细菌分离培养与药敏实验

细菌分离培养方法及操作步骤

无菌取血液或脏器、淋巴结划线接种于鲜血琼脂平板或血清琼脂平面培养基、普通肉汤培养基，37℃恒温培养24 h，观察其生长特性。目前细菌分离培养的常用方法有平板划线分离法、加热分离法和实验动物分离法。

平板划线接种法

这是目前临床上最常用的分离接种方法。它可以从被检病料中通过划线可使细菌分离、分散生长而形成单个菌落（有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌），以便挑选可疑菌落作纯培养加以鉴定。具体操作：

1、右手持接种环，在酒精灯上火焰灭菌；

图1 病料采集 图2 接种环灭菌

2、待接种环冷却后，挑取被检料少许，左手持琼脂平板，以食

指为支点，用拇指和无名指将平皿揭开一空隙。大约20℃时，迅速地将接种环轻轻地涂布在培养基的边缘。

3、在涂布处来回移动作曲线形划线接种。（注意：划线时，以腕力使接种环在琼脂平板表面划动，尽量不要划破培养基，划的线条要密，但不能重复旧线，以免培养物形成菌苔。）

图3 平板划线接种法

4、划线完毕，合上平皿盖，将琼脂平板倒置，放入37℃温箱内培养18－24小时。

注意：分离培养用的平板培养基应表面干燥，可于临用前置37℃孵育箱内30分钟，这样表面即干

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我院小儿血液细菌培养及药敏分析

作者：王美烨

来源：《中国实用医药》2015年第01期

【摘要】 目的 了解本院小儿血液细菌培养的分布和生长状况以及对药物敏感的分析情况。方法 对本院血培养检出菌株进行定性分析。对阳性菌株进行鉴别检验和体外药物敏感试验。结果 小儿血液细菌培养的阳性率为37.17%。分离菌株中， G+菌占54.7%， 其中表皮葡萄球菌占43.8%， 位于第一位。易产生耐药的微球菌和肠球菌分别占17.3%、4.1%， 分别居于第三、五位。结论 小儿血液感染病原菌种类多， 耐药性差异大， 耐药率高。 【关键词】 血液细菌；耐药性；药敏分析

败血症是严重威胁少年儿童健康的三大疾病之一， 平均死亡率为28%～37%， 尤其是耐药菌株种类和数量的增加， 使得感染患儿的有效治疗变得十分困难[1， 2]。败血症的临床表现没有特异性， 目前临床上仍以血液培养阳性为诊断标准[3， 4]。为了解败血病小儿血病原菌培养分布和对抗生素的耐药情况， 文章对本院426例血液培养阳性患儿的病原菌分布及药敏情况进行研究， 以便在临床上选择最佳的治疗方案。

医药知识共享

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薹兰焦鱼……………………………

2 0 1 第3第2 o年2 1月 2卷 1期

医影与验学像检 i量 量量蚕蠢

1 4例肛周脓肿细菌培养、敏及临床分析 7药沈丽娟【摘要】目的：察痔科病人肛门、肠周围脓肿感染的病原茵茵群特点及抗生素耐药状况，观直探讨因不同病原茵感染引起的肛周脓肿与肛瘘形成的

相关性。方法：集 1 4例脓液标本的临床资料，搜 7并做细菌培养、定及药敏试验结果：液标本需氧致病菌的检出率为 9 .,鉴脓 19主要为大肠埃希茵。 其次为克雷伯茵属。其中，兰阴性杆菌占 9,兰阳性球茵占 1 。本组共检出厌氧茵 1 8:弱类杆菌 9株，化链球茵 4株需氧茵耐药革 0革 O 3株脆 7消 1 统计结果可看出：亚胺培南、万古霉素的敏感率为 l O, O%青霉素的耐药率为 1 0, 0%其余抗菌素均有不同程度耐药。结论：门周围脓肿多为肠源性细肛 茵、合菌感染，源性细菌感染易形成肛瘘。未检测到耐亚胺培南、混肠万古霉素的病原茵，链球茵感染对所选择抗茵素全部敏感，未发现耐药茵株青霉素不应列为常规药物使用。。。

【键词】周脓肿；瘘；菌培养；药性关肛肛细耐【中图分类号】 4 R4 6【献标识码】B文 【章编号】 0 6 1 5 2 L ) 2

环工综合实验细菌的分离纯化和接种实验

实验报告

环境科学与工程学院实验中心

实验题目 细菌的分离纯化和接种实验 实验类别 综合

实验原理问答题：

1. 为什么湖水用10_4、10_5

低的浓度? 答：因为在这三个浓度范围内能尽量使样品中的微生物分散开, /细胞存在，否则一个菌落就不只是代表一个个体生长而成的，从而方便计数。

2. 为什么平板培养皿要倒置放入恒温箱中进行培养

:第一，为了防止重力对菌落的生成产生影响；第二，为了防止培养基中的水 分蒸发后凝结在壁上，滴落后影响菌的生长和形态观察；第三，防止培养基干涸。

3. 微生物常用接种方式有哪些？进行微生物接种应该注意哪些方面?

答：⑴划线接种，涂布接种，穿刺接种，三点接种，浇混接种，液体接种，注射 接种，活体接种等。

⑵接种用具及培养基等均需灭菌处理， 接种过程必须在煤气灯旁进行，接种 环、玻

璃涂棒等器具要过火处理，把所要用到的器材和菌种培养基有序编号放置， 操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品的接触， 往培养基是划线或 点菌时动作要轻以防把培养基划破等。

四、实验步骤

1. 制备细菌稀释液：

使用5ml 移液管加4.5ml 无菌水放入贴有10-3、10-4、10-5、10-6

标签的小试管中， 用一根Iml

细菌培养实验报告

篇一：培养基的制备与灭菌实验报告

陕西师范大学远程教育学院

生物学实验报告

报告题目培养基的制备与灭菌

姓 名 刘 伟

学 号

专 业 生 物 科 学

批次/层次

指导教师

学习中心培养基的制备与灭菌

一、目的要求

1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。

2. 掌握培养基的配置原则和方法。

3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。

二、基本原理

牛肉膏蛋白胨培养基：

是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌：

主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。

三、实验材料

1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、nacl、琼脂、1mol/l的naoh和hcl溶液。

2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三

角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。

3. 其他物品：药匙、称量纸、ph试纸、记号

摘要:药敏试验能够快速的确定病原菌以及药物敏感结果，加强耐药监测，减少用药的盲目性，合理使用抗生素有效控制感染，避免耐药菌的产生，提升治愈率。临床微生物实验室应选择先进、方便的方法进行常规的抗菌药物敏感实验。

关键词:临床,常用,细菌,药敏,试验,方法，药敏,试验,能够,快速

药敏试验能够快速的确定病原菌以及药物敏感结果，加强耐药监测，减少用药的盲目性，合理使用抗生素有效控制感染，避免耐药菌的产生，提升治愈率。临床微生物实验室应选择先进、方便的方法进行常规的抗菌药物敏感实验。

一、国内常用常用的四种方法:

第一种纸片扩散法

原理:将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，在纸片周围抑菌浓度范围内测定菌的生长被抑制，从而形成无菌生长K的透明圈即抑菌圈。其大小反映测试菌对测定药物的敏感性，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度呈负相关。

优点:药敏试验具有重复性好、操作简便、试验成本相对较低、结果直观、容易判读、便于基层开展等。

缺点:其虽是一一种传统、经典的药敏试验方法，但随着全自动微生物分析仪的推广和应用，K-B 纸片扩散法出现药敏试验假耐药、受人为因素影响较大、试验耗时长的缺点也渐渐体现出来，同时快速性、准确性方面存在不足[1]。

应用:应用于兼性厌氧

菌落

定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性。 2、细菌在液体培养基中的生长现象 混浊

沉淀：多见于链状排列的细菌。 菌膜：多见于厌氧菌。

3、细菌在半固体培养基中的生长现象 有鞭毛细菌：

在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。 无鞭毛细菌：

只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。

生化试验鉴定：糖发酵试验、淀粉实验、油脂水解试验、吲哚实验、M.R.及V.P的原理及方法。

1.淀粉水解试验

1.将固体淀粉培养基熔化后冷却至50℃左右，无菌操作制成平板。 2.用记号笔在平板底部划成4部分。

3.将枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌分别在不同的部分点种，在平板的反面分别在4部分写上菌名。

4将平板倒置在37℃温箱中培养48h。

5观察各种细菌的生长情况，打开平板盖子，滴入少量卢氏碘液于平板中，轻轻旋转平板，使碘液均匀铺满整个平板。如菌苔周围出现无色透明圈，说明淀粉已被水解，为阳性。透明圈的大小可初步判断该菌水解淀粉能力的强弱，即产生胞外淀粉酶活力的高低。 2油脂水解试验

1将熔化的固体油脂培养基冷却至50℃左右时，充分摇荡

大肠杆菌的分离以及药敏试验（悠然）

摘 要：山东某集团送检的疑似大肠杆菌病的病死鸡的心、肝、脾，进行病原菌的分离、鉴定和药敏试验。结果显示引起该鸡场鸡只发病的病原为大肠杆菌，对阿米卡星、新霉素敏感，对头孢和新霉素的复方制剂中度敏感，几乎对可克林霉素不敏感。表明该鸡场出现了耐药的致病性大肠杆菌，在以后的肉鸡生产中应慎用抗生素，在使用药物治疗大肠杆菌病时，应根据药敏试验结果，选择敏感药物，且应注意交替用药，按疗程投药。 关键词：大肠杆菌；分离鉴定；致病性；药敏试验

大肠杆菌病是由大肠杆菌某些血清型菌株引起的一类疾病的总称。各个品种和日龄的鸡均可发病，但肉仔鸡最易感。随着养禽业的迅速发展与高度集约化饲养，鸡大肠杆菌病已成为鸡群重要的疾病之一。为了控制鸡大肠杆菌在鸡群中的传播，我们对送检的疑似大肠杆菌病例进行病原的分离鉴定，并对分离菌的培养特性、致病力及抗菌药物的敏感性进行了研究，为有效防制鸡大肠杆菌病提供了依据。 1 材料与方法 1.1 病料来源

2006年11月山东省某集团养殖场场送检的疑似大肠杆菌病的病料若干，已死亡鸡只死亡时间不超过24 h。 1.2 细菌分离培养

无菌采集病、死鸡的肝脏、心血等组织，接种在普通琼脂平板及普通肉汤，37℃培

光合细菌配合面包酵母与藻粉培养转曳的实脸

摘要---以面包醉母与一定量螺旋藻粉培养褶皱臂尾轮虫的过程中,添加光合细菌液进行实验。结果表明:光

合细菌作为辅助性饵料,对轮虫的生长具有明显特殊的促进作用。4组实验显示:投喂适宜量光合细菌轮虫增殖

明显加快,但与光合细菌添加量的增加不完全呈正比关系;投喂光合细菌新鲜培养液与老培养液轮虫增殖效果相

近;投喂光合细菌只能作为辅助性饵料。当配合酵母、藻粉培育轮虫时,3者在饵料上起到了良好的互补作用,培

养效果最佳。

关键词轮虫培养光合细菌面包酵母藻粉

轮虫是鱼、虾、蟹类人工育苗幼体阶段重要的活饵

料之一,培养轮虫无疑是育苗技术中的重要环节。轮虫

在工厂化培养中可利用高密度单胞藻获得高产,但目前

该技术仍有占地多、耗用人力多的问题。近年来用面包

酵母单独投喂轮虫,也可获得高产。因酵母来源广,贮

运方便,此法已广为利用。但发现轮虫培养过程中易出

现延迟期,且培养出的轮虫个体小,饵料价值有待提高。

近年来国内外开展的光合细菌(PSB)在水产养殖

的应用研究,各方面效果很好。在PSB培养轮虫方面,就

PSB单独投喂、PSB与藻液、PSB与面包酵母混合投喂轮

虫分别进行实验,取得很好的效果。本实验以PSB混合

面包酵母与螺旋藻粉投喂轮虫,并对其培养效

篇一：实验1 大肠杆菌的培养和分离实验教学提纲

实验1 大肠杆菌的培养和分离教学提纲

实验目的

1. 进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。

2. 进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的划线培养。

3. 说明大肠杆菌的培养条件和操作要求的原理。

实验材料

1. 配制LB液体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，加水50mL溶解。

2. 配制LB固体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，琼脂1g，加水50mL溶解（配制LB固体培养基是用来倒平板和倒试管斜面）。

实验步骤

1. 培养基灭菌。

在两个150mL的三角瓶中分别装入50mL LB液体培养基和50mL LB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜(一种塑料薄膜，中间有小孔的滤膜。既可以通气，又不使细菌进入。)。将培养皿用牛皮纸包好，放入高压灭菌锅中，1kg压力灭菌15min（有压力时开始计时）。 同时将需要灭菌使用的培养皿、试管、三角瓶等和所用器械（接种环、镊子等）等一块灭菌。

2. 倒平板，倒斜面。

灭菌后。待高压锅压力与大气压相同时，打开锅盖，将有培养基的三角瓶、试管、培养皿等放在灭菌后的超净工作台上。

超净工作台操作：打超净工作台的紫外