植物磷含量的测定方法

植物样全磷测定—钼锑抗比色法

1、 方法原理

植物中的磷以有机态为主，用H2SO4-H2O2氧化剂消煮植物样品时，其中的有机物经脱水碳化、氧化分解，变成CO2和H2O,使磷素转化为磷酸盐，然后用钼锑抗比色法测定。 2、 仪器设备

（1） 分光光度计 （2） 消煮管

（3） 半微量定氮蒸馏器 （4） 半微量滴定管 3、 试剂

（1） H2O2[30%,分析纯] （2） 浓硫酸[1.84g/cm3]

（3） 钼锑贮存溶液：浓硫酸153mL缓慢倒入约400mL蒸馏水中，同时搅拌。放置

冷却。另称10g钼酸铵溶于60摄氏度的300mL蒸馏水中，冷却。将配好的硫酸溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中，同时搅拌。随后加入酒石酸锑钾（5g/L）100mL。避光贮存。

（4） 钼锑抗显色剂：1.50g抗坏血酸加入到100mL钼锑贮存液中。随配随用，有

效期一天。

（5） 二硝基酚指示剂：0.2g二硝基酚溶于100mL水中

（6） 磷标准贮存溶液：0.4390g磷酸二氢钾（105摄氏度烘干2h）溶于200mL蒸

馏水中，加入5mL浓硫酸，转入1L容量瓶中定容。此为磷标准贮存液（100mg/L）,可以长期贮存。

（7） 磷标准液：取磷标准贮存液准确稀释20倍，即磷标准溶液（5m

土壤中磷含量的测定（比色法）

一、现阶段测定土壤中磷含量主要方法有如下几种： （一）中性和石灰性土壤速效磷的测定 (0.5mol/L NaHCO3法)

石灰性土壤由于大量游离碳酸钙存在，不能用酸溶液来提取有效磷。一般用碳酸盐的碱溶液。由于碳酸根的同离子效应，碳酸盐的碱溶液降低碳酸钙的溶解度，也就降低了溶液中钙的浓度，这样就有利于磷酸钙盐的提取。同时由于碳酸盐的碱溶液，也降低了铝和铁离子的活性，有利于磷酸铝和磷酸铁的提取。此外，碳酸氢钠碱溶液中存在着OH-、HCO3-、 CO32-等阴离子，有利于吸附态磷的置换，因此NaHCO3不仅适用石灰性土壤，也适应于中性和酸性土壤中速效磷的提取。待测液中的磷用钼锑抗试剂显色，进行比色测定。 （二）酸性土壤速效磷的测定方法A(0.03mol/L NH4F-0.025mol/L HCl法) NH4F--HCI法主要提取酸溶性磷和吸附磷，包括大部分磷酸钙和一部分磷酸铝和磷酸铁。因为在酸性溶液中氟离子能与三价铝离子和铁离子形成络合物，促使磷酸铝和磷酸铁的溶解：

3NH4F+3HF+AlPO4一H3PO4+(NH4)3AlF6 3NH4F+3HF+FePO4一H3

土壤中磷含量的测定（比色法）

一、现阶段测定土壤中磷含量主要方法有如下几种：

（一）中性和石灰性土壤速效磷的测定 (0.5mol/L NaHCO3法)

石灰性土壤由于大量游离碳酸钙存在，不能用酸溶液来提取有效磷。一般用碳酸盐的碱溶液。由于碳酸根的同离子效应，碳酸盐的碱溶液降低碳酸钙的溶解度，也就降低了溶液中钙的浓度，这样就有利于磷酸钙盐的提取。同时由于碳酸盐的碱溶液，也降低了铝和铁离子的活性，有利于磷酸铝和磷酸铁的提取。此外，碳酸氢钠碱溶液中存在着OH-、HCO3-、 CO32-等阴离子，有利于吸附态磷的置换，因此NaHCO3不仅适用石灰性土壤，也适应于中性和酸性土壤中速效磷的提取。待测液中的磷用钼锑抗试剂显色，进行比色测定。

（二）酸性土壤速效磷的测定方法A(0.03mol/L NH4F-0.025mol/L HCl法)

NH4F--HCI法主要提取酸溶性磷和吸附磷，包括大部分磷酸钙和一部分磷酸铝和磷酸铁。因为在酸性溶液中氟离子能与三价铝离子和铁离子形成络合物，促使磷酸铝和磷酸铁的溶解： 3NH4F+3HF+AlPO4一H3PO4+(NH4)3AlF6 3NH4F+3HF+FePO4一H3

有效磷的测定方法

方法1、钼锑抗比色法

解磷菌发酵菌液（用什么培养基？？）经离心处理后，取上清液，用2，4．二硝基酚作为指示剂加入1．2滴，上清液中可溶性磷酸盐可与钼锑抗显色剂反应，生成磷钼蓝，于适宜波长处进行比色测定，根据标准曲线计算出有效磷的含量，通过有效磷的浓度大小表示微生物溶磷能力的高低。

1、实验所用溶液

(1)钼锑抗贮存液的制备

首先量取硫酸153ml(p=约1.84g/ml)缓缓地倾入约400ml蒸馏水中，搅拌、冷却。然后称取lO.0g钼酸铵溶于约60℃的300m1水中，冷却。然后将上述硫酸溶液缓缓加入此钼酸铵溶液中，再加入5g/L酒石酸锑钾溶液100ml，最后用水稀释至l L，盛于棕色瓶中，放于阴暗处保存。 (2)钼锑抗显色剂

准确称量抗坏血酸1.5g，溶于lOOml钼锑抗贮存液中。此溶液必须现配现用，有效期为1d. (3)磷标准溶液(5 mg/L)

准备称取0.439g磷酸二氢钾在105℃烘箱中烘干2 h后冷却，溶于200 ml水中，加人5 m1硫酸(p约1．84g/ml)，转入l L容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度线，即为磷标准液100mg/L。 取此溶液准确稀释20倍即为5 mg/L磷标准溶液，此溶液不宜久放。 2、工作曲线

植物组织MDA含量测定

一、目的要求

1．掌握植物组织MDA含量测定的原理及具体测量步骤；

2．深化理解MDA与逆境和衰老的关系，理解植物组织MDA含量测定的意义； 3．了解膜脂过氧化、氧自由基和MDA形成的关系；

4．能够根据待测材料的具体情况设计实验步骤测定MDA含量； 5．学习分光光度计，低温离心机等仪器的使用方法。

二、实验原理

植物遭受逆境胁迫或衰老时，体内会发生一系列生理生化变化，如核酸和蛋白质含量下降、叶绿素降解、光合作用降低，活性氧平衡失调及内源激素平衡失调等。活性氧代谢失调直接导致植物体内活性氧的大量积累，从而引发或加剧膜脂过氧化作用，造成细胞膜系统的损伤，严重时会导致植物细胞死亡。

膜脂过氧化的产物有二烯轭合物、脂类过氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛（Malondialdehyde，MDA）是膜脂过氧化最重要的产物之一，它的产生还能加剧膜的损伤。因此在植物衰老生理和抗性生理研究中，MDA含量是一个常用指标，可通过测定MDA了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。

MDA在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（TBA）反应，产生红棕色的产物3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮（Trimet—nine）

植物中抗坏血酸含量测定

学 校 院 系 专 业 姓 名 学 号 指导教师

吉首大学 生物资源与环境科学学院 生物工程 向丰标 20144074032 李朝阳

植物中抗坏血酸含量测定

摘要：维生素C又称为抗坏血酸，一般水果,蔬菜中维生素C的含量均较高，不同的水果，蔬菜品种，以及同一种在不同栽培条件，不同成熟等情况下，其维生素C的含量都有所不同。维生素C的含量可以作为果蔬品质的衡量指标之一。而且高温会破坏维生素C的活性，会使维生素C丧失一部分。维生素C是人体不可缺少的物质，每天人体从外界摄取的维生素C的量为50~100毫克，如果人体长期缺少维生素C的补充，将引起坏血症。维生素C对人体的抵抗力、免疫力的功效都有相当重要的作用。 关键词：维生素C 维生素C含量 坏血病 高温

引言

维生素C又称抗坏血酸，一般水果、蔬菜中维生素C的含量均较高，不同的水果、蔬菜品种，以及同种在不同条件、不同成熟度等情况下，其维生素C的含量都有所不同。因此，维生素C的含量

土壤全磷测定方法HClO4—H2SO4法

待测液制备：

1. 准确称取通过100目筛子的风干土样0.2500—0.500g，置于50ml凯

式瓶（或者50ml消化管）中

2. 以少量水湿润后，加入浓硫酸4ml,摇匀后，再加70-72%高氯酸1ml,

摇匀，瓶口上加一个小漏斗，通风厨静置24小时

3.

4. 置于消化炉中进行3小时消煮，待溶液澄清透明即可。 将冷却后的消化液转移入100ml容量瓶中（容量瓶中预先盛水

20-30ml），按少量多次的原则用水冲洗消化管，轻轻摇动容量瓶，待完全冷却后，加水定容，静置过夜

5.

6. 次日小心吸取上层澄清液进行磷的测定。 样品空白溶液制备：在样品分解的同时做一个空白实验，即不加土样

而加同样量的浓硫酸和高氯酸，与样品进行相同处理

土壤速效磷测定方法M3浸提法

M3溶液配置(1L)：

乙酸：11.5 ml

浓硝酸：0.82 ml

硝酸铵：20 g

氟化铵：0.5556g

EDTA：0.2922g

基本步骤：

1. 称取3g过2mm筛子风干土样于50ml聚已烯离心管中

2. 加入30mlM3浸提液，置于振荡机中振荡5min，振荡速度为200转，温度25℃

3. 置于离心机中离心，离心速度为8000转/min,温度为25℃，如溶液颜色很深，在离心前加入

果胶的测定（方案一）：

黄晓钰，刘邻渭等．食品化学综合实验[M]．中国农业大学出版社. 2002．158~159

实验原理：果胶经水解，其产物——半乳糖醛酸可在强酸环境中与咔唑试剂产生缩合反应，

生成紫红色化合物，其呈色深浅与半乳糖醛酸含量成正比，由此可进行比色定量测定果胶。 实验试剂：1.化学纯无水乙醇或95%乙醇。

2.精制乙醇：取无水乙醇或95%乙醇1000ml，加入锌粉4g，硫酸（1:1）4ml，

至于衡温水浴中回流10h，用全玻璃仪器蒸馏，馏出液每1000ml加锌粉和氢氧化钾各4g，并进行蒸馏。

3. 0.15%咔唑乙醇溶液：称取咔唑0.150 g，溶于精制乙醇并定容至100ml。 4.半乳糖醛酸标准溶液：先用水配置成浓度1 g/L的溶液，再配制成浓度分别为

（0、10mg/L、20 mg/L、30 mg/L、40 mg/L、50 mg/L、60 mg/L、70mg/L）的

系列半乳糖醛酸标准溶液。

5.优级纯浓硫酸。

操作方法：1样品处理： 总果胶提取：（鲜样）研磨新鲜样品50g，放入1000ml烧杯中，加入0.05mol/L

HC

时珍国医国药２００７年第１８卷第８期

ＩＪＩｓＨＩｚＨＥＮＭＥＤＩｃｌＮＥＡＮＤ

ＭＡＴＥＲｎＭＥＤＩｃＡＲＥＳＥＡＲｃＨ２０ｃｒ７ＶｏＬ．１８

Ｎｏ．８‘

多糖含量测定方法比较

钟方晓１，任海华２，李岩１

（１．山东省中医药研究院，山东济南２５００１４；２．山东省肿瘤医院，山东济南２５０１１７）

摘要：目的探讨中药多糖含量测定方法酶可行性及稳定性。方法对测定多糖常用对照品葡萄糖、鼠李糖、半乳糖，参

考文献方法，分别采用硫酸一苯酚法、硫酸一蒽酮法比较显色反应后吸收曲线的稳定性。结果不同单糖对照品显色反

应后最大吸收波长不同，其中硫酸一苯酚法显色反应后稳定性较好，硫酸一蒽酮法稳定性较差。结论硫酸一苯酚法为

较理想的多糖含量测定方法。

关键词：多糖；硫酸一苯酚法；硫酸一蒽酮法．中图分类号：Ｒ２８４．２

文献标识码：Ａ

文章编号：１００８电８０５（２００７）０８－１９１６旬１

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还原糖含量测定方法的研究

含有游离醛基或酮基的糖称为还原糖。所有的单糖（除二羟丙酮），不论醛糖、酮糖都是还原糖。大部分双糖也是还原糖，蔗糖例外。可根据游离醛基或酮基的还原性来测定其含量。 1 测定方法 1.1 高锰酸钾法 1.1.1 原理

还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，在酸性条件下，硫酸铁将氧化亚铜氧化为铜盐，并使硫酸铁还原为硫酸亚铁，最后用高锰酸钾标准溶液滴定硫酸亚铁，根据高锰酸钾的消耗量计算氧化亚铜的含量，再查表得还原糖含量〔1〕。 1.1.2方法

吸取50ml处理后的样品溶液，于400ml烧杯中，加入25ml碱性酒石酸铜甲液及25ml乙液，于烧杯上盖一表面皿，加热，控制在4min内沸腾，再准确煮沸2min，乘热用铺好石棉的古式坩埚或G4垂融坩埚抽虑，并用60℃热水洗涤烧杯及沉淀，至洗液不成碱性为止。（注：还原糖与碱性酒石酸铜试剂的反应一定要在沸腾状态下进行，沸腾时间需严格控制。煮沸的溶液应保持蓝色，如蓝色消失，说明还原糖含量过高，应将样品溶液稀释后重做。）将古式坩埚或垂融坩埚放回原400ml烧杯中，加25ml硫酸铁溶液及25ml水，用玻棒搅拌使氧化亚铜完全溶解，以0.1mol/L高锰酸钾标准液滴定至微红色为终点。同时吸取50m