电泳实验总结

1.电泳是指带电粒子在电场的作用下发生定向迁移（与其本身所带电荷相反的电极移动）的现象。利用电泳现象将多组分物质分离、分析的技术叫做电泳技术。

2.生物大分子在电场中移动的速度由什么决定？

答：样品性质方面：粒子大小，形状，带电荷多少，带电性质；电泳条件方面：介质阻力，电场强度，溶液黏度。 3.

粒子的移动速度(泳动速度V)与电场强度(E)、粒子所带电荷量(Q)成正比，而与粒子半径(r)及溶液粘度(η)成反比。非球形分子（如线状DNA）在电泳过程中受到更大的阻力，即粒子的泳动速度与粒子形状有关。

4.迁移率与下列（ D )因素无关？

A.电荷数量 B.粒子大小 C.溶液黏度 D.电场强度 电泳迁移率（/泳动度/淌度）μ μ = V/E = Q/6πrη

【影响迁移率的因素：

1. 待分离大分子的性质 ：所带的电荷、分子大小和形状，分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快；

2. 缓冲液pH和离子强度：pH值距pI愈远，Q越大，V越大 ；pH过高或过低?蛋白变性?缓冲液；缓冲液通常要保持一定的离子强度；离子强度过低或过高的不利影响；

3. 电场强度：E高，带电颗粒泳动快。过高，产生

1.电泳是指带电粒子在电场的作用下发生定向迁移（与其本身所带电荷相反的电极移动）的现象。利用电泳现象将多组分物质分离、分析的技术叫做电泳技术。

2.生物大分子在电场中移动的速度由什么决定？

答：样品性质方面：粒子大小，形状，带电荷多少，带电性质；电泳条件方面：介质阻力，电场强度，溶液黏度。 3.

粒子的移动速度(泳动速度V)与电场强度(E)、粒子所带电荷量(Q)成正比，而与粒子半径(r)及溶液粘度(η)成反比。非球形分子（如线状DNA）在电泳过程中受到更大的阻力，即粒子的泳动速度与粒子形状有关。

4.迁移率与下列（ D )因素无关？

A.电荷数量 B.粒子大小 C.溶液黏度 D.电场强度 电泳迁移率（/泳动度/淌度）μ μ = V/E = Q/6πrη

【影响迁移率的因素：

1. 待分离大分子的性质 ：所带的电荷、分子大小和形状，分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快；

2. 缓冲液pH和离子强度：pH值距pI愈远，Q越大，V越大 ；pH过高或过低?蛋白变性?缓冲液；缓冲液通常要保持一定的离子强度；离子强度过低或过高的不利影响；

3. 电场强度：E高，带电颗粒泳动快。过高，产生

垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质

一、实验目的

学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。

二、实验原理

蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动；当溶液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电，在电场中将向负极移动；蛋白质在特定电场中移动的速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强度等。

聚丙烯酰胺凝胶是由一定量的丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合而成的三维网状孔结构。本实验采用不连续凝胶系统，调整双丙烯酰胺用量的多少，可制成不同孔径的两层凝胶；这样，当含有不同分子量的蛋白质溶液通过这两层凝胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率。由于上层胶的孔径较大，不同大小的蛋白质分子在通过大孔胶时，受到的阻滞基本相同，因此以相同的速率移动；当进入小孔胶时，分子量大的蛋白质移动速度减慢，因而在两层凝胶的界面处，样品被压缩成很窄的区带。这就是常说的浓缩效应和分子筛效应。同时，在制备上层胶(浓缩胶)和下层胶(分离胶)时，采用两种缓冲体系；上层胶pH=6.7—6.8，下层胶

垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质

一、实验目的

学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。

二、实验原理

蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动；当溶液的pH小于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电，在电场中将向负极移动；蛋白质在特定电场中移动的速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强度等。

聚丙烯酰胺凝胶是由一定量的丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合而成的三维网状孔结构。本实验采用不连续凝胶系统，调整双丙烯酰胺用量的多少，可制成不同孔径的两层凝胶；这样，当含有不同分子量的蛋白质溶液通过这两层凝胶时，受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率。由于上层胶的孔径较大，不同大小的蛋白质分子在通过大孔胶时，受到的阻滞基本相同，因此以相同的速率移动；当进入小孔胶时，分子量大的蛋白质移动速度减慢，因而在两层凝胶的界面处，样品被压缩成很窄的区带。这就是常说的浓缩效应和分子筛效应。同时，在制备上层胶(浓缩胶)和下层胶(分离胶)时，采用两种缓冲体系；上层胶pH=6.7—6.8，下层胶

重庆大学研究生专业实验教学

实验报告书

实验课程名称： 实验指导教师： 学 院： 专业及类别： 学 号： 姓 名： 实验日期： 成 绩：

凝胶电泳实验

生物学

重庆大学研究生院制

一、实验目的

1.理解凝胶电泳的分类及琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳实验的基本原理。 2.熟练琼脂糖凝胶电泳实验的基本操作。

3.通过实验了解凝胶电泳实验的注意事项并在以后的实验中尽量避免。

4.利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度、浓度和分子量以及分离大小不同的DNA片段。

5.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳测定DNA和蛋白分子量大小的方法。 二、实验材料、用具及试剂

1.材料：菌落PCR产物（待检测DNA片段）；

2.用具：①琼脂糖凝胶电泳：电泳仪，水平板型电泳槽，电子天平，微量移液器

（10μl），枪头，三角瓶，点样板，梳子，微波炉，凝胶成像仪；

②聚丙烯酰胺凝胶电泳：垂直板电泳槽，稳压稳流电泳仪，梳子；

3.试剂：琼脂糖，1×TAE缓冲液，载样缓冲液（Loading buffer），goldviwe染料，

DL5,000 DNA Marker (Takara)。

三、实验原理

核酸凝胶电泳是分子克隆核心技术之一，用于分离、鉴

重庆大学研究生专业实验教学

实验报告书

实验课程名称： 实验指导教师： 学 院： 专业及类别： 学 号： 姓 名： 实验日期： 成 绩：

凝胶电泳实验

生物学

重庆大学研究生院制

一、实验目的

1.理解凝胶电泳的分类及琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳实验的基本原理。 2.熟练琼脂糖凝胶电泳实验的基本操作。

3.通过实验了解凝胶电泳实验的注意事项并在以后的实验中尽量避免。

4.利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度、浓度和分子量以及分离大小不同的DNA片段。

5.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳测定DNA和蛋白分子量大小的方法。 二、实验材料、用具及试剂

1.材料：菌落PCR产物（待检测DNA片段）；

2.用具：①琼脂糖凝胶电泳：电泳仪，水平板型电泳槽，电子天平，微量移液器

（10μl），枪头，三角瓶，点样板，梳子，微波炉，凝胶成像仪；

②聚丙烯酰胺凝胶电泳：垂直板电泳槽，稳压稳流电泳仪，梳子；

3.试剂：琼脂糖，1×TAE缓冲液，载样缓冲液（Loading buffer），goldviwe染料，

DL5,000 DNA Marker (Takara)。

三、实验原理

核酸凝胶电泳是分子克隆核心技术之一，用于分离、鉴

重庆大学研究生专业实验教学

实验报告书

实验课程名称： 实验指导教师： 学 院： 专业及类别： 学 号： 姓 名： 实验日期： 成 绩：

凝胶电泳实验

生物学

重庆大学研究生院制

一、实验目的

1.理解凝胶电泳的分类及琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳实验的基本原理。 2.熟练琼脂糖凝胶电泳实验的基本操作。

3.通过实验了解凝胶电泳实验的注意事项并在以后的实验中尽量避免。

4.利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度、浓度和分子量以及分离大小不同的DNA片段。

5.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳测定DNA和蛋白分子量大小的方法。 二、实验材料、用具及试剂

1.材料：菌落PCR产物（待检测DNA片段）；

2.用具：①琼脂糖凝胶电泳：电泳仪，水平板型电泳槽，电子天平，微量移液器

（10μl），枪头，三角瓶，点样板，梳子，微波炉，凝胶成像仪；

②聚丙烯酰胺凝胶电泳：垂直板电泳槽，稳压稳流电泳仪，梳子；

3.试剂：琼脂糖，1×TAE缓冲液，载样缓冲液（Loading buffer），goldviwe染料，

DL5,000 DNA Marker (Takara)。

三、实验原理

核酸凝胶电泳是分子克隆核心技术之一，用于分离、鉴

重庆大学研究生专业实验教学

实验报告书

实验课程名称： 实验指导教师： 学 院： 专业及类别： 学 号： 姓 名： 实验日期： 成 绩：

凝胶电泳实验

生物学

重庆大学研究生院制

一、实验目的

1.理解凝胶电泳的分类及琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳实验的基本原理。 2.熟练琼脂糖凝胶电泳实验的基本操作。

3.通过实验了解凝胶电泳实验的注意事项并在以后的实验中尽量避免。

4.利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度、浓度和分子量以及分离大小不同的DNA片段。

5.了解聚丙烯酰胺凝胶电泳测定DNA和蛋白分子量大小的方法。 二、实验材料、用具及试剂

1.材料：菌落PCR产物（待检测DNA片段）；

2.用具：①琼脂糖凝胶电泳：电泳仪，水平板型电泳槽，电子天平，微量移液器

（10μl），枪头，三角瓶，点样板，梳子，微波炉，凝胶成像仪；

②聚丙烯酰胺凝胶电泳：垂直板电泳槽，稳压稳流电泳仪，梳子；

3.试剂：琼脂糖，1×TAE缓冲液，载样缓冲液（Loading buffer），goldviwe染料，

DL5,000 DNA Marker (Takara)。

三、实验原理

核酸凝胶电泳是分子克隆核心技术之一，用于分离、鉴

高效毛细管电泳实验

一、实验目的

1. 进一步理解毛细管电泳的基本原理； 2. 熟悉毛细管电泳仪器的构成；

3. 了解影响毛细管电泳分离的主要操作参数。 二、实验原理 1．电泳淌度

毛细管电泳（CE）是以电渗流 (EOF)为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的一种液相微分离技术。离子在自由溶液中的迁移速率可以表示为： ? = ?E

（1）

??q 6??r

（2）

式中?是离子迁移速率，?为电泳淌度，E为电场强度。?为介质粘度，r为离子的流体动力学半径，q为荷电量。因此，离子的电泳淌度与其荷电量呈正比，与其半径及介质粘度呈反比。

2．电渗流和电渗淌度

电渗流（EOF）指毛细管内壁表面电荷所引起的管内液体的整体流动，来源于外加电场对管壁溶液双电层的作用。

在水溶液中多数固体表面根据材料性质的不同带有过剩的负电荷或正电荷。就石英毛细管而言，表面的硅羟基在pH大于3以后就发生明显的解离，使表面带有负电荷。为了达到电荷平衡，溶液中的正离子就会聚集在表面附近，从而形成所谓双电层，如图1所示。这样，双电层与管壁之间就会产生一个电位差，叫做Zeta电势。但毛细管两端施加一个电压时，组成扩散层的阳离子被吸引而

1 分子实验报告 2013030020华天瑞

Preparation of Plasmid DNA, Restriction Enzyme Digestion, and

Agarose Gel Electrophoresis

2014/10/14-21

1 Intro

1.1 Objective

To learn

? The characteristics of plasmid DNA

? The method of plasmid DNA mini-preparation by alkaline lysis and the measurement of

DNA concentration by spectrophotometer ? The characteristics of restriction endonuclease

? How to use agarose gel electrophoresis to separate DNAs To understand: The principles of pu