冰冻切片操作流程

1. 体式显微镜下，用显微剪刀沿角膜缘剪下角膜，将眼杯置于固定液内（0.2M NaH2PO4

10ml + 0.2M Na2HPO4 40ml + 8%多聚甲醛 50ml），４℃固定过夜

2. 体式显微镜下，用显微剪剪除虹膜，并剪断晶体悬韧带，晶体自动游离出眼杯，尽量减

少对眼杯扰动，将眼杯置于30%蔗糖（sucrose）溶液内（0.1M PB配置 PH=7.4），４℃脱水过夜沉底

3. 将眼杯由30%蔗糖溶液取出，置于20%蔗糖溶液与OCT包埋剂（TFM? Tissue Freezing

Medium）2：1体积比例混合液中，室温浸泡摇动30min 4. 体式显微镜下，于平皿内用软纸采用虹吸方式吸干眼杯内外水份，尽量减少对眼杯扰动 5. 在模具（tissue-tek 4565）上标记样品情况，向模具内倒入20%蔗糖溶液与OCT包埋剂

2：1体积比例混合液，将眼杯开口向上置于液体上，先用显微镊子按压一侧眼球（下方），使液体缓慢浸满眼杯，而后将眼杯在琼脂糖翻转，杯口朝下置底，上方眼球标记点朝向模具标记位置并置中，并使鼻侧或颞侧眼球靠近模具壁，将模具置于钢板上，移至-80℃冰箱（保证眼杯在内不动），静置10min

6. 将模具置于冰冻切片机恒冷箱内1

切片法主要步骤 1、取材与固

（1）取材：从动物体取下所需的器官材料。取材的动物要健康，材料愈新鲜愈好，应在致死后立即取材，防止组织细胞自溶变性；取材的器械要锋利；所取材料力求小而薄（以不超过0.5cm为宜），不能挤压和损伤。

（2）固定：将所取的材料立即投入固定液中，目的是使组织蛋白迅速凝固，使细胞内的结构和成分不再发生变化，保持组织细胞与活体相似的形态结构，固定后的组织块变硬，便于进一步处理。常用的固定剂有甲醛、乙醇、苦味酸或混合固定液。实验室常用Bouin固定液，固定时间为12～24小时，其固定的组织块不需进行水洗，可直接进行脱水。 2、脱水与透明

（1）脱水：固定后的组织块内含有的大量水分要彻底脱去，以便石蜡的浸入。常用的脱水剂为乙醇，脱水过程必须循序渐进，从低浓度开始，逐步升高，使组织块中的水分逐渐被乙醇所取代。具体操作为：Bouin固定液固定的组织块可直接进入70％的乙醇进行脱水，时间12小时左右。（若材料暂不制片，可保存于70％乙醇中。）然后将组织块依次移入85％乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ

冰冻切片免疫组化步骤

1. 需要准备的材料

APES包被的载玻片 PBS（pH7.4） 4%多聚甲醛

PBST（含Tween-20）

PBST-G（含0.3mol/L甘氨酸）

2. 冰冻切片

取出组织块放于软塑料盖或特制的小盒内，之后将其缓慢平放于盛有液氮的小杯内，让盒底部接触液氮（小盒及组织块切勿浸入液氮内），大约10-20秒组织即迅速冰冻成块。取出组织冰块立即置于-80℃冰箱储存备用，或置于恒温切片机冰冻切片。

切片厚度4-8 um (5 um)，对于免疫组化的需要用APES包被的载玻片，以增加组织片的粘附性。

切片后如不立即染色，必须吹干，储存于低温冰箱内保存。

3. 免疫组化染色步骤

固定：取出切片，室温放置5mins。用4%的多聚甲醛PBS溶液室温固定15mins，PBS冲洗三次（冲洗可以采用侧斜淋洗，也可至于平皿中摇晃）。

打孔：如果是需要染细胞内的蛋白，用曲拉通（TritonX-100）打孔：组织样品浸于含0.25% TritonX-100的PBS中10mins，之后用PBS洗3次，每次5mins。如果是染膜蛋白的，不需要曲拉通打孔。

封闭：将组织置于含1%BSA的PBST溶液中30mins，封闭非特异性粘合的抗体。对于多聚

手术中冰冻切片检查规范

一、手术中冰冻切片检查注意事项

(一) 手术中冰冻切片检查是临床医师在实施手术过程中，就与手术方案有关的疾病诊断问题，尤其需要临床医师与病理医师间的密切合作。

(二) 手术中冰冻切片检查要求病理医师在很短时间内，根据对切除标本的巨检和组织块快速冷冻切片的观察，向手术医师提供参考性病理诊断意见，由于组织未得到充分有效的固定、脱水以及切片较厚等等，与石蜡切片病理诊断的准确率有一定的差距，一般仅限于良、恶性的鉴别。与常规石蜡切片的病理诊断相比，手术中冰冻切片检查具有更多的局限性和误诊的可能性，误诊率5%以上。有的病例难以快速诊断，需要等待常规石蜡切片进一步明确诊断。

(三) 有关临床医师应于手术前向患者和／或患者授权人说明手术中冰冻切片检查的意义和局限性等，取得患者和／或患方的知情和理解。患者和／或患者授权人应在由医院制定的《手术中冰冻切片检查知情同意书》签署意见和签名。

(四) 主持手术的临床医师应在手术前一天向病理科递交手术中冰冻切片检查申请单，填写患者的病史，重要的影象学、实验室检查结果和提请病理医师特别关注的问题等。一般不接受电话预约和临时申请手术中冰冻切片检查。

（五） 手术中冰冻切片检查的手术标本

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卵巢肿瘤术中冰冻切片病理诊断分析

作者：袁继华

来源：《健康之路（医药研究）》2015年第03期

【摘要】目的 研究冰冻切片病理检查应用于卵巢肿瘤诊断中的准确性，评估其诊断价值。方法 本次研究将120例卵巢肿瘤患者作为研究对象，并将术后石蜡切片病理检查结果作为诊断标准，计算冰冻切片病理检查在卵巢肿瘤中的诊断正确率、误诊率，分析误诊原因。结果 冰冻切片病理检查共诊断出17例恶性肿瘤，6例交界性肿瘤和93例良性肿瘤，误诊率为3.33%，诊断正确率为96.67%；冰冻切片病理检查诊断正确率（96.67%）与石蜡切片病理诊断正确率（100.00%）比较，P>0.05；切片读取错误所致误诊及取材不当所致误诊均为2例。结论 冰冻切片病理检查诊断卵巢肿瘤有较高正确率，严格取材和切片读取能进一步提高诊断正确率，为手术治疗提供重要指导。

【关键词】卵巢肿瘤；冰冻切片；诊断正确率；误诊原因

【中图分类号】R4 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2015）03-0105-01 卵巢肿瘤形式较多，不同形式卵巢肿瘤具有不同临床症状

增黏切片(SSP)流程说明

本流程以初级形状聚对苯二甲酸乙二酯为原料，为了达到工业丝用切聚酯片要求，必须对聚酯切片进行增粘、去除一些有机小分子、生产过程中产生的粉尘，详尽叙述如下： 一．购买初级形状聚对苯二甲酸乙二酯粒子为原料，输送到固相聚合系统增粘。

非晶态聚酯切片（常温）通过槽罐车运送到厂后，先以输送系统将聚酯切片送入原料槽存放，再经过振荡筛的筛选后，才将切片输送至生产线。振荡筛需定期进行拆请，清理过程中将造成切片落地，因被污染无法使用，清扫后归类为垃圾处理，此进程产生0.20%废聚酯切片。

二．固相聚合分为预结晶、预热、反应、冷却四个阶段 1．结晶：

通过已结晶切片和大量循环气体的剧烈沸腾来防止新加入切片的粘结，此进程产生0.01%粉尘，使用旋风分离器分离。

*工艺气体用加热器来加热使其达到所需要的工艺温度 *空气用风机打循环 *粉尘在旋风分离器分离

*生产过程中剧烈的反应和通过旋转阀产生的尘粒和变异切片

通过排掉部分循环气体使得回路中富集的水份和乙醛含量维持在允许的范围内。排掉的用在净化系统过滤后的气体补充，这些空气通过过滤器，此进程产生0.05%废气。 2. 预加热：

切片通过旋转阀连续喂入预热器，旋转阀把氮气循环和空气循环隔

石蜡切片的制作及注意事项

1脱水

将固定的组织取出，依次经过：50%酒精（已保存在70％的酒精中可省略）→70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精→100%酒精（两次），每级35－45分钟，100%酒精第二次可适当缩短时间。

酒精浓度越高组织越容易变脆，时间不能太长。每次从低浓度更换到高浓度的酒精时，要把组织块用吸水纸吸干。

2 透明

100%C2H5OH＋二甲苯( 1 : 1 )30-40分钟， 二甲苯（Ⅰ）15分钟→ 二甲苯（Ⅱ）15分钟（易脆的组织可省略）。

二甲苯的收缩性强，极易使组织变脆，透明时间根据不同的组织适当调整。 3 透蜡

二甲苯 ＋石蜡 （ 1:1 ）30分钟， 石蜡（Ⅰ）40分钟→ 石蜡（Ⅱ）30分钟

浸蜡是将包埋剂取代二甲苯渗透入整个组织的过程,通常在恒温箱中进行,恒温箱的温度应该设置成高于石蜡熔点2～3 ℃。

浸蜡的时间长短根据不同的组织器官适当调整。

4 包埋

5切片

将凝固的蜡块修整成合适的方块，上下边要平行，并固定在小木块上，切片厚度6-12um，一般7-8um。

切片刀倾斜角一般以20—30度为宜，切片时力要均匀一致，以每分钟40-50转为宜。

夏季切片时,为保持蜡块硬度，可把蜡块放于冰柜中,切片时再取出；胶质成分较多的组织蜡块,

ArcGIS Server 10.0切片操作手册

ArcGIS Server 10.0 切图方式说明希望通过这个教程让大家能快速了解流程，从而掌握切图。

ArcGIS Server 10.0切片操作手册

ESRI公司开发的ArcGIS Server软件可以方便快捷的实现地图瓦片的创建和电子地图的发布，该技术近年来被广泛的应用于各类电子地图数字城市、 地理信息平台的建设中。为了更好地与天地图、浙江省交换与共享平台实现对接并实现后期的数据维护更新，就应该熟练的掌握基于ArcGIS Server的切片方式。 ArcGIS Server 10.0 的切片方式共分为两个步骤：建立ArcGIS Server 服务器和生成切片服务进行切片。文档以下将详细对这两个步骤以及切片注 意事项做详细说明。

1 建立 ArcGIS Server 服务器1.1准备工作 在架设ArcGIS Server服务器之前，要确定相应的软件和工作环境已经安装就绪。 计算机的操作系统通常为windows server2003,需安装WindowsServer2003 KB925336-x86-CHS.exe补丁。此外，若系统没有默认安装IIS服务器，则需手动安装。 必需的软件有ArcGIS

组织病理切片的制作流程

1． 取材

组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：

(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。

(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。

(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。

(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求

切片技术!

第2 6卷第 3期 20 0 9年 6月d i 0 3 6/.sn 10 -6 2 2 0 . 3 0 2 o: . 9 9 jis. 0 89 3 . 0 9 0 . 7 1

生物学杂志J RNA I OG OU L OF B OL Y

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冰冻切片技术在植物显微结构和组织化学中的应用谢佩松，中根，存虚徐韦(州大学生物科学与技术学院，苏扬州 2 5 0 )扬江 2 0 9摘要：介绍了冰冻切片法研究植物显微结构和组织化学的一般程序。结果表明，冰冻切片过程简单有效且图版

清晰， 1d内可获得高质量图片，决了利用普通石蜡切片观察植物样品需要进行脱水、在 解浸透、包埋操作且耗时长的问题，植物显微结构和组织化学研究中具有广阔的应用前景。在关键词：冻切片；物；冰植显微结构；化反应组

中图分类号： 3 6 Q一 3

文献标识码： B

文章编号：0 8— 6 2 20}3— o 2一 3 10 9 3 (0 9 0 0 7 O

冰冻切片是利用低温使组织迅速冻结达到一定的硬度进行切片的一种方法。与常规的石蜡切片相比， 冰冻切片因其不经过脱水和透明等步骤，具有快速、简

112仪器 ..

Li M10