原核诱导表达在生产生活中的应用实例

原核诱导表达的标准操作程序（SOP） 一．目的：

使本实验室工作人员了解诱导表达的操作过程，并能实际动手进行原核诱导表达一系列实验。

二．适用范围：

本SOP适用于对新基因克隆的表达，并针对新基因产生的可溶性蛋白。

三．实验原理：

E.coli的乳糖操纵子含Z、Y及A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶，此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节基因I。I基因编码一种阻遏蛋白，后者与O序列结合，使操纵子受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个代谢物基因激活蛋白（CAP）结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区，三个酶的编码基因即由同一调控区调节，实现基因产物的协调表达 。在没有乳糖存在时，lac操纵子处于阻遏状态。此时，I序列在PI启动序列操纵下表达的Lac阻遏蛋白与O序列结合，阻碍RNA聚合酶与P序列结合，抑制转录起动。当有乳糖存在时，lac操纵子即可被诱导。在这个操纵子体系中，真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞，经b－半乳糖苷酶催化，转变为半乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白，使蛋白构象变化，导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录

原核诱导表达的标准操作程序（SOP） 一．目的：

使本实验室工作人员了解诱导表达的操作过程，并能实际动手进行原核诱导表达一系列实验。

二．适用范围：

本SOP适用于对新基因克隆的表达，并针对新基因产生的可溶性蛋白。

三．实验原理：

E.coli的乳糖操纵子含Z、Y及A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶，此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节基因I。I基因编码一种阻遏蛋白，后者与O序列结合，使操纵子受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个代谢物基因激活蛋白（CAP）结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区，三个酶的编码基因即由同一调控区调节，实现基因产物的协调表达 。在没有乳糖存在时，lac操纵子处于阻遏状态。此时，I序列在PI启动序列操纵下表达的Lac阻遏蛋白与O序列结合，阻碍RNA聚合酶与P序列结合，抑制转录起动。当有乳糖存在时，lac操纵子即可被诱导。在这个操纵子体系中，真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞，经b－半乳糖苷酶催化，转变为半乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白，使蛋白构象变化，导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录

一、统计学在经济生活中的应用

统计学的出生是研究国家状况的，譬如统计全国人口状况、农业收成、经济情况等数据，对一国经济与社会发展做统计性调查与研究。经过多年的发展，统计学在社会生活中的应用被专家学家们系统化专业化，形成了不同流派不同类别的统计学。而现在的人文社会统计分类便是对社会生活中统计学应用的专业化成果。

前面提到过的人口普查、经济情况调查等都是统计学在社会生活中的应用。早在17世纪，统计学在社会生活中的应用就被提出了。在约翰·格朗特1662年出版了《对死亡表的自然观察和政治考察》一书中，格朗特通过观察客观现象的数量关系，揭示出一系列统计规律，如男婴出生高于女生，男性死亡高于女性等，同时他还用最新颖的方法编制出了死亡率表。18世纪中末叶到19世纪中末叶期间概率论与统计学成功结合，使得统计学在生活中的应用更加被加以重视。

在当代社会，统计学的应用越来越普及，人口学中的统计学应用（进行优生优育）、社会发展与评价、持续发展与环境保护、资源保护与利用、宏观经济监测与预测、政府统计数据收集与质量保证等都依赖于各类科学的统计方法。

二、统计学在企业生产及社会经济生活中的应用

统计学在企业生产、经济生活中的应用很广，其中包括了保险精算、金融业数据库建设与风险管理

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触摸屏控制技术在生产生活中的应用

作者：陈土军

来源：《赢未来》2018年第23期

摘要：伴随着我国社会科学技术的不断发展，触摸屏控制技术在生产和日常生活中的实际应用已经越来越广泛。在工业生产中，工业触摸屏主要是通过触摸式的工业现实器将人和智能机器人进行一体化的界面，其能够在一定程度上去代替以往的控制按鈕的操作，其还能够用于设置参数和监控设备的状态，以动画，曲线等形式去描绘出自动化控制过程，能够让工业生产变得更具智能化。在生活中的应用其能够在人们的手机，平板电脑等产品中使用，能够带给人们无限多的欢乐，还能够让人们在体验上有新的感受。本文主要分析了触摸屏控制技术在人们的生产生活中应用的问题，供实际应用时参考与借鉴。 关键词：触摸屏；控制技术；生产应用；生活应用 前言：

随着我国现代化信息网络技术的不断发展，触摸屏控制技术的实际应用已经涉及到了各个行业当中，比如在生活中其体现在液晶屏，手机，平板电脑等物品中，在工业生产中其主要体现在，触摸式显示屏、操控屏、智能仪表及智能机器人中。触摸屏技术有着很多的优点，其能够在生产生活中提

[Merck推荐]原核表达秘笈之宿主菌株选择指南

在原核蛋白表达过程中，选择构建一个合适原核表达体系需要综合考虑3大因素：表达载体、宿主菌株、表达诱导条件,以获得最满意的表达效果。 事实上，在平时的实验中，最容易被忽视的就是宿主菌的选择——多数人会直接选择自己实验室曾经用过的表达菌株，或者是载体配套的菌株，而不去追究原因——即使表达结果不佳，大多在表达条件和载体上找原因，也不会考究菌株的选择是否适合。

作为原核表达的宿主，对外源基因的表达会产生一定的影响，是勿庸置疑的。每一个宿主细胞都像一个微观的小工厂，按照细胞固有的程序完成“你给它们安排的生产任务”——因为很难亲眼观察微观世界中表达是如何进行的，当出现问题时，我们需要经验判断问题所在。宿主细胞对原核表达可能会产生哪些影响呢？

知其然还要知其所以然。比如，菌株内源的蛋白酶过多，可能会造成外源表达产物的不稳定，所以一些蛋白酶缺陷型菌株往往成为理想的起始表达菌株。堪称经典的BL21系列就是lon和ompT蛋白酶缺陷型，也是我们非常熟悉的表达菌株。大名鼎鼎的BL21(DE3)融源菌则是添加T7聚合酶基因，为T7表达系统而设计。

真核细胞偏爱的密码子和原核系统有不同

原核：（1）、要构建一个合适的原核表达载体的基本要求：

①有一个强的启动子及其两侧的调控序列； ②有SD序列及SD序列与起始密码子之间要有

合适的距离； ③在克隆基因与启动子之间有正确的阅读框架； ④外源基因下游加入不依赖ρ因子的转录终止区。（2）、编码基因要完整，没有插入序列；（3）、将真核基因克隆到原核基因中，以保证产物表达的稳定性；（4）、克隆基因中保留信号肽序列，使表达产物自细菌分泌到溶液中，有利于产物的分离纯化。 表达详细步骤

PartⅠ选择表达的目的基因

一、 基因序列

1. 得到靶基因DNA（cDNA）序列，有几种方式寻找正确的读码顺序:

① 利用生物信息学在NCBI上blast同源基因，找到同源蛋白，再在DNA的ORF中找到正确的读码。

② 实验方法，即得到蛋白，进行测序，然后在DNA上找到正确的读码。 ③ 利用mRNA的特征，找到启动子，编码区，终止子。在编码区中找到翻译起始密码子与终止密码子（cDNA）。 2. 注意事项：

①区别ORF和CDS→ORF一般在DNA上的定义，寻找原则是翻译起始密码子和终止密码子；CDS可以是DNA上的定义，也可以是mRNA上的定义，分为complete CDS和part

原核表达步骤

原核表达先要将基因克隆到原核表达载体上，然后通过转化到JM109或BL21等菌株中，诱导表达蛋白，然后进行蛋白纯化。本实验方案的前提是，目的基因已克隆到载体，并已转进入JM109菌株中。

一． 鉴定目的蛋白是否在大肠杆菌JM109或BL21中大量表达 （一） 制样

1 . 挑取经过双酶切鉴定的单克隆菌落于700ul LB培养基，加入0.7ul Amp（100mg/mL），37oC200r/min摇床培养，过夜活化。 2. 以1：50比例（200ul），将活化的过夜培养物加入10mL LB液体培养基中，加入10uLAmp（100mg/ml），37oC200r/min摇床扩大培养2h-3h，期间取样监控菌液的OD值，控制菌液OD600在0.6-1.0之间，以使大肠杆菌处于最适合表达外源蛋白的生长状态。(一般3h时，菌液浓度及达到标准，但是不同的基因对菌的影响不同，所以第一次实验时需要确定这个最佳时间)

3. 从10ml扩大培养物中取3ml菌液作为不加IPTG的空白对照（CK），其余7ml菌液加入7ul IPTG（储存浓度为0.5mol/l），使IPTG终浓度达到0.5mmol/l。以200r/min的转速，37oC摇床培养3h。

4. 以50

概率在生活中的应用

1409025 金哲明 机械一班

概率论在一定的社会条件下，通过人类的社会实践和生产活动发展起来，被广泛应用于各个领域，在国民经济的生产和生活中起着重要的作用。正如英国逻辑学家和经济学家杰文斯（Jevons，1835-1882）所说：概率论是“生活真正的领路人，如果没有对概率的某种估计，我们就寸步难行，无所作为”。在日常生活中，同样不难发现，周围的许多事物都和概率有着千丝万缕的联系，下面将说明概率统计在生活中的应用。 一、数学期望在求解最大利润问题中的应用 如何获取最大利润不但成为商界追求的目标，同时也为越来越多的人所关注，许多数学模型也从概率角度利用期望求解最大利润问题，为问题的解决提供新的思路。下面就是一道应用期望探讨利润的问题。

例1、五一期间，某鲜花店某种鲜花的进货价为每束2.5元，销售价为每束5元。若在五一期间内没有售完，则在五一期间营业结束后以每束1.5元的价格处理。据前5年的有关资料统计，五一期间这种鲜花的需求量为20束、30束、40束和50束的概率分别为0.20、0.35、0.30和0.15。问该鲜花店今年春节前应进该鲜花为多少束为宜？

分析售出一束鲜花能获得利润5-2.5=2.5元

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大数据在生活中的应用

作者：霍素墨

来源：《电子技术与软件工程》2017年第22期

随着我国信息化时代的到来，统计管理能力得到了明显的提升，计算机统计的效能直接影响着我们的生活。计算机大数据统计在人们生产生活中的应用也越来越普遍，使我们的工作更加高效。由此，本文主要对计算机大数据使用的领域进行分析，并提出一些注意和改进的措施，便于大数据工作的发展和提高。 【关键词】大数据 生产生活 提高

大数据又称巨量资料，具有大量、高速、多样、价值四个特点，是对所有数据进行分析处理，现在是信息化时代，网上购物、无纸办公、手机支付在带来便利的同时也在改变我们的生活方式，现在就大数据在生活中的应用浅谈几点看法： 1 大数据统计分析切实有效，在一定程度上改变我们的生活

（1）在学校，在学生入校后，及时建立学生档案信息，并建立数据库，每次考试（包括月考、期中、期末考试），将每名考生的试卷答案录入系统，将差错重点标注，生成错题记录试卷，将学生容易出错或者知识掌握比较薄弱的部分，由辅导老师进行专项讲解，了解学生课业的短板，有针对性

化学在日常生活中的应用

内容摘要： 日常生活中，化学给人类带来许多方便，我们每天都要穿的衣服，吃的食物，住的房子，乘坐的交通工具，日常生活中每处都应用着化学，化学在每个方面都有很大用处。在一些重大的科学领域里，化学的作用也不小，火箭发射所需燃料，就是利用了氢氧燃烧得水的原理。化学给人类生活带来了变 化，化学无时不在人们生活的各种活动中。我们就化学对衣食住行用等几个方面的作用来研究。

关键词： 化学与生活 衣 食 住 行 用

随着生活水平的提高，人们越来越追求健康、高品位的生活，化学与生活的联系也日趋密切。只要你留心观察、用心思考，就会发现生活中的化学知识到处可见。化学是一门自然科学，有着丰富的实验内容。化学本应是一门生动的、贴近生活的、探求自然奥秘的一门学科。生活中充满着化学的踪影，化学就在我们身边，用化学知识可以解决生活中的实际问题。化学可以服务于社会，服务于其它学科，服务于人类自身。设计实验，改进实验，探究和创新。培养出有科学头脑，有科学方法，有化学理念，有辩证唯物主义世界观的新人。

一．化学在衣服中有应用

在这一方面，化学可谓给生活增添温暖。尼龙，分子中含有酰铵键的树脂，自然界中并不存在，需要靠化学方法得到