糖基化终产物检测

糖基化对膜蛋白功能影响常常是很重要的，对特异的生物学功能起介导作用:1，对细胞具有保护、稳定、组织及屏障等多方面作用；

2，可作为外源性受体的特异性配体，某些糖连可作为各种病毒、细菌及寄生物的特异受体； 3，糖连也可作为内源性受体的特异性配体，参与介导清除、周转及胞内穿行作用；

4，最后要说的正是我所关心的：在受精和发育生物学中，糖连在受精过程中起着重要的作用，这方面的证据有：在小鼠卵透明带糖蛋白ZP3上的O－聚糖参与精卵结合。 活细胞中去糖基化的方法： 1，衣霉素在体内阻断N－连糖，

2，将内切神经氨酸酶注入发育中的视网膜提示了多唾液酸的特异性作用－－将高纯度酶注入细胞内＋恰当的对照

3，将糖基修饰酶的cDNA在活细胞或动物中表达 4，在培养环境中加入凝集素或抗体把特异的聚糖封闭掉

定点突变。一般蛋白质的突糖基化位点是一定的，各个物种相对比较保守，这个很容易就能分析出来，克隆到这个基因之后就可以使用引物突变等方法使糖基化位点发生定点突变，然后转入载体进行表达就可以得到去糖基化的蛋白。

蛋白质的修饰与加工包括糖基化、羟基化、酰基化、二硫键形成等，其中最主要的是糖基化，几乎所有内质网上合成的蛋白质最终被糖基化。

糖基化的作用是：①使蛋白质

药 物 生 物 技 术

PharmaceuticalBiotechnology 2011,18(1):077~080

77

蛋白质糖基化的研究进展

王家红,童 玥,朱 玥,田 浤,高向东

*

(中国药科大学生命科学与技术学院,江苏南京210009)

摘 要 作为一种普遍存在的翻译后修饰,糖基化对蛋白质的结构和功能有着重要影响,弄清糖基化发生发展的规律是理解蛋白质复杂多样的生物功能的一个重要前提。文章就糖基化对蛋白质结构的影响、对治疗性蛋白的药理学意义、糖基化位点分析及糖链分析方法作了简要介绍。

关键词 糖基化;蛋白质结构;药理学意义;糖基化位点;糖链分析

中图分类号 Q51 文献标志码 A 文章编号 1005-8915(2011)01-077-04

蛋白质糖基化修饰是最重要的蛋白质翻译后修饰之一,蛋白质功能的实现多与糖基化修饰密切相关。糖基化对于蛋白质的折叠、运输、定位起着重要作用,并参与受体激活、信号转导等诸多重要的生物进程[1]。蛋白质的糖基化,特别是N-连接糖基化普遍发生在细胞外环境的蛋白质中,包括膜蛋白、分泌蛋白和体液中蛋白,而这些恰巧都是容易获得并易于用作诊断和治疗的对象,因此,许多临床的生物标志物及治疗的靶标常是糖蛋白。系统定性定量分析糖蛋白

辣椒天然产物高值化提取分离关键

技术与产业化

一、项目简介

辣椒红、辣椒素是重要的天然功能提取物, 在国际贸易中占有较大比重,自20世纪50年代美国率先在辣椒中成功提取了

辣椒红色素, 辣椒天然产物提取成为辣椒产业发展的主要方

向。美国、西班牙、印度先后引领并主导了辣椒提取产业的发

展。我国是辣椒资源大国，传统上以简单加工及原料出口为主，

自90年代开始进行辣椒提取加工，采用与国外类似的间歇静置

工艺，生产各环节独立，周期长、提取率低、溶剂和能耗大、

质量安全无保障，辣椒红年产量60吨，不足世界产量的2%，严重依赖进口。针对以上问题，项目经过十余年潜心研究和反复

实践，集成开发了原料处理、同步提取分离、质量控制及精深

加工产业关键技术及装备并实施了产业化应用，取得了重要创

新性进展。

1、揭示辣椒红、辣椒素极性差异，开发同步提取高效分离

工艺技术与装备。研究揭示了辣椒红、辣椒素及杂质在溶剂中

溶解和分配规律，设计互溶的复合溶剂体系，开发连续逆流梯

度提取、多级连续离心分离的同步提取与高效分离技术，集成

系列装备的改造、研制和一体化设计，建成世界首条连续化、

规模化辣椒提取分离生产线，辣椒红和辣椒素提取率比传统工

艺高8%和55%，达98%和95%；胶质含量为传统工艺的1/10和1

细胞代谢产物提取物中分解产物的鉴定

摘要：分析细胞代谢产物的方法大多数都需要从细胞中提取代谢产物。这些方法关注的是由于提取不完整造成对代谢水平的估计不足。然而，通过这些提取方法的比较，似乎提取一个特定的代谢产物最好的方法是使产量达到最大。在以不同浓度甲醇水溶液提取大肠杆菌的实验中：通过液相色谱-串联质谱法对提取结果进行分析，我们观察到使用含水量≥50%的溶液进行提取得到的核苷和碱基的产量比使用含水量≤20%的溶液进行提取要高。然而，在提取物中添加标记了同位素的核苷进行示踪显示，核苷和碱基的高产量是由于核苷和核苷酸在水分充足条件下分解导致的，而不是因为采用了良好的提取方法。同位素示踪标记法是检测细胞代谢物提取物中分解产物普遍采用的一个方法。甲醇水溶液提取大肠杆菌实验中，低温和高浓度的甲醇最大限度的降低了代谢物的分解。

关键词：代谢组学；新陈代谢；提取；细菌；取样；稳定性；液相色谱-质谱/质谱法；三重四极杆；小分子

细胞代谢网络在生物学，将吸收的营养物质转化成能源，生物大分子亚基和信号分子中起着基础性作用。由于这些过程的重要性，人们对尽可能完整的理解细胞代谢活动有很大的兴趣。为此，在过去5年研究中，在并行文献中看到试图对细胞代谢网络的

实验一水蒸气蒸馏法提取萜类及挥发油

一、实验目的

1、了解水蒸汽蒸馏的基本原理和应用，掌握水蒸汽蒸馏的方法。 2、掌握萜类和挥发油的提取原理及方法。

二、基本原理

水蒸汽蒸馏的操作是将水蒸汽通入有机物中，或将水与有机物一起加热，使有机物与水共沸而蒸馏出来的过程。水蒸汽蒸馏是分离和提纯有机物质的常用方法。当两种互不相溶的液体混合在一起时，混合物的蒸气压应为各组分蒸气压之和。由于两种组分互不相溶，彼此相互影响很小，混合物中每一组分在某温度下的分压等于其纯态时在该温度下的蒸气压。当混合物受热至各组分的蒸气压之和等于外界大气压时混合物即沸腾。

例如，把苯胺和水的混合物加热至98.4℃，混合物开始沸腾。因为在98.4℃时，苯胺的蒸气压为42mmHg，水的蒸气压为718mmHg，两者相加等于760mmHg。显然，苯胺—水混合物的沸点既低于苯胺的沸点（184.4℃），也低于水的沸点。因此，沸点高于100℃的有机物，利用水蒸汽蒸馏，可以在低于100℃的温度下蒸馏出来。根据气体分压定律，水蒸汽蒸馏的混合蒸气中个别气体分压（PA、P水）之比等于它们的摩尔数之比（nA、n水表示这两种物质在一定容积的气相中的摩尔数），即：PA：P水= nA：n水，因为馏出液是由蒸气

天然产物化学（天然药物化学）实验教学大纲

课程编号：10080063

课程英文名称：The Experimental of Natural Products/Medicinal Chemistry 课程性质：独立设课 课程类别：专业必修课

学时学分：总学时：36；总学分：1；实验学时：36；实验学分：1 先修课程：有机化学、分析化学等 适用专业：中药学

开课单位：药学院天然药物化学教研室

项目总数 3 综合性、设计性实验项目数 3

一、实验目的及要求

实验一 一叶萩碱的提取、分离与鉴定

目的：通过一叶萩碱的提取、分离和鉴定要求学生掌握用离子交换树脂法提取和

分离生物碱的基本原理和方法，以及衍生物制备方法。 要求：分离得到一叶萩碱纯品，制备其衍生物，并鉴定其化学结构。

实验二 芦丁的提取、分离与鉴定

目的：1、通过芦丁的提取与分离，掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作；

2、通过芦丁的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法； 3、了解乙酰化芦丁结构研究的一般程序和方法； 4、学习UV及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。 要求：1、分离得到芦丁、槲皮素、全乙酰化芦丁；

2、能够根据化学试验及UV、NMR数据初步

细胞代谢产物提取物中分解产物的鉴定

摘要：分析细胞代谢产物的方法大多数都需要从细胞中提取代谢产物。这些方法关注的是由于提取不完整造成对代谢水平的估计不足。然而，通过这些提取方法的比较，似乎提取一个特定的代谢产物最好的方法是使产量达到最大。在以不同浓度甲醇水溶液提取大肠杆菌的实验中：通过液相色谱-串联质谱法对提取结果进行分析，我们观察到使用含水量≥50%的溶液进行提取得到的核苷和碱基的产量比使用含水量≤20%的溶液进行提取要高。然而，在提取物中添加标记了同位素的核苷进行示踪显示，核苷和碱基的高产量是由于核苷和核苷酸在水分充足条件下分解导致的，而不是因为采用了良好的提取方法。同位素示踪标记法是检测细胞代谢物提取物中分解产物普遍采用的一个方法。甲醇水溶液提取大肠杆菌实验中，低温和高浓度的甲醇最大限度的降低了代谢物的分解。

关键词：代谢组学；新陈代谢；提取；细菌；取样；稳定性；液相色谱-质谱/质谱法；三重四极杆；小分子

细胞代谢网络在生物学，将吸收的营养物质转化成能源，生物大分子亚基和信号分子中起着基础性作用。由于这些过程的重要性，人们对尽可能完整的理解细胞代谢活动有很大的兴趣。为此，在过去5年研究中，在并行文献中看到试图对细胞代谢网络的

天然产物化学答案

1.研究天然产物化学与利用的意义 答：

2.天然产物化学成分的分离方法

3.树脂在植物界中的存在和采取、树脂的分类 4.连续蒸汽法松脂加工

5.松脂间歇蒸馏与连续蒸馏不同处 6.下降采脂法、上升才脂法 7.松香分类 8.松香化学组成 9.松香化学性质歧化 10.松香用途

11.分散松香胶制备方法

12.氢化松香缩水甘油酯的合成反应方程式 13.氢化松香特点及应用 14.歧化松香特点及应用 15.紫胶来源及应用 16.紫胶树脂组分分离路线 17.紫胶片的加工方法 18.紫胶蜡的提取工艺 19.生漆特点和应用 20.栲胶的主要成分

21.单宁的化学性质 22.列举栲胶具体应用 23.栲胶的净化方法 24.冷杉树脂的采集 25.冷杉胶生产工艺 26.冷杉胶的用途 27.桦树漆的用途 28.桦树皮漆的生产工艺 29.精油的定义 30.松节油的分类 31.松节油的分离技术

32.松节油连续法分离技术工艺流程 33.松节油化学成分的典型研究方法 34.柠檬油分类

35.白柠檬鲜果加工工艺流程 36.橙油的生产方法

37.压榨法生产橙油工艺特点 38.薄荷油生产工艺流程 39.精油加工工艺要求 40

第二十一章 天然产物的结构修饰

大约60％的世界人口依赖草药和天然药物来治疗疾病，天然产物长期以来被认为是有效治疗药物的重要来源。从1983~1994年间生产上市的520种新药中，39％是天然产物或者衍生自天然产物（其中天然产物约占20％，而天然产物的衍生物约占80％），尤其60% 80％的抗菌和抗癌药来自天然产物。1999年统计的20个非蛋白的畅销药中有9个是来自天然产物或从其衍生出来，如天然产物中新开发出的新药抗疟药青蒿素（artemisinin）和其衍生物蒿甲醚（artemether）、抗癌药紫杉醇（taxol）及其类似物紫杉醚（taxotere）、长春碱（vinblastine）和长春新碱（vincristine）和它们的结构修饰物长春地辛（vindesine）和治疗早老性痴呆药石杉碱甲（huperzine A）及其衍生物希普林（schiperine）等。

世界各国和地区投入大量的人力和财力，积极开展对天然药物的研究，从天然产物中寻找新药或先导化合物的研究是当前国内外创制新药的重要研究方向和非常活跃的研究领域。除了从天然产物直接研究开发成有效的治疗新药物外，天然产物还是新药开发所依赖的新先导化合物取之不尽的源泉。与天然产物相关的新的化学

天然产物

一些天然产物的含量测定方法

成分名称 提取方法 流动相 检测波长(纳米) 流速 柱温

丹参酮IIA 甲醇回流 甲醇-水(75:25/73：27) 270 1 室温

丹酚酸B 75%乙醇回流 甲醇-乙腈-甲酸-水(30:10:1:59) 286 1 室温

丹参素 水,超声/乙醇-水超声/盐酸(1->10)50毫升,超30分钟,冷,补足,氯化钠5克,取上清液25毫升,乙乙提取4次,合并,干,50%甲醇溶,定10毫升./50%甲醇超提 甲醇-水-乙酸(8:91:1)/乙腈-水-磷酸(2:60:0.5)/乙腈-水-乙酸(9:90:1)/甲醇-二甲基甲酰胺-水-乙酸(4:4:90:2/2:95:2:1)/甲醇-0.4%乙酸(5:95)/甲醇-1%乙酸(8:92)/乙腈-甲醇-水-冰醋酸（0.5：8：92：1） 280 1 室温

天然产物

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