荧光分析法测定尿中维生素b2含量

荧光光度分析法测定维生素B2的含量

引言

荧光分光光度法简介

有些物质，当用紫外光照射时，它吸收某种波长之后还会发射出各种颜色和强度不同的光；而当紫外光停止照射后，这种光线也随之消失，这种光线称为荧光。荧光的波长比吸收的紫外光波长要长。

由于物质分子结构不同，所吸收的紫外光波长和发射的荧光波长也有所不同。利用物质的这个特性，可以对物质进行定性分析。同一种分子结构的物质，用同一种波长的紫外光照射，可发射相同波长的荧光；若该物质的浓度不同，所发射的荧光强度也不同，利用这个性质可以对物质进行定量分析。这种定量方法称为荧光分析法，简称荧光法。测量荧光的仪器有滤光片荧光计，滤光片—单色器荧光计和荧光分光光度计。荧光法的选择性好，灵敏度比紫外-可见分光光度法高2~3数量级，检出限低，可以达到10~12g／m1，线性范围宽。现在主要应用的是荧光分光光度计。 【实验目的】

1. 学习荧光光度法测定维生素B2的含量的基本原理和方法。 2. 熟悉荧光光度计的结构及使用方法。 【实验原理】

在经过紫外光或波长较短的可见光照射后，一些物质会发射出比入射光波长更长的荧光。在稀溶液中，荧光强度IF 与物质的浓度c有以下关系：

IF?2.303?I0?bc

当实验条

1、了解荧光分光光度计的主要结构及工作原理2、掌握荧光光度计的操作技术和测定维生素片B2中核黄素的实验方法

补充实验 荧光法测定维生素B2片剂中核黄素含量

一、实验目的

1、 了解荧光分光光度计的主要结构及工作原理

2、 掌握荧光光度计的操作技术和测定维生素片B2中核黄素的实验方法

二、实验原理

某些物质被某种波长的光（如紫外光）照射后，会在极短时间内，发射出较入射光波长为长的光，这种光称为荧光。吸收什么波长范围的光和发射什么波长范围的光，这与被照射的物质有关。而所发射的荧光的强度与该物质的浓度有如下关系：

-alc If=KфI0（1-e）

式中：If为荧光强度；K为仪器常数；ф为荧光物质的荧光量子产率；I0为入射光

-1强度；l为样品池厚度；c为荧光物质的浓度（mol l）；a为荧光物质的摩尔吸光系数。

当溶液浓度较稀时，则If=KфI0alc

可见，在稀溶液中，当入射光强度、样品池厚度、仪器工作条件不变时，测得的荧光强度与荧光物质的浓度成正比。

维生素B2，又叫核黄素，是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为

核黄素易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。

核黄素B2在230～490nm范围波长的光照射下，激发出峰值在526nm

实验六 荧光光度法测定样品中维生素B2的含量

一、目的与要求

1． 掌握用荧光光度法测定维生素B2的原理; 2． 加深对荧光光度法原理的理解; 3． 巩固荧光光度计的基本操作。 二、方法原理

维生素B2又称核黄素，溶于水，在ω为0.05的乙酸溶液中是一个强荧光物质，在中性和酸性溶液中，对热稳定，在碱性溶液中较易被破坏。维生素B2在一定波长光照射下产生荧光。在稀溶液中，其荧光强度与浓度成正比，即：

F = Kc

故可采用标准曲线法测定维生素B2的含量。 三、仪器与试剂

1．930型荧光光度计及其附件。 2．容量瓶：25 mL。

3．维生素B2标准贮备液（100 mg·L）：准确称取25mg维生素B2，用ω为0.05的乙酸溶解，转移至250 mL容量瓶中，用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，保存于冰箱中。

4．维生素B2标准工作液（0.5mg·L-l）：吸取上述贮备液0.50mL于100 mL容量瓶中，用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，随用随配。

5．含维生素B2的水样（自行制备）：取VB2片剂一片，用ω为0.05的乙酸溶液溶解（若有不溶杂质，过滤即可），稀释适当倍数后测量。

四、内容与步骤 1．标准系列溶液的配制

吸取维生素B2

上海大学生命科学实验中心

课 程： 学 号：

生化分析实验 09123364

实 验 报 告

姓 名： 吴梦楠 同组者： 温 度：

日 期： 2011.09.21 指导老师： 戴小峰 湿 度：

实验时间： 2011.09.19

实 验 名 称：紫外可见分光光度法测定维生素B2 实 验 目 的：1、维生素B2的紫外可见光谱图的测绘

2、根据E1M444nm文献值323求取样品中VB2的含量 3、用标准曲线法求取样品中VB2的含量 4、比较两种方法的误差来源

实 验 原 理：维生素B2，通常指核黄素。维生素B2在224、267、375、444nm处具有吸收峰。一

般取444nm的波峰为定量吸收峰，除了用一般的工作曲线法外，还可按C17H20N4O6 的吸收系数（E1M444nm）为323计算，求取样品中维生素B2的含量。

实 验 器 材：Cary100UV-Vis分光光度计、冰醋酸（AR）、氢氧化钠1mol/L（AR）、维生素B2标

准试剂（0.3mg/ml）、药片（含维生素B2片）。

实 验 步 骤：1、取待测片剂20 片，精密称定、研细，精密称取适量（约相当于维生素B210mg），

橙子中维生素C含量的测定

——直接碘量法 吉林大学化学学院

2013.6.7

前言

维生素C ，无色晶体，分子式C6H8O6，分子量为176.13，纯品为白色结晶或结晶性粉末，无臭、味酸，久置颜色渐变微黄，水溶液呈酸性，易溶于水中，能溶于乙醇中，而不溶于氯仿或乙醚中，熔点为190~192℃，熔融时同时分解。 维生素C又名抗坏血酸，是一种重要的水溶性维生素。它与人体的多种代谢有关，可降低毛细血管通透性、降低血脂、增强机体的抵抗能力，并有一定的解毒功能和抗组胺作用。人体不能合成及贮存维生素C，故必需从外界摄取。维生素C在自然界分布很广，主要存在于植物性食物的果实、浆果和蔬菜中。不同的水果、蔬菜中维生素C 的含量不同。测定果蔬中维生素的含量对评定其营养具有重要的意义。对于其含量测定，本实验采用直接碘量法，该方法简便、快速、较为准确。其化学式为C6H8O6，相对分子质量为176.1。由于分子中的烯二醇基

具有还原性，能被I2定量地氧化成二酮基。

由于抗坏血酸具有较强的还原性，在空气中极易被氧化而变成黄色，尤其是在碱性介质中更甚，测定时加入HAc使溶液呈弱酸性，减少维生素C的副反应。 直接碘量法：加入淀粉做指示剂，然后用标定好的已知浓度的I2与抗坏血酸反应

橙子中维生素C含量的测定

——直接碘量法 吉林大学化学学院

2013.6.7

前言

维生素C ，无色晶体，分子式C6H8O6，分子量为176.13，纯品为白色结晶或结晶性粉末，无臭、味酸，久置颜色渐变微黄，水溶液呈酸性，易溶于水中，能溶于乙醇中，而不溶于氯仿或乙醚中，熔点为190~192℃，熔融时同时分解。 维生素C又名抗坏血酸，是一种重要的水溶性维生素。它与人体的多种代谢有关，可降低毛细血管通透性、降低血脂、增强机体的抵抗能力，并有一定的解毒功能和抗组胺作用。人体不能合成及贮存维生素C，故必需从外界摄取。维生素C在自然界分布很广，主要存在于植物性食物的果实、浆果和蔬菜中。不同的水果、蔬菜中维生素C 的含量不同。测定果蔬中维生素的含量对评定其营养具有重要的意义。对于其含量测定，本实验采用直接碘量法，该方法简便、快速、较为准确。其化学式为C6H8O6，相对分子质量为176.1。由于分子中的烯二醇基

具有还原性，能被I2定量地氧化成二酮基。

由于抗坏血酸具有较强的还原性，在空气中极易被氧化而变成黄色，尤其是在碱性介质中更甚，测定时加入HAc使溶液呈弱酸性，减少维生素C的副反应。 直接碘量法：加入淀粉做指示剂，然后用标定好的已知浓度的I2与抗坏血酸反应

HPLC法测定果蔬中维生素C

摘要通过高效液相色谱法和国标法2种方法测定了果蔬中的维生素C，通过精密度、准确度、回收率等方法对比结果表明：液相色谱法是一种高效、快速、准确、高灵敏度的分离分析方法。

AbstractIn this paper，high performance liquid chromatography and national standard method were used to determine VC in fruits and vegetables. Through the precision， accuracy，recovery methods，etc.，such as comparative results showed that liquid chromatography was an efficient，fast，accurate and high sensitivity separation analysis method.

Key wordsHPLC method；fruits and vegetables；vitamin C；determination

维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它能

实验维八生B1片素含量定的方测法验证计性实验设药分析实物

实验验原理 维素生1又称B盐硫胺酸 (tiahimnehy rdcohlroide),化名学为称氯4化甲基--3[2-甲(基-4氨--5-嘧基基)啶基]甲5-(-2羟-基基噻唑鎓乙盐盐

酸3H NCN

H2N H2 C

C2CHH2OH N+C 3HCl-HlC

性质溶解 :水中性易，溶乙醇中微，溶乙醚不中溶硫色素反 :应 外吸紫特性收Amax:=24n6 m 生物与沉淀试碱反应剂 氯化物性特：氯化物查检特性鉴别征含量测定

原

理征特鉴别—性硫—素色应反生素维1B在碱中可被液氰化铁钾化氧成生色硫素色素转，溶于正丁(醇异丁醇、或异戊醇中),显于现酸中失的消蓝色荧。光(见文英主刘编《药物分》析第版，六P528) 量含定测1%生维素1B有外吸收紫，Ama=246xm,n E1c m4 21

实验方法

.1鉴反应别取品本约m5,加g氧化钠试液氢2.ml5使溶其，解加铁氰钾试化液.5m0l正与丁醇5l,强力m摇振min,2置放成两液层，使层上醇液显强烈的蓝色荧光，加酸使即酸成荧光性消失即，加再碱成碱使，则性荧光复现

2.。量测含定如计算出所需何的要？量精称取密粉适量，片当于相维生B素125mg,置10ml0瓶量中

实验维八生B1片素含量定的方测法验证计性实验设药分析实物

实验验原理 维素生1又称B盐硫胺酸 (tiahimnehy rdcohlroide),化名学为称氯4化甲基--3[2-甲(基-4氨--5-嘧基基)啶基]甲5-(-2羟-基基噻唑鎓乙盐盐

酸3H NCN

H2N H2 C

C2CHH2OH N+C 3HCl-HlC

性质溶解 :水中性易，溶乙醇中微，溶乙醚不中溶硫色素反 :应 外吸紫特性收Amax:=24n6 m 生物与沉淀试碱反应剂 氯化物性特：氯化物查检特性鉴别征含量测定

原

理征特鉴别—性硫—素色应反生素维1B在碱中可被液氰化铁钾化氧成生色硫素色素转，溶于正丁(醇异丁醇、或异戊醇中),显于现酸中失的消蓝色荧。光(见文英主刘编《药物分》析第版，六P528) 量含定测1%生维素1B有外吸收紫，Ama=246xm,n E1c m4 21

实验方法

.1鉴反应别取品本约m5,加g氧化钠试液氢2.ml5使溶其，解加铁氰钾试化液.5m0l正与丁醇5l,强力m摇振min,2置放成两液层，使层上醇液显强烈的蓝色荧光，加酸使即酸成荧光性消失即，加再碱成碱使，则性荧光复现

2.。量测含定如计算出所需何的要？量精称取密粉适量，片当于相维生B素125mg,置10ml0瓶量中

蜜枣中维生素C和蛋白质含量的测定

摘要：维生素C是人和动物为维持正常的生理功能而必需从食物中获得的一类微量有机物质，在人体生长、代谢、发育过程中发挥着重要的作用,蛋白质是生命的物质基础,没有蛋白质就没有生命。因此，它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的

【3】 每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。

本文用2，4-二硝基苯肼比色法测定的维生素C的含量。两种蜜枣维生素C含量的测定结果：麦加的蜜枣的维生素C含量15.53mg，伊拉克的蜜枣的维生素C含量16.42mg。用凯氏定氮法测定麦加，伊拉克的蛋白质的含量。两种蜜枣中蛋白质的总含量结果：麦加蜜枣的蛋白质含量0.32%，伊拉克蜜枣的蛋白质含量0.31%。

关键词：蜜枣，维生素C，分光光度法，蛋白质，凯氏定氮法。凯氏定氮法测定麦加，伊拉克的蛋白质的含量。两种蜜枣中蛋白质的总含量结果：麦加蜜枣的蛋白质含量0.32%，伊拉克蜜枣的蛋白质含量 0.31%。

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前言

蜜枣( 又称蜜丝枣) ：是青枣中最甜的品种，品质极佳， 8