微生物问答题试比较分离纯化噬菌体与分离纯化

噬菌体的分离与纯化

实验用具及材料

1.菌种：大肠杆菌 2.试剂：氯仿 3.培养基：

1）液体牛肉膏培养基：胰蛋白胨2g，牛肉膏0.6 g，NaCl 1g，加H2O至200mL，pH7.4，121 ℃20min高压灭菌； 2）3×牛肉膏培养液：胰蛋白陈3g，牛肉膏 0.9g，NaCl 1.5g，加H2O至100mL，pH7.4，121 ℃20min高压灭菌； 3）固体牛肉膏培养基：每100mL液体牛肉膏培养基加入1.5g琼脂粉，121 ℃20min高压灭菌；

4）半固体牛肉膏培养基：每100mL液体牛肉膏培养基加入0.7g琼脂粉，121℃20min高压灭菌

4.仪器及其他用品：灭菌试管、灭菌吸管、玻璃涂布器、无菌

细菌过滤器（孔径0.22um），培养皿，蓝盖试剂瓶，恒温水浴锅，离心机等 实验步骤

1.噬菌体的分离

（1）制备菌悬液：用接种环在斜面上挑取少许大肠杆菌菌苔

1）

接入盛有5mL牛肉膏蛋白胨培养液的试管中，混合均匀后置37℃培养过夜。/取大肠杆菌斜面一支，加4ml 无菌水洗下菌苔，制成菌悬液。

（2）增殖培养：在盛有10mL 3倍牛肉膏蛋白胨液体培养基

大的试剂瓶中加入噬菌体原液20mL和大肠杆菌悬液0.3m

噬菌体的分离与纯化

（小组成员：宋淑芳、项媛媛、谢坤、陈金杰、陶思凡）

一、实验目的

学习分离纯化噬菌体的基本原理和方法，观察噬菌斑 二、实验原理

噬菌体感染宿主细胞后，其DNA（或RNA）在细胞体内进行复制、转录，相关基因表达，装配成完整的噬菌体颗粒，最后裂解宿主细胞或通过挤出方式从宿主细胞（宿主细胞不被杀死，如M1噬菌体）中释放出来。因此，①在液体培养基中可使浑浊的菌悬液变为清亮或较清亮。利用噬菌体的这种特性，在样品中加入敏感菌株与液体培养基混合后培养，噬菌体便能大量增殖，释放，从而可分离到特定的噬菌体。②在有宿主细菌生长的软琼脂平板上，噬菌体可裂解细菌或限制被染细菌的生长，形成透明的或浑浊的空斑，亦称噬菌斑。一个噬菌体产生一个噬菌斑，利用这种现象可将分离获得的噬菌体进行纯化。 三、实验用具及材料

1.菌种：大肠杆菌 2.试剂：氯仿 3.培养基：

液体牛肉膏培养基：胰蛋白胨2g，牛肉膏0.6 g，NaCl 1g，加H2O至200mL，pH7.4，121 ℃20min高压灭菌；

3×牛肉膏培养液：胰蛋白陈3g，牛肉膏 0.9g，NaCl 1.5g，加H2O至100mL，pH7.4，121 ℃20min高压灭菌；

固体牛肉膏培养基：每100m

广东工业大学土壤中微生物的分离与纯化实验报告

微生物学实验报告

实验名称：土壤中微生物的分离与纯化

课程名称 环境微生物学实验

学 院 环境科学与工程学院

专业班级 2011级环境科学（1）班

学 号 3111007364

姓 名 刘迪鸿

联系方式 13824426973

2013年 12 月 10 日

广东工业大学土壤中微生物的分离与纯化实验报告

实验报告 土壤中微生物的分离与纯化

刘迪鸿

（广东工业大学11级环科（1）班）

摘要：各种微生物生长所需条件存在差异，根据需要配制不同的培养基可以得到只含目标菌株的纯培养。

关键词：选择培养基，分离，纯化

一、 实验目的与要求

1. 明确培养基的配制原理，并通过对微生物培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。

2. 掌握根据需要选取不同的环境以找到目标菌株的基本方法，学习分离纯化微生物的基本操作技术，进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术，掌握微生物培养方法以及接种方法。

二、实验方案

1. 实验原理

培养基是人工的将多种物质按各种微生物生长的需要配制而成的一种混合营养基质，用以培养或分离各种微生物，因此，培养基质应当有微生物所能利用的营养成分（包括碳源，氮源，能源，无机盐

微生物分离纯化技术及其应用

摘要：微生物的分离纯化技术是进行微生物学研究的基础。本文介绍了微生物学中常用的传统分离纯化技术并且分析了其所存在的问题，综述了近年来涌现微生物分离纯化的新技术、新方法，并对其今后的发展趋势作了展望。 关键词：微生物；分离；纯化

Abstract: The microbial separation and purification technology is the basis of microbiological studies. The traditional separation and purification technology in microbiology and its problems of existence was described in this paper. The new methods and new technologies of microbial separation and purification emerged in recent years were summarized .Then its development trends in the future was pr

土壤微生物分离纯化及测数

作者：土壤微生物|分离纯化及测数 来源：生物秀 时间：2008-5-28

一、实验目的要求

1 了解土壤微生物的分离纯化及测数的基本原理。 2 学习并掌握微生物分离纯化技术方法。 3 学习并掌握微生物平板菌落计数的技术方法。 二、基本原理

土壤是微生物生活的大本营，其中含有大量不同类型的微生物，可按照一定的方法将各类微生物通过分离进行纯培养，并能对特定类群进行数量测定。基本原理是通过稀释使菌体细胞充分分散，单细胞得以生长发育形成菌落，可使用稀释法或平板划线法进一步纯化，还可通过平板菌落计数，推算单位重量土壤样品含有微生物的数量。 三、实验步骤 （一）土壤样品采集

在待测田块上，若田块面积小于50平方米则按对角线三点采样，若田块面积大于50平方米按对角线五点采样。采样一般定点于耕作层0--20cm，先除去表土1--2cm，以无菌铲采土足量充分混匀后用无菌塑料袋分装。 （二）好气性细菌的分离纯化及测数 1.制备土样稀释液 吹吸三次混匀 无菌操作

另留一管不稀释留作对照（CK）

2.培养基的准备

融化牛肉膏蛋白胨培养基，融化后保温在48℃。并取6个无菌培养皿，分别在皿底贴好标签，注明10-5、10-6、CK（每个稀释

生物分离与纯化技术授

课教案

Document serial number【NL89WT-NY98YT-NC8CB-NNUUT-NUT108】

《生物分离与纯化技术》授课教案

第一章绪论

教学目的：

熟悉生物物质的概念、种类和来源；

了解分离纯化技术及其基本原理；

熟悉分离纯化工艺的优化、放大和验证工作；

掌握分离纯化的特点与一般步骤；

了解生物分离纯化技术的发展历史；

熟悉生物分离纯化技术的发展趋势。

教学重点：

生物物质的概念、种类和来源；分离纯化工艺的优化、放大和验证工作；分离纯化的特点与一般步骤；生物分离纯化技术的发展趋势。

教学难点：

分离纯化技术及其基本原理；分离纯化工艺的优化、放大和验证工作。

教学课时：4学时

教学方法：多媒体教学

教学内容：

第一节生物分离与纯化的概念与原理

一、生物物质的概念、种类和来源

1.生物物质：氨基酸及其衍生物类、活性多肽类、蛋白质、酶类、核酸及其降解物、糖、脂类、动物器官或组织制剂、小动物制剂、菌体制剂。

2.生物物质来源：动物器官与组织、植物器官与组织、微生物及其代谢产物、细胞培养产物、血液、分泌物及其代谢物

二、生物分离纯化概念

指从发酵液、动植物细胞培养液、酶反应液或动植物组织细胞与体液等中分离、纯化生物产品的过程。

三、生物分离纯化技术

生物分离与纯化复习题 第一章

1、生物分离纯化技术的概念？

以生物物质原料为基础，对目标产物进行提取、纯化、加工制备的生产技术。 2、生物物质与生物产品的区别？

生物物质：生物物质是指存在于生物体内的所有生物活性物质的总称。生物物质的制成品统称为生物产品。

生物产品：在产业中的生物物质的制成品。 3、生物分离纯化技术的原理和特点？

基本原理：利用混合物中不同组分间物理、化学和生物学性质的差别来实现组分间的分离或纯化。

技术原理：选用能够识别这些差别的分离介质或扩大这些差别的分离设备来实现组分间的高效分离。

特点：⑴环境复杂、分离纯化困难含量低、工艺复杂

⑵ 稳定性差、操纵要求严格

⑶ 目标产物最终的质量要求很高

⑷ 终极产品纯度的均一性与化学分离上纯度的概念并不完全相同 ⑸ 终极产品纯度的均一性与化学分离上纯度的概念并不完全相同

4、发酵生物产品分离纯化的生产工艺？ ⑴原材料的预处理 ⑵颗粒性杂质的去除

⑶可溶性杂质的去除和目标产物的初步纯化 ⑷目标产物精制

⑸目标产物的成品加工 5、生物分离技术的应用？ 食品添加剂 药物

第二章

6、预处理的目的？

使目标产物最大限度的转移到溶液中。 7、改变发酵液过滤特性的基本方法？

⑴降

一、原核微生物

1、巴斯德关于自然发生说的实验对于微生物学的进步，对于微生物学的方法学的影响，对于生命起源的观点以及食物保存等都有着巨大作用。简要解释他的实验设计对以上所列主题的影响。

2、简述微生物发酵途径及有益产品 主要途径：EMP途径，产物：乳酸

HMP途径，产物：乳酸、乙醇、CO2 ED途径，产物：

3、为什么抗生素能抑制或杀死致病细菌而对人体细胞的毒性却很小？举例说明 答：抗生素的作用主要干扰病原微生物的代谢过程，从而起到抑菌或杀菌作用。

抗生素的作用原理大体可概括以下方式： （1）抑制细菌细胞壁的合成（如青霉素）； （2）影响细菌细胞膜的通透性（如多粘菌素）； （3）抑制菌体蛋白质的合成（如氯霉素、四环素）； （4）抑制细菌核酸合成（如灰黄霉素）。

细菌是原核生物，其细胞壁的结构和组成成分与人体的不同，格兰氏阳性菌细胞壁成分是肽聚糖和磷壁酸，格兰氏阴性菌细胞壁成分是类脂和蛋白，而人类则是磷脂，蛋白质（与菌类不同种类的）和多糖。抗生素是有针对性的。

所以不会杀死正常体细胞，而只会杀菌。

4、列表比较革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌细胞壁结构特征

项目 1、革兰氏染色反应 2、肽聚糖层 3、磷壁酸 4、外膜 5、脂多糖（LPS）

生物分离与纯化技术模拟试卷八

考试学科 考生班级 生物分离与纯化技术 组、命题教师 系主任 课题组

装 订 线

一、名词解释（每小题3分，共15分） 1．超临界流体： 2．临界胶团浓度： 3．生物分离技术： 4．凝胶过滤： 5．高效液相色谱：

二、单选题（每小题1分，共15分） 1．有机溶剂为什么能够沉淀蛋白质（ ）

A.介电常数大 B介电常数小 C.中和电荷 D.与蛋白质相互反应 2．若两性物质结合了较多阴离子，则等电点pH会（ ） A.升高 B降低 C.不变 D.以上均有可能 3．离子交换树脂适用（ ）进行溶胀 A.水 B乙醇 C.氢氧化钠 D.盐酸

4．下列关于离子交换层析洗脱说法错误的是（ ）

A. 对强酸性树脂一般选择氨水、甲醇及甲醇缓冲液等作洗脱剂 B弱酸性树脂用稀硫酸、盐酸等作洗脱剂

C. 强碱性树脂用盐酸-甲醇、醋酸等作洗脱剂 D. 若被交换的物质用酸、碱洗不

生物分离与纯化技术模拟试卷八

考试学科 考生班级 生物分离与纯化技术 组、命题教师 系主任 课题组

装 订 线

一、名词解释（每小题3分，共15分） 1．超临界流体： 2．临界胶团浓度： 3．生物分离技术： 4．凝胶过滤： 5．高效液相色谱：

二、单选题（每小题1分，共15分） 1．有机溶剂为什么能够沉淀蛋白质（ ）

A.介电常数大 B介电常数小 C.中和电荷 D.与蛋白质相互反应 2．若两性物质结合了较多阴离子，则等电点pH会（ ） A.升高 B降低 C.不变 D.以上均有可能 3．离子交换树脂适用（ ）进行溶胀 A.水 B乙醇 C.氢氧化钠 D.盐酸

4．下列关于离子交换层析洗脱说法错误的是（ ）

A. 对强酸性树脂一般选择氨水、甲醇及甲醇缓冲液等作洗脱剂 B弱酸性树脂用稀硫酸、盐酸等作洗脱剂

C. 强碱性树脂用盐酸-甲醇、醋酸等作洗脱剂 D. 若被交换的物质用酸、碱洗不