wb实验原理图解

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western印迹技术

SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳技术首先在1967年由Shapiro等建立，主要用于测定蛋白质亚基分子量。Western 印迹是在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳基础上，将电泳分离的蛋白组分从凝胶转移至一种固相支持物上，应用抗体可与附着于固相支持物上的靶蛋白发生特异性反应的特点，针对特定蛋白进行鉴别和定量。 原理

1． SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳

SDS是一种阴离子去污剂，作为变性剂和助溶剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。强还原剂，例如巯基乙醇和二硫苏糖醇则能使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入SDS和还原剂后，蛋白质分子被解聚，使其氨基酸侧链与SDS充分结合形成带负电荷的蛋白质-SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，这就消除了不同分子之间原有的电荷差异。在水溶液中蛋白质-SDS胶束的长度与亚基分子量的大小成正比。因此这种胶束在SDS聚丙烯酰胺凝胶系统中的电泳迁移率不再受蛋白质原有电荷的影响，而主要取决于蛋白质或亚基分子量的大小。当蛋白质的分子量在15KD～200KD之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系。由此可见，SDS聚丙烯

变频器工作原理图解.doc

变频器工作原理图解

1 变频器的工作原理

变频器分为 1 交---交型 输入是交流，输出也是交流

将工频交流电直接转换成频率、电压均可控制的交流，又称 直接式变频器

2 交—直---交型 输入是交流，变成直流 再变成交流输出

将工频交流电通过整流变成直流电，然后再把直流电变成频率、电压、均可控的交流电 又称为间接变频器。

多数情况都是交直交型的变频器。

2 变频器的组成

由主电路和控制电路组成

主电路 由整流器 中间直流环节 逆变器 组成

先看主电路原理图

三相工频交流电 经过VD1 ~ VD6 整流后， 正极送入到缓冲电阻RL中，RL的作用是防止电流忽然变大。经过一段时间电流趋于稳定后，晶闸管或继电器的触点会导通

短路掉缓冲电阻RL ，这时的直流电压加在了滤波电容CF1、CF2 上，这两个电容可以把脉动的直流电波形变得平滑一些。由于一个电容的耐压有限，所以把两个电容串起来用。 耐压就提高了一倍。又因为两个电容的容量不一样的话，分压会不同，所以给两个电容分别并联了一个均压电阻R1、R2 ，这样，CF1 和CF2 上的电压就一样了。

继续往下看，HL 是主电路的电源指示灯，串联了一个限流电阻接在了正负电压之间，这样三相电

交流接触器控制原理图解

交流接触器是一种主触点常开的、三极的、以空气作灭弧介质的电磁式交流接触器。其组成部分包括：线圈、短路环、静铁芯、动铁芯、动触头、静触头、辅助常开触头、辅助常闭触头、压力弹簧片、反作用弹簧、缓冲弹簧、灭弧罩等原件组成，交流接触器有CJO、CJIO、CJ12等系列产品，我国常用的CJO一20型交流接触器的外形结构如图其主要组成部分如下图所示：

1一灭弧罩 2一触点压力弹簧片 3一主触点 4一反作用弹簧 5一线圈 6一短路环 7一静铁心 8一弹簧 9一动铁心

10一辅助常开触点 11一辅助常闭触点

电磁系统：它包括线圈、静铁心和动铁心（又称衔铁）。

触点系统：它包括主触点和辅助触点。主触点允许通过较大的电流，起接通和切断主电路的作用，通常以主触点允许通过的最大电流（即额定电流）作为接触器的技术参数之一。辅助触点只允许通过较小的电流，使用时一般接在控制电路中。

交流接触器的主触点一般为常开触头，辅助触头有常开的也有常闭的。额定电流较小的接触器，具有四个辅助触点；额定电流较大的，具有六个辅助触点。CJ10-20型接触器的三个主触点是常开的；它有四个辅助触点，二个常开，二个常闭。

所谓常开、常闭是指电磁系统未通电动作前触头的状态，即常开触头是指

汽车电控发动机原理图解教案6

第六章 柴油机电控燃油供给系统

本章主要介绍的内容有： 本章主要介绍的内容有：第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 柴油机电控喷油系统概述 电控直列泵喷射系统 电控分配泵喷射系统 电控共轨式燃油喷射系统 柴油机燃油供给系统的检修

汽车电控发动机原理图解教案6

第一节 柴油机电控喷油系统概述本节主要介绍的内容有： 本节主要介绍的内容有：一、发展历程 二、组成和原理 三、主要控制内容

汽车电控发动机原理图解教案6

一、发展历程1. 第一代(凸轮压油+位置控制) 第一代(凸轮压油+位置控制) 如下图所示。 第一代电子控制式燃油喷射装置中，将机械式调速器和提前器 换成电子控制的机构。燃油压送机构和机械式燃油系统相同。

汽车电控发动机原理图解教案6

2. 第二代(凸轮压油+电磁阀时间控制) 第二代(凸轮压油+电磁阀时间控制) 如下图所示。 第二代电控喷油装置是在第一代位置控制式的基础上发展起来 的。采用高速电磁阀对喷油量和喷油时间进行时间控制。

汽车电控发动机原理图解教案6

3.

第三代(燃油蓄压+电磁阈时间控制) 第三代(燃油蓄压+电磁阈时间控制)

第三代柴油机电控燃油系统是第二代的进一步发展，将喷油量和 喷油时间控制融为一体，使燃油的升压机

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第六章 柴油机电控燃油供给系统

本章主要介绍的内容有： 本章主要介绍的内容有：第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 柴油机电控喷油系统概述 电控直列泵喷射系统 电控分配泵喷射系统 电控共轨式燃油喷射系统 柴油机燃油供给系统的检修

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第一节 柴油机电控喷油系统概述本节主要介绍的内容有： 本节主要介绍的内容有：一、发展历程 二、组成和原理 三、主要控制内容

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一、发展历程1. 第一代(凸轮压油+位置控制) 第一代(凸轮压油+位置控制) 如下图所示。 第一代电子控制式燃油喷射装置中，将机械式调速器和提前器 换成电子控制的机构。燃油压送机构和机械式燃油系统相同。

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2. 第二代(凸轮压油+电磁阀时间控制) 第二代(凸轮压油+电磁阀时间控制) 如下图所示。 第二代电控喷油装置是在第一代位置控制式的基础上发展起来 的。采用高速电磁阀对喷油量和喷油时间进行时间控制。

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3.

第三代(燃油蓄压+电磁阈时间控制) 第三代(燃油蓄压+电磁阈时间控制)

第三代柴油机电控燃油系统是第二代的进一步发展，将喷油量和 喷油时间控制融为一体，使燃油的升压机

实验一 原理图绘制实验

一、 实验目的

1、掌握Protel2004的基本操作。 2、掌握原理图编辑器的基本操作。 3、掌握简单和复杂电路原理图的绘制。 4、掌握总线和网络标号的使用。

5、掌握电路图的编译校验、电路错误修改和网络表的生成。

二、 实验内容

1、绘制一单管放大电路，如下图

⑴新建项目文件，将文档另存为 学号+姓名.PrjPCB。

⑵新建原理图文件，将文档另存为单管放大电路.SCHDOC。

⑶参数设置。设置电路图大小为A4、横向放置、标题栏选用标准标题栏，捕获栅格和可视栅格均设置为10mil。

⑷载入元件库Miscellaneous Devices.InLib。

⑸放置元件。如图2-109所示，从元件库中放置相应的元件到电路图中，并对元件做移动、旋转等操作，同时进行属性设置，其中无极性电容的封装采用RAD-0.1，电解电容的封装采用CAPPR1.5-4x5，电阻的封装采用AXIAL-0.4。

⑹全局修改。图2-109中各元件的标号和标称值的字体改为小四号宋体，设置元件【注释】为“=Value”，并隐藏【注释】，观察元件变化。 ⑺选中所有元件，并将元件删除。

⑻绘制图2-15所示的单管放大电路，元件封装均使用默认，完成后将文件存盘

WB 实验步骤

1. 蛋白提取，吸出培养基，用适量DPBS清洗，吸出DPBS，尽量吸干净，加入适量细胞裂解液，冰上裂解15-30min

2. 用细胞刮刀刮取皿或瓶底部的细胞，收集至1.5ml的离心管中，12000rpm离心，4度，15-30min将上清转移到新的离心管中 3. 检测蛋白浓度，定量（20-40ug），用水和蛋白上样缓冲液配成30ul以内的体积，100度变性10min，冷却后离心，上样

4. 将胶装在电泳槽内，加入1x电泳缓冲液到指定刻度，拔出梳子用注射器清洗胶孔，上样 5. 60V电压压缩蛋白至同一位置（分离胶与浓缩胶交界处），130V分离蛋白。配置转膜缓冲液，并将膜浸泡其中，4度预冷

6. 待蓝色的缓冲液条带到达距离胶底面0.5cm处即可开始转膜，按照从负极到正极海绵，滤纸，胶，膜，滤纸，海绵的顺序组装，避免产生气泡，对应正负极放入转膜槽

7. 低温转膜90min，丽春红染色，初步判定WB效果，并在对应位置将目的条带剪下来 8. 用5%的脱脂牛奶封闭，室温1小时以上，用特定的一抗4度过夜 9. 清洗一抗，用适量的TBST，室温3次，每次10min

10. 加入对应的二抗，室温孵育1小时以上，并清洗3次，同9 11. 按1:1的

实验一 原理图输入设计

一、实验目的

1．熟悉QuartusII 9.1软件的使用。

2．通过半加器的设计，让学生掌握原理图输入的设计方法。 3．初步了解可编程器件设计的全过程。

二、设计原理

计算机中数的操作都是以二进制进位的，最基本的运算就是加法运算。按照进位是否加入，加法器分为半加器和全加器电路两种。计算机中的异或指令的功能就是求两个操作数各位的半加和。一位半加器有两个输入、输出，如图1-1。

图1-1 一位半加器示意图

表1-1 半加器真值表

输入 输出 Bi Ai Hi Ci 0 0 0 0 0 1 1 0 1 0 1 0 1 1 0 1 一个半加大路的真值表如表1-1所示，根据真值表可得到半加器的函数表达式：Hi?Ai?Bi?Ai?Bi?Ai?Bi Ci?Ai?Bi

三、程序设计

.按照表1-1半加器的电路图添加器件并连线。要想实现半加器的功能，需在图上添加一个二输入与非门及一个二输入异或门共同组成一个半加器，同时要添加4位功能选择位M[3..0]并设置状态为0001，使得16位拨码开关接到16位数据总线上。

半加器原理图如下：

1

四、程序分析

实验三 原理图元件制作

一．实验目的

1．掌握绘制元件符号的方法。

2．掌握绘制具有多个单元的元件符号的方法。 3．掌握原理图元件库的管理。 二．实验内容

1．打开原理图元件库文件 Protel DOS Schematic Libraries.ddb 进行浏览，浏览 7426、7437、74132元件，看看是否与74ALS00的图形一样。 2．在自己建的元件库如120356李伟大.lib中分别绘制一个NPN三极管、与非门、数码管、74ALS00符号。

图1练习电路图

3．绘制如图1所示电路图。 表 第 5 题电路图元件明细表 Lib Ref Designator Part Type Footprint CAP C3 0.01u RES2 R3 100K 4017 IC5 4017 CH233 IC6 CH233 DIODE D1 DIODE DPY_7-SEG DS1 DPY_7-SEG 元件库： IC5 根据 Protel DOS Schematic Libraries.ddb （ Protel DOS Schematic 4000CMOS.Lib ）中的 4017 修改，

实验基本步骤

提取细胞蛋白

↓ BCA定量

↓

制备蛋白胶（SDS-PAGE胶）

↓

蛋白样品变性

↓ 电泳 ↓ 转膜 ↓ 封闭 ↓ 一抗 ↓ TBST洗涤

↓ 二抗 ↓ TBST洗涤

↓ 显影 ↓ 结果分析

试剂配制

1.PBS磷酸盐缓冲溶液1L

磷酸二氢钾 0.24g 磷酸氢二钠 1.44g 氯化钠 8g 氯化钾 0.2g

加入500ml纯水，调PH=7.2 定容至1L,高压蒸汽灭菌

2.PBST（PBS+0.05%吐温-20）

500mlPBS+0.25ml吐温-20

3.电转液500ml

Tris 1.5g 甘氨酸 7.2g 400ml水溶解

加入100ml甲醇，置于4℃冰箱预冷

4.电泳液（1X）

10x稀释，50ml10x电泳液+450ml纯水

5.TBS

6.TBST（TBS+0.05%吐温-20）

50mlTBS+450ml纯水+0.25ml吐温-20

7.封闭液

TBST1X+5%奶粉

40ml封闭液=40mlTBST+2g奶粉，40℃预热

WB实验

一、蛋白样品制备

准备:一管细胞，PBS（4℃预冷），PMSF（100mM），移液枪（