainsystemandpro

第一篇：生态链上没有旁观者

阅读和看剧，时有如此状况发生：某女主或男主受伤了，另一主角抱着她/他泫然欲泣说着不会有事的不会有事的云云，此时音乐响起，两人互诉衷肠的同时各种回忆闪现......殊不知敌人或者死神正在逼近，最后男主/女主不治身亡，另一主角仰天哭嚎，音乐也随之激扬而上。有共情者痛哭流涕泪湿纸巾，也有自认为理智的观众，嘴里瓜子一吐，嘴角一撇，拍案而起，某某某是秀逗了吗，有这时间叽叽哇哇一堆，送医院早救活了啊！

后者，我们在称之为，上帝视角旁观者。可置身事外，可足够的理性，可纵观全局，可谓万花丛中过，片叶不沾身！可真的有从万花丛中穿过吗？

近日看到一个新闻，520当天，一男子在铁轨上拍摄铁路安全警示视频，后一秒就被疾驰而来的火车撞击身亡。不曾想，自己成了警示片的素材，付出的却是生命的代价，这无论从何种角度看，都是一个悲伤的故事，我们可默哀、或警醒，或慎思，但绝不可嘲弄，但是评论里杠精永远都不会缺席：“不作死就不会死”“火车司机为何不鸣笛，说不定可以躲过呢”“缺脑子”......

杠精们但凡读点书，就应该知道，其一火车自身重量大，重量越大惯性越大，制动时间较长；其二火车是铁轮与铁轨接触，摩擦力较小，车速快，加之驾驶员视野有限，反映能力减弱。至于为

校园超市供应链设计

导言

供应链是围绕核心企业，通过对信息流、物流、资金流的控制，从采购原材料开始，制成中间产品以及最终产品，最后由销售网络把产品送到消费者手中的，将供应商、制造商、分销商、零售商、直到最终用户连成一个整体的功能网链结构。为了对供应链有更深入的了解，我选择零售商（校园超市）这一供应链环节，并以本校（四川交通职业技术学院）为假设对象，对校园超市的供应链做了系统设计。

一、超市市场竞争环境分析

1、消费对象（购买者）：本超市建在学校，所以顾客基本上是面对学校的师生和周围的一些外来人员、工作人员。而通过观察我们学校的超市较多，且分布较集中，大多数超市都是集中分布在两个食堂周围，或多或少总有那么两三家聚集分布在一起；我们学校大概有一万多余学生，消费群体较大，具有较大的超市投资商机。

2.需求分析：因为本超市建于学校，所以消费群体多是在校学生，而学生消费的产品大多是生活、学习用品、以及各类食品等。我校学生人数较多，需求量相对较大。

二、超市所在供应链成员分析

1、供应商：温江批发市场、成都食品批发市场、成都小商品批发市场等等。

2、校园超市

请浏览后下载，资料供参考，期待您的好评与关注！

3、消费群体：学生、教室、其他工作人员等。

三、超市基本布局图

四、进货

贵州财经大学

课程 论 文

作 者：刘畅学 号：20161204111025 系 部：会计学院 专 业：会计专硕

题 目：基于价值链的企业战略管理成本研究

2016 年 10 月 贵州

1

在企业间竞争日趋激烈的形势下,战略成本管理在企业管理中的地位越来越重要。然而,价值链分析—战略成本管理的出发点,在应用中表现出很大的局限性,直接阻碍了战略成本管理的广泛应用。因此,本文选择价值链分析在战略成本管理中的应用作为研究对象。

一、价值链分析

价值链是美国的麦克尔·波特于年在其所著的《竞争优势》一书中首先提出的。波特认为价值链是企业为了创造顾客价值而进行的一系列的作业。最初,波特将价值链描述为一个公司用以“设计、生产、推销、交货以及维护其产品”的内部过程和作业。他将企业的作业分为两大类基本活动和辅助活动。基本活动为进货后勤、生产、出售后勤、销售、售后服务等一系列活动，辅助活动为基础设施、人力资源管理、技术开发、采购，基本活动和辅助活动都为企业的利润服务。因此可以得出以下结论，将企业的经营过程看成是一个价值创造过程,这一过程中的各项价值活动按照一定的逻辑关系连接在一起构成了一个链,这个链就是企业的价值链。

二

苏教版语文教材六年级上册《 8 爱之链》教案

望 重 小 学

刘 萍 2012年10月

苏教版教材六年级上册

8. 爱之链

一、教学目标：

1、学会本课8个生字，理解由生字组成的词语。 2、能正确、流利、有感情地朗读课文。

3、凭借课文的语言文字，让学生充分感受人间真情，知道当别人需要帮助的时候，应该给予无私的帮助。

4、联系课文内容，理解最后一句话的意思。学习通过描写人物的神态、动作和语言来表现人物的品质的写法。 二、教学重难点：

1、凭借课文的语言文字，让学生充分感受人间真情，知道当别人需要帮助的时候，应该给予无私的帮助。

2、联系课文内容，理解最后一句话的意思。学习通过描写人物的神态、动作和语言来表现人物的品质的写

苏教版语文教材六年级上册《 8 爱之链》教案

望 重 小 学

刘 萍 2012年10月

苏教版教材六年级上册

8. 爱之链

一、教学目标：

1、学会本课8个生字，理解由生字组成的词语。 2、能正确、流利、有感情地朗读课文。

3、凭借课文的语言文字，让学生充分感受人间真情，知道当别人需要帮助的时候，应该给予无私的帮助。

4、联系课文内容，理解最后一句话的意思。学习通过描写人物的神态、动作和语言来表现人物的品质的写法。 二、教学重难点：

1、凭借课文的语言文字，让学生充分感受人间真情，知道当别人需要帮助的时候，应该给予无私的帮助。

2、联系课文内容，理解最后一句话的意思。学习通过描写人物的神态、动作和语言来表现人物的品质的写