细胞传代比例怎么计算

1.HePG2细胞和L-02细胞的传代：

HePG2细胞属人肝肿瘤的恒生细胞株，L-02细胞则是人胎肝细胞株，二者所使用的培养基可以是一样的，即最常见的DMEM。一干使用低糖的。

细胞长满培养瓶时既要传代。使用胰酶消化即可。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。使用前37度预热，细胞经PBS清洗两遍后，每个中号培养瓶加0.7ml的胰酶，胰酶的量可根据自己培养瓶的大小而定，原则就是能够盖满瓶底。加入胰酶以后，为使酶的活性最大，将培养瓶盖拧紧后放回培养箱中，3分钟左右即用含血清的培养基终止消化。如果在室温情况下消化，时间相应加长，可以在显微镜下观察，当细胞界限已十分清楚，即已分离为单个细胞，且有少量细胞漂起，则要终止消化了。

HepG2细胞株的传代经验：

首先在倒置显微镜下观察生长融合达80%，不需要长满，就准备传代。倒掉旧的培养基，再用已经高压灭菌过的PBS洗1－2次，我用的是25平方厘米的培养瓶，加入1毫升已经配制好的0.25%胰蛋白酶－0.02íTA(0.25%胰蛋白酶是用D-Hanks配制后先用滤纸过滤，再用一次性过滤器过滤除菌，再分装成1ml的小包装，刚好每次用完一个，避免每次反复冻存，会使胰酶的活性下降），加入的量以刚好盖满瓶

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

第五章 细胞的原代与传代培养

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

一、原代培养 概念：取自体内新鲜组织并臵于体外条 件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养技术的重要意义: 原代培养的最大优点是细胞刚刚离体，生物性 状尚未发生很大变化，具有二倍体的遗传性， 而且大多数细胞表现出原来组织的特性。 利用原代培养做各种实验，如药物测试、细胞 分化及病毒学方面的试验效果很好。 原代培养也是建立各种细胞系(株)必须经过 的阶段。

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原代培养

消化法贴块法

冷消化 温消化

一次性消化 分次消化

消化法：这种培养过程主要是采用无菌 操作的方法，把组织(或器官)从动物 体内取出，经酶消化处理，使分散成单 个细胞，然后在人工条件下培养，使其 不断地生长和繁殖。

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原 代 培 养 方 法 分 类

贴块法

消化法

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很

围绕siRNAs的相关实验详细步骤及总结

实验一：细胞传代培养

材料：15ml离心管、枪（头1ml、200ul、10ul）、无菌吸管、培养瓶、含10?S的RPMI—1640(OVCAR-3)、M5A(SKOV-3)、PBS、trypsin等

步骤：（以下均在超净台内，酒精灯旁操作）（SKOV-3）

1、打开超净台，将离心管、枪（头）、吸管等工具置于紫外线下照射30min；含10?S的RPMI—1640、trypsin、PBS放在37°C水浴恒温箱中预热。

2、取一个生长良好的细胞培养瓶（密度适中，细胞成梭形连接，贴壁良好），弃旧培养基，PBS 2ml 清洗2次（切勿用力吹打）。

3、用移液枪取trypsin 1ml沿细胞生长壁对侧壁注入，然后放平培养瓶，使贴壁细胞与trypsin充分接触，置于CO2培养箱2min左右（时间不能太长，以免损伤细胞）。

4、往培养瓶中加入1640 1~2ml，随后用移液枪将悬液移到15ml离心管中，离心1000 r/min，5min。

5、弃上清液，加入少量10?S的1640培养基使成细胞悬液。

6、分装，按1:2~3传代，每瓶4~5ml。倒置显微镜下观察（细胞突起消失变圆

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第五章 细胞的原代与传代培养

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

一、原代培养 概念：取自体内新鲜组织并臵于体外条 件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很好的讲解。

原代培养技术的重要意义: 原代培养的最大优点是细胞刚刚离体，生物性 状尚未发生很大变化，具有二倍体的遗传性， 而且大多数细胞表现出原来组织的特性。 利用原代培养做各种实验，如药物测试、细胞 分化及病毒学方面的试验效果很好。 原代培养也是建立各种细胞系(株)必须经过 的阶段。

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原代培养

消化法贴块法

冷消化 温消化

一次性消化 分次消化

消化法：这种培养过程主要是采用无菌 操作的方法，把组织(或器官)从动物 体内取出，经酶消化处理，使分散成单 个细胞，然后在人工条件下培养，使其 不断地生长和繁殖。

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原 代 培 养 方 法 分 类

贴块法

消化法

关于细胞培养中常涉及的概念,及培养过程中涉及的问题给予了很

　　我们知道，我们的身体是一个由细胞构成的王国，极其精密复杂，同时又高度有序。任何伟大的王国都既需要能干建设者，也需要勇猛防卫兵，我们身体细胞王国也不例外。

　　两者功能有什么不同

　　当我们的人体还在成长时，干细胞是细胞王国的建设者，通过分化源源不断提供新生细胞，增加我们身体细胞的数量;当我们成年后身体不再成长，干细胞又会扮演细胞王国的维护者，及时替换和更新衰老或受损的细胞。

　　干细胞是建设者

　　当有外敌入侵，如细菌和病毒，免疫细胞就会扮演细胞王国的军队，快速反应，将其清除。如果细胞王国中出现叛变分子，如正常细胞突变为癌细胞，免疫细胞就会扮演安保系统，将其识别并清除。

　　免疫细胞是防卫者

　　当外敌入侵过多，或王国内叛变分子太多，免疫细胞没有能力全部清除时，我们的身体就会生病。

　　两者如何分类

　　现在，让我们来进一步分别了解干细胞和免疫细胞，他们都分哪些种类，不同种类功能有何差异：

　　(1)按照分化潜能分类，干细胞分为：全能干细胞、多能干细胞和专能干细胞。

　　如果把人体比喻为一棵树，深埋大地的种子就是全能干细胞，就如同种子可以发育成长为一颗参天大树。

　　大树的主要枝干可以比喻为多能干细胞，如脐带/胎盘间充质干细胞，可以向

人结肠癌ＨＣＴ１１６细胞传代培养的简易方法－

２＊

王　倩１，徐云丹１，赵　刚１，

（湖北中医药大学基础医学院，湖北武汉４１．３００６５；

）湖北中医药大学中药资源与复方教育部重点实验室，湖北武汉４２．３００６５

摘　要：目的：针对人结肠癌ＨＣ建立一种简Ｔ１１６细胞在体外培养时常出现部分细胞聚团生长的特性，－

——水平震荡法。方法：采用简单高效的水平震荡方法替代胰酶消化法对易的细胞传代培养方法—

利用水平震荡方法传代后的细胞在新瓶中可以正常贴壁。２ＨＣＴ１１６细胞进行传代培养。结果：４ｈ和－

该方法无４８ｈ观察到胰酶消化法传代的细胞生长情况与水平震荡法传代的细胞未见明显差异。结论：

需使用胰蛋白酶，避免了胰酶对细胞的损伤作用，而且操作简便，降低了实验成本和污染的风险。水平震荡传代法可以替代胰酶消化法作为ＨＣＴ１１６细胞的简易传代方法。－关键词：传代培养；水平震荡法ＨＣＴ１１６细胞；－

（）中图分类号：Ｒ３２９．２＋８　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３２１９７２０１３０２００３５０２－－－

ＡＳｉｍｌｅＭｅｔｈｏｄｏｆＨｕｍａｎＣｏｌｏｎＣａｒｃｉｎｏｍａＨＣＴ１１６ＣｅｌｌｓＳｕｂｃｕｌｔｕｒｅ　　　　　　　－　ｐ

１１１２

，，ＷａｎＱｉａｎＸｕＹｕｎｄａ

没目标数值怎么计算？

若以有功负载1KW，功率因数从0.7提高到0.95时，无功补偿电容量： 功率因数从0.7提高到0.95时： 总功率为1KW，视在功率： S＝P/cosφ＝1/0.7≈1.4(KVA) cosφ1＝0.7

sinφ1＝0.71(查函数表得) cosφ2＝0.95

sinφ2＝0.32(查函数表得) tanφ＝0.35(查函数表得)

Qc＝S(sinφ1－cosφ1×tanφ)＝1.4×(0.71－0.7×0.35)≈0.65(千乏)

电网输出的功率包括两部分;一是有功功率;二是无功功率.直接消耗电能,把电能转变为机械能,热能,化学能或声能,利用这些能作功,这部分功率称为有功功率;不消耗电能;只是把电能转换为另一种形式的能,这种能作为电气设备能够作功的必备条件,并且,这种能是在电网中与电能进行周期性转换,这部分功率称为无功功率,如电磁元件建立磁场占用的电能,电容器建立电场所占的电能.电流在电感元件中作功时,电流超前于电压90℃.而电流在电容元件中作功时,电流滞后电压90℃.在同一电路中,电感电流与电容电流方向相反,互差180℃.如果在电磁元件电路中有比例地安装电容元件,使两者的电流相互抵消,使电流的矢量与电压矢量之间的

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陕西汉王药业有限公司GMP管理文件

1 目 的：建立菌种的传代、贮存、接种操作规程。

2 适用范围：适用于检定菌的传代、贮存、接种。

3 责 任 者：微生物检验员、化验室主任。

4 内 容：

4.1来源：检定菌种由药检部门提供已接种好的菌种斜面。

4.2 贮存：

4.2.1 将购来的试管斜面菌种放入冰箱中冷藏（4-6℃）保存。

4.2.2 将传代并经过培养后的菌种放入冰箱中保存。

4.2.3每支保存菌种需标明菌名、统一编号、接种日期。

4.3 传代和接种：

4.3.1 试验用菌种一般每两月传代一次，在阳性菌检室内进行传代和接种。

4.3.2 先点燃酒精灯，在火焰旁的上部空间操作，烧灼接种环。

4.3.3 再将原有的菌种斜面培养基(简称菌种管)与待种的新鲜斜面培养基(简称接种管)，持在左手拇指、食指及中指之间，要注意能清楚地观察到斜面，菌种管在前，接种管在后。应斜持试管呈450角，使试管内斜面向上，两试管口平齐，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。

4.3.4 首先，以右手在火焰旁转动两管的棉塞，以便接种时易于拔取。再以右手持接种环的柄端，垂直或稍斜地把接种环在火焰上烧灼。顶端的环必须烧红，以彻底灭菌。环以上凡接种时可进入试管的部分，也应通

血小板低白细胞低怎么回事

血小板和白细胞都出现低的情况，这时候会导致患者的免疫力下降，很容易诱发感染的情况，另外出现血小板低，还容易引起出血的现象，比较严重的就是脑出血，通过血常规能够得到相应的检查化验结果，他们一旦出现减少，就意味着有一些比较严重的疾病出现，这时候要及时进行治疗，同时可以吃一些具有补血功效的产品，当然要及时进行抗炎治疗，促进血小板和白细胞的上升。

白细胞在机体内起着消灭病原体，保卫健康的作用，它的正常值是（4-10）×109/L。白细胞的减少，常表现为流感、麻疹等病毒性传染病及药物或放射线所致及某些血液病等。

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★1、中性白细胞

正常为0.5-0.7，增高或减少的原因与白细胞计数相同。

★2、淋巴细胞

正常为0.2-0.4，减少时表明中性白细胞增多。

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★3、嗜酸性粒细胞

正常为0.005-0.05，这种细胞增多意味着可能患寄生虫病、过敏性疾病及某些皮肤病；

★4、嗜碱性粒细胞

正常为0-0.0075，这一数据对人的的影响不大。

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★5、单核细胞

正常为0.01-0.08，增多时见于急性传染病恢复期。

血小板的正常值范围为（100-300）×109/L。血小板的主要功能是参与机体的止血与凝血。血小板数量过高血液会处于高凝状态，容易发