生物选修一血红蛋白的提取和分离

课题3 血红蛋白的提取和分离

一、选择题

1、凝胶色谱分离法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用的共同点是 ( ) A、改变蛋白质分子通过凝胶时的路径

B、吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度 C、将酶或纽胞固定在凝胶中

D、与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度

2、下列各项中，一般不影响凝胶色谱法分离蛋白质中的分离度的是 ( ) A、层析柱高 B、层析柱的直径 C、缓冲溶液 D、样品的分布

3、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中决定蛋白质或多肽移动速度的主要因素是 ( ) A、蛋白质分子所带的电荷 B、蛋白质分子的形状

C、蛋白质分子的相对分子质量 D、缓冲溶液的pH

4、为了提取血红蛋白，从学校附近的屠宰场索取新鲜的猪血，对猪血处理的正确操作是 A、要在采血容器中预先加人抗凝血剂柠檬酸钠 B、取血回来后，马上进行高速长时问离心 C、将离心后的血细胞加入清水缓慢搅拌 D、重复洗涤直到上清液呈红色为止 5、下面说法不正确的是 ( )

A、在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变 B、缓冲溶液通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成 C、电泳是指带电粒

§5.3《血红蛋白的提取和分离》导学案

班级：高二（ ）班 姓名：

【学习目标】

1.概述凝胶色谱法、电泳法分离大分子的基本原理。 2.知道缓冲溶液的作用。

3.尝试对血液中血红蛋白进行提取和分离,体验从复杂体系中提取生物大分子的基础过程和方法。 4.掌握对样品的预处理、色谱柱制作及装填等操作,进行样品的加入和洗脱并最终分离出血红蛋白。

【自主学习】 一、基础知识

1.蛋白质的分离依据:

蛋白质特性的差异,如分子的形状和_____、所带_____的性质和多少、溶解度、_________和对其他分子的亲和力等。 2.凝胶色谱法:

(1)概念:也称做___________,是根据____________________分离蛋白质的有效方法。 (2)凝胶的特点形态: 微小的_________

组成:大多数由_____________构成 结构:内部有许多___________ (3)常用凝胶:_______和琼脂糖。 (4)分离原理。

①相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程_____,移动速度_____,通过凝胶的时间_____。

②相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶_____移动,路

双基限时练(十四) 血红蛋白的提取和分离

一、选择题

1．凝胶色谱法所用的凝胶的化学本质大多是()

A．糖类化合物B．脂质

C．蛋白质D．核酸

解析在用于蛋白质分离的凝胶色谱法中所用凝胶是一些微小的多孔球体，它们多是由多糖类化合物构成的。

答案 A

2．分离血红蛋白溶液时，离心后试管的溶液分四层，血红蛋白在第________层()

A．一B．二

C．三D．四

解析分离血红蛋白溶液时，离心后可明显观察到试管中液体分四层，从上向下数依次为：无色透明的甲苯层，白色薄层固体(脂溶性物质的沉淀层)、红色透明液体(血红蛋白水溶液)、暗红色沉淀物(其他杂质)，故血红蛋白分布于第三层。

答案 C

3．________的蛋白质能进入凝胶内部通道()

A．相对分子质量大的B．吸附性高的

C．相对分子质量小的D．溶解度低的

解析由多糖类化合物构成的凝胶是微小的多孔球体，球体内有许多贯穿的通道，相对分子质量较小的蛋白质易进入通道，路程较长，移动速度慢。

答案 C

4．下列试剂可用于血红蛋白释放的是()

①0.9%的生理盐水②甲苯③磷酸缓冲液④蒸馏水⑤柠檬酸钠

A．②④B．①④

C．④⑤D．①③

解析甲苯作用为溶解，脂类物质，也有利于红细胞破裂和血红蛋白的释放，蒸馏水作用是使红细胞吸水涨破。

答案

专题5课题3 血红蛋白的提取和分离

一、基础知识

（一）凝胶色谱法

1、凝胶色谱法也称做 ，是根据 分离蛋白质的有效方法。

2、凝胶实际上是一些微小的 球体，这些小球体大多数是由 构成的，如葡聚糖或琼脂糖。

3、在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ；而相对分子质量 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速度 。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。

（二）缓冲溶液

1、缓冲溶液的作用是 。 2、缓冲溶液通常由 溶解于水中配制而成的。

3、生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，为了 ，必须保持体外的pH与体内的 。

（三）电泳

1、

课题3 血红蛋白的提取和分离

1．尝试对血液中血红蛋白的提取和分离。

2．体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法。 3．了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的原理。

蛋白质的各种特性的差异如分子的______和______、所带________________、溶解度、________和对其他分子的亲和力，等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。

一、凝胶色谱法

1．概念：凝胶色谱法也称做__________，是根据____________的大小分离蛋白质的有效方法。

2．原理：大多数凝胶是由________化合物构成的小球体，内部有许多贯穿的通道，当不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量____的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程______，移动速度______；而相对分子质量______的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在________移动，路程______，移动速度______。相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。

3．凝胶材料：______性，______类化合物，如葡聚糖或________。 4．具体过程：

（1）________混合物上柱。（2）洗脱开始，______________的蛋白质______进入凝胶颗粒内；相对

2016年安徽自主招生生物模拟题:血红蛋白的提取和分离

【试题内容来自于相关网站和学校提供】

题目1：在Watson-Crick的DNA双螺旋结构模型（B型）中，A∶T碱基对和G∶C碱基对共有的性质是：

? A.每一对碱基对中的两个糖苷键的距离相同

? B.两个碱基对的相对分子质量相等

? C.碱基之间的氢键的数目相同

? D.两个碱基对之间的堆积力相同

题目2：下图为花药中未成熟花粉在适宜的培养基上培养产生完整植株的过程。下列有关叙述不正确的是

? A.过程①需要使用植物激素来控制，称为“再分化”

? B.培养基的激素种类及浓度配比决定了②或③过程

? C.培养过程需要适宜的pH、温度、光照等条件

? D.培育出的完整植株被称为单倍体植株

题目3：交警检查司机是否酒后驾车时，所用的仪器中装有

? A.重铬酸钾

? B.MnO2

? C.斐林试剂

? D.BaCl2

题目4：将少量的酵母提取液加入到足量的葡萄汁中进行果酒制作，15 ℃条件下密封保温一段时间之后，检测到反应体系含有少量的酒精。如对上述实验的某个因子进行改动，实验的结果也会发生相应的变化。以下分析正确的是

? A.增加酵母提取液量，则产生相同酒精所需的时间缩短

?

糖化血红蛋白

糖化血红蛋白（GHb）是血液葡萄糖通过非酶作用，经细胞膜与红细胞内血红蛋白-链颉氨酸结合形成的产物，其合成速率与红细胞所处环境中糖的浓度成正比。糖化血红蛋白的形成是不可逆的，其浓度与红细胞寿命（平均120天）和该时期内血糖的平均浓度有关，不受每天血浆葡萄糖浓度大小波动而变化，也不受运动或食物的影响，因此糖化血红蛋白是反映过去6~8周的平均血糖浓度，这可为评估血糖的控制情况提供可靠的实验室指标。通常所说的HbAlc为Hb的色谱分离中的一个成分，并非为一个特指物质，只有与葡萄糖相结合的Hb才被称为Glyco-sylatedHemoglobin（GHb），而现在临床上把HbAlc和GHb常视为同义词。

中文名 本 质

糖化血红蛋白

血红蛋白与血糖结合的产物

反应类型 不可逆反应

英文代号 HbA1c 领 域 反 应

生物学

患者近8～12周的血糖控制情况

目 录

?

1基本简介 2研究历史 3基本内容 4区别血糖 5检测方法 6操作过程 7监测意义 8控制标准 9结果解释 10注意事项 11临床意义 12标准检测 1基本简介 编辑

人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物是糖化血红蛋白，血糖和血红蛋白的结合生

糖化血红蛋白检测的SOP

预期用途

适用于体外定量检测人手指末梢血、静脉全血样本中的糖化血红蛋白的浓度。 检验原理

糖化血红蛋白检测试剂盒是硼酸亲和色谱层析法。试剂盒由层析器、R1试剂、R2试剂组成。R1试剂包括专门裂解红细胞和沉淀血红蛋白及一种结合糖化血红蛋白的蓝色硼酸共轭物。当血液加至R1试剂中时，红细胞裂解，并且所有的血红蛋白沉淀，硼酸共轭物与糖化血红蛋白的顺式二醇配合物相结合。

一定量的反应混合物加入到层析器，所有沉淀的血红蛋白与糖化血红蛋白结合或未结合的硼酸共轭物残留到层析器膜上。任何未结合的硼化物通过R2试剂移除。该沉淀通过使用分析仪分别检测蓝色（糖化血红蛋白）和红色（总血红蛋白）的颜色强度进行定量分析，从而测定血液样本中糖化血红蛋白的百分比。 样本要求：

加了抗凝剂（EDTA、肝素、柠檬酸钠）的样本可在2-8℃保存7天，不能用血红蛋白裂解的样本。不能冻融。 没有添加抗凝剂的手指末梢血和静脉全血样本采样后要立即检测。

检验方法

在检测之前所有的检测试剂应平衡至室温。分析仪内置定标曲线，测试前不需要定标。

A采集5ul的全血样本至R1试管中，混合均匀，至少反应2分钟，最多不能超过3分钟。

B待全血样本与R1反应完毕后，再次摇晃该试管

糖化血红蛋白检测的SOP

预期用途

适用于体外定量检测人手指末梢血、静脉全血样本中的糖化血红蛋白的浓度。 检验原理

糖化血红蛋白检测试剂盒是硼酸亲和色谱层析法。试剂盒由层析器、R1试剂、R2试剂组成。R1试剂包括专门裂解红细胞和沉淀血红蛋白及一种结合糖化血红蛋白的蓝色硼酸共轭物。当血液加至R1试剂中时，红细胞裂解，并且所有的血红蛋白沉淀，硼酸共轭物与糖化血红蛋白的顺式二醇配合物相结合。

一定量的反应混合物加入到层析器，所有沉淀的血红蛋白与糖化血红蛋白结合或未结合的硼酸共轭物残留到层析器膜上。任何未结合的硼化物通过R2试剂移除。该沉淀通过使用分析仪分别检测蓝色（糖化血红蛋白）和红色（总血红蛋白）的颜色强度进行定量分析，从而测定血液样本中糖化血红蛋白的百分比。 样本要求：

加了抗凝剂（EDTA、肝素、柠檬酸钠）的样本可在2-8℃保存7天，不能用血红蛋白裂解的样本。不能冻融。 没有添加抗凝剂的手指末梢血和静脉全血样本采样后要立即检测。

检验方法

在检测之前所有的检测试剂应平衡至室温。分析仪内置定标曲线，测试前不需要定标。

A采集5ul的全血样本至R1试管中，混合均匀，至少反应2分钟，最多不能超过3分钟。

B待全血样本与R1反应完毕后，再次摇晃该试管

　　一、红细胞和血红蛋白的检验

　　红细胞的生成起源于从造血干细胞分化来的红系祖细胞(BFU-E和CFU-E)，在红细胞生成素(erythropoietin，EPO)的作用下，继续增殖和分化为形态学上可辨认的骨髓原红细胞，并启动红细胞内血红蛋白和血型抗原的合成。 红细胞的主要生理功能是作为呼吸载体从肺部携带氧输送至全身各组织，并将组织中的二氧化碳运送到肺而呼出体外。

　　红细胞的平均生存时间约为120天，因此成人体内每天约有1/120的红细胞因衰老而被破坏，同时又有相应数量的红细胞和血红蛋白生成以维持动态平衡，使循环血液中的红细胞和血红蛋白数量能保持相对恒定。

　　【参考值】

　　红细胞数 血红蛋白

　　成年男性(4.0～5.5)×1012/ L 120～160g/L

　　成年女性(3.5～5.0)× 1012/L 110～150g/L

　　新生儿(6.0～7.0)× 1012/L 170～200g/L

　　【临床意义】

　　(-)红细胞及血红蛋白增多 是指单位容积血液中红细胞数及血红蛋白量高于参考值高限。一般经多次检查成年男性红细胞>6.0×1012/L，血红蛋白>170g/L;成年女性红细