细胞克隆形成实验怎么计数

细胞克隆形成实验

当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞，大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测。

细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大：

一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。

实验方法：

平板集落形成实验、软琼脂集落形成实验

(a) 平板集落形成实验：本法适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞

(b) 软琼脂集落形成实验：本法适用于非锚着依赖性生长的细胞，如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系。

平板克隆形成实验基本步骤：

1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。

2、将细胞悬液作梯度倍数稀

细胞克隆形成实验

当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞，大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测。

细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大：

一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。

实验方法：

平板集落形成实验、软琼脂集落形成实验

(a) 平板集落形成实验：本法适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞

(b) 软琼脂集落形成实验：本法适用于非锚着依赖性生长的细胞，如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系。

平板克隆形成实验基本步骤：

1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。

2、将细胞悬液作梯度倍数稀

篇一：微信好友克隆

你好！

微信不能克隆别人的好友，有以下方法添加微信好友。

方法一：二维码扫描

1、在微信手机的最下面“找朋友”工具栏，可以弹出八个功能，分别是二维码扫描、按号码查找、查看QQ好友、查看手机通讯录、查看附近的人、摇一摇、漂流瓶。最后一个功能是“秀”出我的二维码，这个功能暂不做考虑，首先点击第 一个功能二维码扫描。

2、在空间或微博上看到某一网友的二维码名片后，将摄像头对准二维码图片约2~3秒、即可识别并加载对方微信的基本资料，您可以向对方打招呼或加为好友

方法二：按号码查找

点击“找朋友”——按号码查找里面。通过输入对方的微信号、QQ号或者手机号均可以添加对方。

方法三：查看QQ好友QQ号注册或绑定了QQ号的微信帐号，可查看QQ上有哪些好友开通了微信，并直接添加对方为微信好友； 方法四：查看手机通讯录 绑定手机号的微信帐号，可查看手机通讯录上有哪些好友开通了微信，并直接添加对方为微信好友；

方法五：查看附近的人通过GPS定位查找并添加好友； 方法六：使用摇一摇，查看与您同时在使用该功能的网友，并可请求添加对方好友；

方法七、漂流瓶通过收/发漂流瓶信息进行交友。

篇二：微信好友克隆

你好！

微信不能克隆别人的好友，有以下方法添加微信好友。

方法一、二维码

1 原理

网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后呈浅蓝色或深蓝色的网状结构。

百分计数

2 试剂

2.1 10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液：

煌焦油蓝1g、枸橼酸钠0.4g、氯化钠0.85g溶于双蒸馏水100ml中，过滤后备用

2.2 10g/L煌焦油蓝ACD溶液：

取ACD保养液（血库用）20ml，取1mol/L NaOH调至pH7.5左右，加入研细的煌焦

油蓝200m

溶解后过滤备用。

3 方法

3.1 于小试管中滴加1滴煌焦油蓝生理盐水溶液或煌焦油蓝ACD溶液。

3.2 加入末梢血2滴于上述试管中，混匀。

3.3 静置15—20 min后，取用1滴制成薄片。

3.4 油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数，以百分率或绝对值报告。

4 附注

4.1 活体染色时间不能过短，室温低时，放37℃温箱。

4.2 最好制片2张，每张计数500个红细胞，避免分布不均引起误差。涂片要薄而均匀，不使红细胞重叠。

4.3为了计数方便，可于目镜中放一有孔之硬纸片，缩小视野，便于计数。

4.4试剂应定期重配，以免变质沉淀。

4.5用瑞氏—姬姆萨染液复染后可使网织红细胞计数结果减少。

4.6因操作误差大，不宜用玻片直接染色法。

4.7网织红细胞

　　我们知道，我们的身体是一个由细胞构成的王国，极其精密复杂，同时又高度有序。任何伟大的王国都既需要能干建设者，也需要勇猛防卫兵，我们身体细胞王国也不例外。

　　两者功能有什么不同

　　当我们的人体还在成长时，干细胞是细胞王国的建设者，通过分化源源不断提供新生细胞，增加我们身体细胞的数量;当我们成年后身体不再成长，干细胞又会扮演细胞王国的维护者，及时替换和更新衰老或受损的细胞。

　　干细胞是建设者

　　当有外敌入侵，如细菌和病毒，免疫细胞就会扮演细胞王国的军队，快速反应，将其清除。如果细胞王国中出现叛变分子，如正常细胞突变为癌细胞，免疫细胞就会扮演安保系统，将其识别并清除。

　　免疫细胞是防卫者

　　当外敌入侵过多，或王国内叛变分子太多，免疫细胞没有能力全部清除时，我们的身体就会生病。

　　两者如何分类

　　现在，让我们来进一步分别了解干细胞和免疫细胞，他们都分哪些种类，不同种类功能有何差异：

　　(1)按照分化潜能分类，干细胞分为：全能干细胞、多能干细胞和专能干细胞。

　　如果把人体比喻为一棵树，深埋大地的种子就是全能干细胞，就如同种子可以发育成长为一颗参天大树。

　　大树的主要枝干可以比喻为多能干细胞，如脐带/胎盘间充质干细胞，可以向

常用分子克隆实验方法I

一、植物总DNA的小量提取

方法1：提取吸附法。无须巯基乙醇、氯仿等有毒物质，产物无须Rnase处理。

(1) 充分研磨。称取约0.2克植物组织，加入液氮充分研磨3-5min，稍后加约1ml溶液

A，继续研磨至略粘稠的组织匀浆，用大口1ml吸头将所有溶液移至1.5ml离心管中，55℃水浴30min；

(2) 高速离心去杂质。10,000rpm离心5min，取约600ul上清至新1.5ml离心管； (3) 核酸吸附。往上清液中加入1倍的异丙醇，轻轻混匀，再加入总体积1/4已混匀的

溶液B，静置3min;

(4) 低速离心沉淀。5000rpm离心1min，轻轻倒掉上清，并用吸水纸轻吸离心管口，

再用移液枪吸走大部分残余液体；

(5) 75%乙醇清洗。加入1ml75%乙醇，5000rpm离心30s，轻轻倒掉上清，用吸水纸稍

吸离心管口。重复该步骤一次，再5000rpm离心30s，然后用移液枪吸走管底的残液，晾干5min；

(6) 核酸洗脱。加入约55ul TE（PH8.0）至管底，轻轻重悬硅土，静置3min，10,000rpm

离心1min，用小枪头轻轻吸取出50ul管底溶液，冷藏。

方法2：CTAB法，此为在经典方法基础上，经过摸

整个基因克隆实验规程

完整

Document serial number【KK89K-LLS98YT-SS8CB-SSUT-SST108】

一、组织总RNA 的提取

相关试剂：T rizol；氯仿；苯酚；异丙醇；75%乙醇；RNase-free水

相关仪器：制冰机；液氮&研钵/生物样品研磨仪；高速离心机；移液器（1ml、200μl、

100μl/50μl）；涡旋振荡仪；恒温金属浴。

相关耗材：解剖工具，冰盒，离心管，离心管架，吸头（1ml，200μl/300μl），一次性手套，实验手套。

实验步骤

1.取暂养草鱼，冰上放置一段时间，然后解剖，剪取肠道50~100mg，放入研钵中，加入液氮迅

速研磨，然后加入1ml 预冷TRIzol试剂，充分研磨至无颗粒物存在。

2.转移到离心管中，室温放置5min，使细胞充分裂解；

3.按1ml Trizol加入200μl氯仿，盖上盖子，迅速充分摇匀15s，然后室温放置3min；

4.4℃，,12000g 离心15min；

此时混合物分为三层，下层红色的苯酚氯仿层，中间层和上层无色水相；RNA存在于无色水相中；

5.小心吸取上清液，千万不要吸取中间界面，否则有DNA污染；转移至一个新的离心管，加入等

体积的异丙醇，轻轻混匀；

6.室温放置10

血细胞计数仪及其临床应用

四川大学华西第二医院 杨慧

利用血细胞计数仪进行血常规检查是目前临床应用最为广泛的检查项目，正确合理地使用和解释检验项目及结果是临床诊断的前提和必要条件。 缺铁性贫血的早期，MCV和Hb在正常范围，RDW可能怎样变化？

多参数血细胞计数仪的使用为临床提供了大量普通手段难以测量的参数，使血细胞形态学观察不再局限于显微镜下少数细胞的微观结构，对血细胞的体积分布情况，离散程度，特别是异常体积血细胞的数量、分布区域有了更进一步的了解，使形态学和病因之间的联系更加紧密，更能反映病因学。利用血细胞计数仪对血细胞进行分析，其优越性不光表现在血液病的筛查与早期诊断上，对疾病治疗过程中的动态观察也是其它检查所不能及。现就常见的血细胞参数变化及血细胞直方图等问题作初步探讨。

一、血细胞计数仪的优点

最新出现的血细胞计数仪采用了电子、光学、化学等技术，可以更全面、更准确、更快速对单个或多个样本血液中的白细胞、红细胞及血小板等进行分析，精确度高，成本低廉，在第一时间为临床医生提供了准确、丰富的实验检查资料。数据储存方便、利于提取和分析，已成为临床医学实践中最为重要的诊断方法之一。

血细胞计数仪及其临床应用

四川大学华西第二医院 杨慧

利用血细胞计数仪进行血常规检查是目前临床应用最为广泛的检查项目，正确合理地使用和解释检验项目及结果是临床诊断的前提和必要条件。 缺铁性贫血的早期，MCV和Hb在正常范围，RDW可能怎样变化？

多参数血细胞计数仪的使用为临床提供了大量普通手段难以测量的参数，使血细胞形态学观察不再局限于显微镜下少数细胞的微观结构，对血细胞的体积分布情况，离散程度，特别是异常体积血细胞的数量、分布区域有了更进一步的了解，使形态学和病因之间的联系更加紧密，更能反映病因学。利用血细胞计数仪对血细胞进行分析，其优越性不光表现在血液病的筛查与早期诊断上，对疾病治疗过程中的动态观察也是其它检查所不能及。现就常见的血细胞参数变化及血细胞直方图等问题作初步探讨。

一、血细胞计数仪的优点

最新出现的血细胞计数仪采用了电子、光学、化学等技术，可以更全面、更准确、更快速对单个或多个样本血液中的白细胞、红细胞及血小板等进行分析，精确度高，成本低廉，在第一时间为临床医生提供了准确、丰富的实验检查资料。数据储存方便、利于提取和分析，已成为临床医学实践中最为重要的诊断方法之一。

学习目标：1.列表比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的异同2.理解和掌握动物细胞融合的原理、过程和意义自主学习：1.动物细胞融合常探究交流知识点一.动物细胞融合课堂反馈1.下图表示

选修三学案 胶州四中高二生物

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体

学习目标：

1.列表比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的异同

2.理解和掌握动物细胞融合的原理、过程和意义

3.理解和掌握单克隆抗体制备的过程的步骤和应用

学习重难点：1.动物细胞融合的原理、过程和意义。2.单克隆抗体制备的过程的步骤和应用

知识回顾：1、植物体细胞杂交过程应用了那些技术?

2、植物与动物细胞结构有何区别？

自主学习：

1．动物细胞融合常用的诱导因素有、点是 。

2．制备单克隆抗体的技术流程是：用羊的红细胞对小鼠进行注射，使小鼠产生反应。然后，把

相应的 细胞和 细胞融合，再用 进行筛选，在该培养基上， 未融合的

亲本 细胞和