电转化原理

电转化感受态细胞的制备

1. 用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培

养基和枪头的空白对照）

2. 37℃，220rpm，培养14-16个小时。

3. 第二天，以1：100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中，37度，220rpm，振摇2-3小时，每半小时测一次OD，当OD值达到0.3-0.4时，停止培养。

4. 将菌液在冰上预冷30分钟，随后将菌液分装到500ml 预冷的离心杯中，4℃，2500rpm离心10分钟。

5. 弃上清，离心杯中加入少量ddH2O，使沉淀悬浮后，再将水注满离心杯，4℃，4000rpm离心10分钟。

6. 弃上清，加少量灭菌水，重悬菌体，再将水注满离心杯，4000rpm，4℃，离心10min。

7. 弃上清，往离心杯中加入少量10%甘油(灭菌，预冷)，重悬菌体，再加满10%甘油, 4℃, 4000rpm, 离心10min。

8. 弃上清，每个离心杯中加入5ml10％的甘油，使沉淀悬浮后，将菌液以300ul/管分装于1.5ml的离心管中，-80 ℃冰箱中保存。同时取100 μl感受态加0.01ng puc18直接电穿孔转化，检测转化效率。

电转化感受态细胞的制备

1. 用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培

养基和枪头的空白对照）

2. 37℃，220rpm，培养14-16个小时。

3. 第二天，以1：100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中，37度，220rpm，振摇2-3小时，每半小时测一次OD，当OD值达到0.3-0.4时，停止培养。

4. 将菌液在冰上预冷30分钟，随后将菌液分装到500ml 预冷的离心杯中，4℃，2500rpm离心10分钟。

5. 弃上清，离心杯中加入少量ddH2O，使沉淀悬浮后，再将水注满离心杯，4℃，4000rpm离心10分钟。

6. 弃上清，加少量灭菌水，重悬菌体，再将水注满离心杯，4000rpm，4℃，离心10min。

7. 弃上清，往离心杯中加入少量10%甘油(灭菌，预冷)，重悬菌体，再加满10%甘油, 4℃, 4000rpm, 离心10min。

8. 弃上清，每个离心杯中加入5ml10％的甘油，使沉淀悬浮后，将菌液以300ul/管分装于1.5ml的离心管中，-80 ℃冰箱中保存。同时取100 μl感受态加0.01ng puc18直接电穿孔转化，检测转化效率。

电转化感受态细胞的制备

1. 用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培

养基和枪头的空白对照）

2. 37℃，220rpm，培养14-16个小时。

3. 第二天，以1：100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中，37度，220rpm，振摇2-3小时，每半小时测一次OD，当OD值达到0.3-0.4时，停止培养。

4. 将菌液在冰上预冷30分钟，随后将菌液分装到500ml 预冷的离心杯中，4℃，2500rpm离心10分钟。

5. 弃上清，离心杯中加入少量ddH2O，使沉淀悬浮后，再将水注满离心杯，4℃，4000rpm离心10分钟。

6. 弃上清，加少量灭菌水，重悬菌体，再将水注满离心杯，4000rpm，4℃，离心10min。

7. 弃上清，往离心杯中加入少量10%甘油(灭菌，预冷)，重悬菌体，再加满10%甘油, 4℃, 4000rpm, 离心10min。

8. 弃上清，每个离心杯中加入5ml10％的甘油，使沉淀悬浮后，将菌液以300ul/管分装于1.5ml的离心管中，-80 ℃冰箱中保存。同时取100 μl感受态加0.01ng puc18直接电穿孔转化，检测转化效率。

3.大肠杆菌电转化及电转感受态细胞的制备

电转化法是利用瞬间高压在细胞上打孔，同时，DNA在电场力的作用下进入细胞，随后

细胞复苏和弥合，从而实现质粒DNA的物理转移。为避免电击时出现“击穿”，即产生电

910

流，细胞悬浮液中应含有尽量少的导电离子。转化效率为10～10转化子/μg DNA。

3.1．感受态细胞的制备

（1）感受态细胞及材料准备同钙转化感受态细胞的制备相同。

（2）选合适的大肠杆菌在4℃，3000 rpm下离心10min，弃上清液（如需要，沉淀可在

4℃的10%甘油中保存1～2天）。

（3）弃上清，离心管中加入少量ddH2O，轻柔的悬浮沉淀后，再将水注满离心杯，4℃，3000

rpm离心10min。

（4）重复步骤（3）1次。

（5）小心弃上清（沉淀可能会很松散），再往离心管中加入少量10%甘油（灭菌，预冷），重悬菌体，再加满10%甘油，4℃，4000 rpm离心10min。

（6）用10%甘油重悬浮细胞至最终体积为2～3ml，将细胞按200μl等份装入微量离心管，放置于－80℃下保存。

（7）按照钙转化感受态细胞方法进行转化效率和抗性检测。

3.2．电转化

为了降低离子浓度，待转化的质粒

1农杆菌感受态细胞的制备

挑取根癌农杆菌GV3101单菌落于5 ml含100 μg/ml利福平(Rifampicin)，50 μg/ml卡那霉素(Kanmycin)和50 μg/ml庆大霉素(Genmycin)的LB液体培养基中，28℃振荡培养过夜；取过夜培养菌液500 μl接种于 50 ml LB(含相应抗生素)液体培养基中，28℃振荡培养4-8小时(OD600为0.5-0.8)；冰浴30分钟，4,000 rpm，4℃离心10分钟，加入10 ml预冷的 20 mM CaCI2悬浮农杆菌细胞，4000 rpm，4℃离心10分钟；加入2 ml预冷的 20 mM CaCl2悬浮细胞，冰浴，分装成每管100 μl，液氮中速冻后，置-80℃保存备用。 2.质粒转化农杆菌 GV3101

将构建的带有目的基因的质粒pCAMBIA-1304-plc转化 (冻融法) 根癌农杆菌GV3101，步骤如下：

1) 从-80℃冰箱中取出 GV3101 感受 态细胞 (100 μl)，置于冰上解冻；

2) 加入 5 μl 含目的基因的质粒，轻轻混匀；冰水浴 5 min； 3) 液氮冷冻 8 min； 4) 37℃水浴热激 5 min；

5) 加入 900 μl LB/

GeoMap格式转换

1.问：AutoCAD图件转换为GeoMap图件操作流程是什么？

答：

1) 将AutoCAD标准格式dwg图件在AutoCAD软件中打开，然后另存为dxf格式；

2) 打开GeoMap图形转换工具。然后单击“导入”菜单下的“dxf数据导入”。在弹出的打开窗口中打开需要转换的dxf图件；

3) 图件在图形转换工具工作区打开之后，单击“文件”菜单下的“另存为”，将图件另存至指定位置。

2.问：CorelDraw图件通过dxf文件转换GeoMap图件操作流程是什么？

答：

1) 在CorelDraw中将要转换的*.cdr标准图件打开，然后单击“文件”菜单下的“另存为”，将该图件另存为dxf格式；

2) 打开Geomap图形转换工具。然后单击“导入”菜单下的“dxf数据导入”。在弹出的打开窗口中打开另存所得的dxf图件；

3) 图件在图形转换工具工作区打开之后，单击“文件”菜单下的“保存”或“另存为”，将图件另存至指定位置。 注：

A. CorelDraw9更高版本（例如：CorelDraw12、CorelDraw13等）另存所得dxf文件会比较大，转换有些慢，需要耐心等待。

B. CorelDraw9更高版本（例如：

篇一：学困生转化记录

薛六学双困生，纪律差生辅导记录表 教师姓名：韩琴 时间：2014年3月

薛家湾第六小学学困生转化情况记录表 教师姓名：韩琴 时间：2014年4月

薛家湾第六小学学困生转化情况记录表 教师姓名：韩琴 时间：2014年5月

薛家湾第六小学学困生月转化情况记录表 教师姓名；韩琴 时间：2014年6月

篇二：学困生辅导记录辅导纪录

学困生辅导记录

仁和镇中心学校 何正秀

姓名 :穰才车

学生情况分析:

从课程设置，教学环节等方面注重对学穰才车的关爱，“备课时必须对穰才车的问题及对策进行充分的预设，上课时必须让穰才车提出问题，合作学习中必须让穰才车发言，辅导点拨时必须解决学钟光然的困惑，设计作业时必须施针对穰才车进行分层次布置并对他当面辅导” 。

辅 导 效 果:

穰才车重新树立学习信心。找出了自己学习上的优势与长处，唤起了心灵深处的自我向上的意识，由消极被动地学习向积极主动地学习转变，由自卑向自尊自强转变。

姓名：石绍丽

辅导地点 ：本班教室

辅导形式 :个别 经常称作业忘记带，学习态度不端正，做题错误多。

姓名 :沈国龙

辅导地点：本班教室

情况分析:

该生智力正常， 理解能力及推理能力较弱， 数学学习兴趣不浓，对数学学习有畏惧情绪，学习态度不主动，不稳定，学习

篇一：科技成果转化及研究开发管理情况

科技成果转化及研究开发管理情况。

我公司目前已投入生产的科技成果主要有以下几种：

1、真空（镭射）转移镀铝纸

该产品将铝丝在1×10?3大气压下，2400摄氏度度以上高温直接升华成铝蒸汽，在-20摄氏度的薄膜表面迅速冷凝成铝层，然后将其通过水性胶黏剂从薄膜上转移至纸张上。该产品还可以增加镭射效果，起到防伪和美观的作用。

2、纸张、薄膜镭射标签

通过真空镀铝技术制造防伪作用的纸张或薄膜标签

3、烫印箔

采用独自开发环保原料，生产用于在纸张的烫印箔。

4、水性无机透明色浆

该产品摒弃了以往采用络合金属染料含有芳香胺等有毒物质的染料，采用无机颜料和纳米技术制作而成，产品性能稳定，不会在任何条件下反映生产有害物质，可以用于直接食品包装上使用

涉及到以上产品我公司正在申请的专利

201010547123.9 一种环保可剥离水性涂料及制备方法已公开

201010520916.1 一种水溶性OP蜡乳液及制备方法已公开

201110075791.0 一种环保高速电化铝烫印背胶及制备方法 已进入实审 201110243821.4 一种环保型水性铝箔幽默及制备方法 已进入实审 201110243825.2 一种塑料印刷用水性幽默及制备方法

篇一：学困生转化情况记录

学困生转化情况记录表

学困生转化情况记录表

学困生转化情况记录表

篇二：学困生辅导记录辅导纪录

学困生辅导记录

仁和镇中心学校 何正秀

姓名 :穰才车

学生情况分析:

从课程设置，教学环节等方面注重对学穰才车的关爱，“备课时必须对穰才车的问题及对策进行充分的预设，上课时必须让穰才车提出问题，合作学习中必须让穰才车发言，辅导点拨时必须解决学钟光然的困惑，设计作业时必须施针对穰才车进行分层次布置并对他当面辅导” 。

辅 导 效 果:

穰才车重新树立学习信心。找出了自己学习上的优势与长处，唤起了心灵深处的自我向上的意识，由消极被动地学习向积极主动地学习转变，由自卑向自尊自强转变。

姓名：石绍丽

辅导地点 ：本班教室

辅导形式 :个别 经常称作业忘记带，学习态度不端正，做题错误多。

姓名 :沈国龙

辅导地点：本班教室

情况分析:

该生智力正常， 理解能力及推理能力较弱， 数学学习兴趣不浓，对数学学习有畏惧情绪，学习态度不主动，不稳定，学习方法欠缺，具有随意性。 辅导形式：

1．注重掌握口算的方法。如：让他背熟乘法口诀，用乘法 口诀直接求积、求商；根据运算定律进行口算，不断提高 口算能力。

2．教会他怎样观察口算题目的特征。

3．做形式多样的口算练习。如：视算训练、

　　做好学困生的转化工作是教育工作者不可忽视的问题，如何做好学困生转化，需要做好计划。今天小编在这给大家带来学困生转化计划，接下来我们共同阅读吧!

　　学困生转化计划

　　一、指导思想

　　以科学发展观为指导，大力推行素质教育，促使学生全面发展，全员发展，关注特殊学生，促使教育的均衡协调发展。构建以学校教育为主导，班级教育为主体，家庭、社会教育为辅助的特殊群体学生工作体系，创设良好的教学氛围，促使每一位学生健康和谐地发展，努力提高全面教学质量，着力打造教学特色品牌。

　　二、工作目标

　　1、培养学生树立正确的知识观、人生观，养成良好的学习习惯和行为习惯。

　　2、加强均衡学科的发展，提高兴趣学科的发展，转化弱势学科的发展，全面提高教学质量。

　　三、工作思路

　　分类教育，分层教学，分科发展，互助学习，跟踪评价。

　　四、工作内容及措施

　　(一)分类教育——切实做好特殊群体学生的分类管理工作。

　　1、教务科根据学生成绩(或学期积分成绩)列出特殊群体学生建议名单，并发至各班各任课教师。

　　(该名单只作内部资料参考使用，决不向学生或家长公开)。各班教师根据建议名单选择一些具备一定的学习能力而又学得差强人意的这部分学生作为重