超氧化物歧化酶sod测定实验报告

超氧化物歧化酶SOD的分离纯化技术

证明SOD提取过程工艺不同浓度的硫酸铵对纯化SOD蛋白酶的效果

的综合影响

一、摘要：

通过对绿豆的研磨破碎获得SOD粗酶，经过(NH4)2SO4分级分离、透析除盐和浓缩等过程，除去粗酶中的杂质及干扰蛋白。

二、关键词：

SOD 连苯三酚自氧化法 SOD酶活性测量 透析除盐

三、前言：

超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase），简称SOD，是一种新型酶制剂，属金属酶.它是一种源于生命体的活性物质，SOD是机体内危害最大的氧自由基专一清除剂，亦是其他自由基最有效的清除剂，它与体内的谷胱甘肽过氧酶、过氧化氢酶联手，把自由基转化为水和氧分子。能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充 SOD具有抗衰老的特殊效果。本实验以绿豆为原料提取SOD，通过各步的分离提纯，应测得酶总活力逐渐减小，比活逐渐升高.通过本实验掌握物质分离纯化的实验设计过程，以及硫酸铵分离、透析除盐、浓缩和葡聚糖凝胶层析等物质分离技术。

四、实验技术路线：

我们的这次试验主要的路线是通过测定经过不同浓度的硫酸铵分离出来的不同的SOD蛋白的上清和沉淀，以此来确定硫酸铵沉淀SOD酶和其他杂蛋白的一个大致区间

植物组织中超氧化物歧化酶和平测定方法

【实验目的】

1. 了解还原法测定抗氧化酶活性测定的原理方法。 2. 熟悉植物叶片中ROS去除机制。 【实验原理】

超氧化物歧化酶（SOD）普遍存在于动植物与微生物体内。SOD是含金属辅基的酶。高等植物有两种类型的SOD：Mn-SOD和Cu/Zn-SOD。SOD能够清除超氧阴离子自由基 （O2—），它与CAT、POD等酶协同作用来防御活性氧或其他过氧化物自由基对细胞膜系统的伤害，从而减少自由基对机体的毒害。

超氧阴离子自由基（O2—）是生物细胞某些生理生化反应常见的中间产物。SOD能通过歧化反应清除生物细胞中的超氧阴离子自由基，生成H2O2和O2。生成的H2O2可被过氧化氢酶分解为O2和H2O：

2 O2—+ 2H+ H2O2+O2 2 H2O2 CAT O2+H2O

SOD

超氧自由基非常不稳定，寿命极短，一般用间接方法测定SOD活性。本实验依据SOD抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性的大小。有氧化物质存在时，核黄素可在光照条件下还原。被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2—。当加入NBT后，在光照条件下O2—又可将NBT还原为蓝色的甲腙，后者在5

SOD

超氧化物歧化酶（ 超氧化物歧化酶（SOD） ）

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全球瞩目的生物奇葩 现代生命科学的新宠

超氧化物歧化酶（SOD） 超氧化物歧化酶（SOD）

英文Superoxide Dismutase的缩写，其化学性 英文 的缩写， 的缩写 质为蛋白质（金属类）源自生命体的活性物质， 质为蛋白质（金属类）源自生命体的活性物质，是体 内对抗自由基的第一道防线。是由含109个和 个和119个 内对抗自由基的第一道防线。是由含 个和 个 氨基酸的两个肽链组成。 氨基酸的两个肽链组成。主要作用是清除氧自由基和 体内垃圾。当我们身体吸入氧气进行新陈代谢， 体内垃圾。当我们身体吸入氧气进行新陈代谢，就会 产生超氧阴离子自由基，若不予以消除， 产生超氧阴离子自由基，若不予以消除，会在体内产 生连锁反应，破坏我们的细胞， 生连锁反应，破坏我们的细胞，是人体老化及疾病的 元凶。 元凶。

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SOD-不老物质 震惊世界的发现！ 不老物质—震惊世界的发现 不老物质 震惊世界的发现！

30年代keilie（凯林） 和Mann（盖尔曼） 剑桥大学 1998年 罗伯、费瑞和洛伊格纳洛 诺贝尔生理医学奖 1969年Mc

大蒜细胞溶质中超氧化物歧化酶的分离纯化

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食品与发酵工业

F o n emett n Id sr s o da dF r nai n ut e o i

Vo.9 N . 12 o 2

大蒜细胞溶质中超氧化物歧化酶的分离纯化艘蠲

谢岩黎，

李元瑞

l西北农林科技大学食品科学与工程学院，凌， 1 1 0 (杨 720 ) 2河南职业技术师范学院食品科学与工程系，乡，5 0 3 (新 4 30 )

摘

要

采用热变性、乙二醇 ( E 60聚 P G)0 0沉淀作用和 D AE纤维素柱层析 3种方法对大 E一

蒜细胞溶质中的超氧化物歧化酶进行分离纯化。经过 3步分离纯化， 5 0大蒜中得到从 0g 1 . mg产品，活为 31 5 5 rg酶的类型是 C nS 56比 4 . a。 U/ u Z -OD,紫外区的最大吸收峰是 2 8在 5nm o

关键词

大蒜细胞溶质，超氧化物歧化酶，分离纯化

超氧化物歧化酶 (u eo ieds ts, sp rxd i muae S oD)一种具有清除体内超氧自由基 ( -是 02

1 3试验设备 .

uv一 1 0紫外一见分光光度计、速冷 10可高冻离心机 ( u o tRC 5 )恒温水浴锅、 D P n 一C、核酸蛋

.

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法

一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法）

1、试剂的配制

（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：

A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；

B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。

分别用蒸馏水定容到1000ml。

0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。加入10gPVP（聚乙烯吡咯烷酮）

参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。

（2）130mmol/L甲硫氨酸溶液：取1.399g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至100ml。网上说定容到100ML我也不懂。拜托

（3）100μmol/L EDTA-Na2溶液：取0.03721g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml；

（4）100μM核黄素溶液：取0.0075g核黄素用蒸馏水定容至100ml，避光保存，随用随配

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法

一、 超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法） 1、试剂的配制

（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：

A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g； B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。 分别用蒸馏水定容到1000ml。

0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。加入10gPVP（聚乙烯吡咯烷酮）

参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。

（2）130mmol/L甲硫氨酸溶液：取1.399g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至100ml。网上说定容到100ML我也不懂。拜托

（3）100μmol/L EDTA-Na2溶液：取0.03721g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml； （4）100μM核黄素溶液：取0.0075g核黄素用蒸馏水定容至100m

绪论

我国氮氧化物污染问题十分突出。氮氧化物排放总量居高不下，成为导致我国大气酸沉降、臭氧、灰霾等一系列环境问题的重要根源。如不加以控制，氮氧化物的增加可能会显著抵消二氧化硫减排带来的环境效益。因此，“十二五”期间我国迫切需要加强大气氮氧化物污染防治工作，并应将其放在与二氧化硫减排同等重要的位置。经过多年努力，我国大气氮氧化物污染防治政策法规逐渐完善、技术日益成熟、产业初具规模，但仍然面临一些发展瓶颈问题。做好氮氧化物的污染防治工作，急需制订科学的总体技术路线、修订完善相关标准和法律法规、促进控制技术和产业发展、加强有关基础研究，为氮氧化物污染防治提供有力支撑。

1、NOx的来源及危害

NOx的产生有两种途径：一是自然产生，二是人为产生。自然产生来源有闪电、大气中氨的氧化及土壤中微生物的硝化作用等，自然界形成的NOx由于自然选择达到生态平衡，故对大气没有很大的污染。人为产生的NOx主要有三个来源，第一是燃料燃烧过程中产生；第二是各种机动车排放的尾气；第三是工业生产过程中排放，化学工业中如硝酸、各种硝化过程(如电镀)等生产过程都排放出NOx。人为产生的NOx因分布较集中，与人类活动关系

碳酸锂、单水氢氧化锂中 氯化物量测定 氯化银浊度法

实验报告

新疆有色金属研究所 关玉珍 康泽彦 张向红

1 方法提要

在硝酸介质中，氯离子与银离子生成乳白色胶状沉淀或胶状悬浮物，在分光光度计波长420nm处，利用形成的浑浊度，求得氯化物的含量。 2 试剂

2.1 硝酸（1+1），优级纯。

2.2 硝酸（360 + 640），优级纯。

2.3 硝酸银溶液（0.1mol/L）：称取17.0g硝酸银（优级纯）于烧杯中，加水溶解，移入1000mL棕色容量瓶中，加入3滴硝酸（ρ1.46g/mL）使溶液透明，以水稀释至刻度，摇匀。避光贮存。

2.4氢氧化钠溶液（100g/L）：称取10g氢氧化钠于250mL塑料烧杯中，用100mL去二氧化碳水溶解，保存于塑料瓶中。

2.5 对硝基酚指示剂（1g/L）：乙醇溶液。

2.6氯化物标准贮存溶液：称取1.6484g预先在500℃灼烧至恒重的氯化钠（优级纯），置于100mL烧杯中，以水溶解，移入1000mL容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。此溶液1mL相当于1mg氯化物。

2.6.1氯化物标准溶液A：移取25.00mL氯化物标准贮存溶液（2.6），置于250mL容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。此溶液1mL

气相色谱-质谱联用测定苯系物实验报告

一、 实验目的

1．掌握气相色谱的基本原理。 2．掌握气相色谱仪组成结构及作用。

3．了解气相色谱-质谱联用法原理、特点和使用方法。

4．掌握气相色谱中质谱库定性的基本原理及外标定量方法和特点。 5．了解利用弱极性毛细管柱测定非/弱极性有机物的注意事项。 6．掌握吹扫捕集原理、使用特点、注意事项及其选择原则。

二、 基本原理：

2.1 气相色谱工作原理

气相色谱是利用试样中各组份在气相和固定液液相间的分配系数不同，当汽化后的样品被载气带入色谱柱中运行时，组份就在其中的两相间进行反复多次分配，由于固定相对各组份的吸附或溶解能力不同，因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，按顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流讯号经放大后，在记录器上描绘出各组份的色谱峰。 2.2 气相色谱仪的组成及作用

气相色谱的结构由以下几个系统组成：载气系统，进样系统，色谱柱，检测器，记录系统和温度控制系统。

(1) 载气系统：包括气源、气体净化、气体流速控制装置三部分，作用是提供稳定流量/压力的高纯载气。气源提供载气流动相，气体净化装置去除载气中的杂质和水汽，纯化载气，气体流速控制装置可控制载气的流量

1、碱金属氧化物的作用

当碱金属氧化物加入于熔融石英玻璃中，使玻璃结构疏松、减弱，导致一系列性能变坏。如热膨胀系数上升、电导和介电损耗，弹性模数、硬度、化学稳定性和粘度等下降。

主要表现于（当取代Na+或K+时）能提高玻璃的化学稳定性、表面张力和析晶能力。它具有高温助熔、加速玻璃熔化的作用。 2、二价金属氧化物的作用 玻璃的折射率、密度、热膨胀系数，随Ra2+离子半径增大而上升，硬度随半径增大而下降。此外，二价金属氧化物对碱金属氧化物有“压制效应”

常用的二价金属氧化物的作用分述如下： 一、氧化钙（CaO)

Ca2O有极化桥氧和碱弱硅氧键的作用，这可能是它降低玻璃高温粘度的原因之一。玻璃CaO含量过多，一般使玻璃的料性变短。脆性增大，在硼硅酸盐玻璃中CaO一般不加或少加，否则玻璃的析晶倾向增大，在钠钙硅玻璃中若以MGO取代CaO，将使玻璃结构疏松，导致玻璃的密度、硬度下降，钠钙硅玻璃中常以MGO取代部分CaO以降低玻璃析晶能力和调整玻璃的料性。含镁玻璃在水和碱液作用

下，玻璃表面易于形成硅酸镁薄膜。因此目前保温瓶和瓶罐玻璃都趋于少用或不用氧化镁