elisa实验操作细节

ELISA的操作要点

优质的试剂，良好的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。 1. 加样

在ELISA检测中一般有3次加样，即加样本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。

加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定（如间接法ELISA）需用稀释的抗体，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。

2 .温育

在ELISA检测中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育(incubation)，有人称之为孵育，在ELISA中似不恰当。 ELISA属固相免疫测定，抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例，加入板孔中的标本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会，只有最贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗

COD测定细节注意事项

一、COD先期测定需要了解水样含量的步骤

1、 如果客户水样COD不超过1000mg/L,可以直接取2.5毫升，直接按照说明书的操作步

骤测定

例如：客户原水样5000mg/L，处理后不超过1000mg/L，可以直接操作（前提是要水样相对澄清，无悬浮物、泥土、渣滓等杂质，如果有这些可以静置一会，取中间悬清液）。 2、 如果客户水样COD超过1000mg/L，需要先稀释后，再按步骤操作实验。

例如：客户原水COD浓度比较高，为8000mg/L，需要先稀释10倍，取10毫升定容在100毫升的容量瓶中。然后测定稀释后的污水样，出来的结果乘稀释的倍数10。就是原水COD浓度。

3、 如果客户水样中COD超过1000mg/L，氯离子含量也大于1000mg/L，首先要保证氯离

子含量需要稀释到1000mg/L以下，进行操作实验。

例如：客户水样氯离子含量3000mg/L，COD含量COD含量1500mg/L。就需要稀释4倍或者5倍，氯离子对应的是750mg/L或600mg/L，进行操作。而不是稀释COD浓度2倍到750mg/L，而氯离子含量1500mg/L，测定结果中会浑浊，水样报废，稀释倍数不合适。

4、 如果客户水样COD不超过1

E L I S A试剂配制及实验流程

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定(( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。以双抗体夹心法举例说明。

试剂配制：

(1) 包被缓冲液 + 碳酸盐缓冲液)：

Na

2CO

3

NaHCO

3

加蒸馏水至1000ml。（用时稀释成1x，加%BSA）(2) 洗涤缓冲液 0.15M PBST)：

%Tween-20

加在PBS缓冲液1000ml中。

PBS缓冲液：

KH

2PO

4

0.27g

Na

2HPO

4

·12H

2

O 3.58g

NaCl 8g

KCl

加蒸馏水至1000ml。

(3) 封闭缓冲液：

牛血清白蛋白(BSA) 2% 2g

（或5%脱脂奶粉）加洗涤缓冲液100ml。

(4) 稀释液：

牛血清白蛋白 %

加PBS 缓冲液100ml。

(5) 底物缓冲液：

Na

2HPO

4

(无水L，带12结晶水L) 取

柠檬酸(无水L，带1结晶水L) 取加蒸馏水至100ml。

(或Na

2HPO

4

·12H

2

O 1.84g

柠檬酸·H

2

O 0.51g

加蒸馏水至100ml)

(6) TMB(四甲基联苯胺)显色液（显蓝色）：HRP-

TMB(2mg/ml水)

底物缓冲液

30% H

2O 2

ELISA-STAR酶免之星用户手册

ELISA-STAR 酶免之星用户手册

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ELISA-STAR酶免之星用户手册

目 录

一 仪器功能与构成 二 运行前准备 三 运行实验 四 结果判读 五 方法编辑

－液体管理 －洗板程序 －实验方法 －作业管理 六 仪器维护 七 错误处理 八 技术指标

.……………………………………………….2 .……………………………………………….7 .……………………………………………….8 ……………………………………………….15 ……………………………………………….17 ……………………………………………….17 ……………………………………………….21 ……………………………………………….22 ……………………………………………….29 ……………………………………………….34 ……………………………………………….35 ……………………………………………….46

1

ELISA-STAR酶免之星用户手册

一 仪器功能与构成

ELISA-STAR（酶免

ELISA基础知识

ELISA原理与分类 1. ELISA的原理

ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。

2. ELISA的类型

ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂：（1）固相的抗菌素原或抗体，即\免疫吸附剂\（immunosorbent）；（2）酶标记的抗原或抗体，称为\结合物\（conjugate）；（3）酶反应的底物。根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。用于临床检验的ELISA主要有以下几

血液学检验

血小板相关抗体的检验 PAIgA、PAIgG、PAIgM D-二聚体的测定 D-Dimer

血清纤维蛋白降解产物的测定 FDP

三碘甲腺原氨酸、四碘甲腺原氨酸测定 T3、T4 免疫学检验

C反应蛋白的测定 CRP 免疫球蛋白的测定 IgD、IgE 循环免疫复合物的测定 CIC

类风湿因子的测定 IgG、IgA、IgM类RF

抗甲状腺球蛋白抗体、微粒体抗体的测定 TG、TM 肿癌免疫学检测 甲胎蛋白的测定 AFP 癌胚抗原的测定 CEA

前列腺特异抗原的测定 PSA

胰癌、胆道癌、胃癌的测定 CA19-9 卵巢癌的测定 CA125 乳腺癌的测定 CA15-3 宫颈鳞癌的测定 SCC 多发性骨髓癌的测定 甲状腺癌的测定 hTG

传染病免疫学检验

甲肝血清学的检测 抗HAV-IgM 乙肝血清学的检测 两对半

丙肝血清学的检测 抗HAV-IgG、抗HCV-IgM 丁肝血清学的检测 抗HDV-IgG、抗HDV-IgM 戊肝血清学的检测 抗HEV-IgG

肾综合征出血热类抗体的检测 HFRS-IgG 乙型脑炎病毒抗体的检测 IgM

人类免疫缺

血液学检验

血小板相关抗体的检验 PAIgA、PAIgG、PAIgM D-二聚体的测定 D-Dimer

血清纤维蛋白降解产物的测定 FDP

三碘甲腺原氨酸、四碘甲腺原氨酸测定 T3、T4 免疫学检验

C反应蛋白的测定 CRP 免疫球蛋白的测定 IgD、IgE 循环免疫复合物的测定 CIC

类风湿因子的测定 IgG、IgA、IgM类RF

抗甲状腺球蛋白抗体、微粒体抗体的测定 TG、TM 肿癌免疫学检测 甲胎蛋白的测定 AFP 癌胚抗原的测定 CEA

前列腺特异抗原的测定 PSA

胰癌、胆道癌、胃癌的测定 CA19-9 卵巢癌的测定 CA125 乳腺癌的测定 CA15-3 宫颈鳞癌的测定 SCC 多发性骨髓癌的测定 甲状腺癌的测定 hTG

传染病免疫学检验

甲肝血清学的检测 抗HAV-IgM 乙肝血清学的检测 两对半

丙肝血清学的检测 抗HAV-IgG、抗HCV-IgM 丁肝血清学的检测 抗HDV-IgG、抗HDV-IgM 戊肝血清学的检测 抗HEV-IgG

肾综合征出血热类抗体的检测 HFRS-IgG 乙型脑炎病毒抗体的检测 IgM

人类免疫缺

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销售细节：细节决定成败----细节打败销售人员

——作者：尚丰

“未雨绸缪”见细节

细节决定成败。销售人员，别让细节打败了你。

在销售人员当中，曾经流传着一个这样的笑话：有一位销售人员，在拜访客户后，长长地出了一口气，走出了客户的公司。不久又慌张地跑回客户那里，面红耳赤、结结巴巴地对客户说：“实在不好意思，我今天出来忘带钱包了，能不能借给我点回家的路费？”这样笨的销售人员也许只存在于笑话当中，但是类似粗心的情况却并不罕见。许多销售人员就是因为在拜访客户时没有做好充足的准备，结果导致功亏一篑。

我以前的一位同事，有一次去一家大公司销售笔记本电脑，在给客户做演示的时候，不知道怎么回事，电脑竟然打不开了，无论用什么办法都启动不了。这位同事忙活得满头大汗，用尽了各种办法，结果客户在一旁幸灾乐祸地看着，可电脑就是不配合，一点反应都没有。怎么回事呀？经过仔细检查，原来是电脑的电池没电了，而

间接ELISA检测抗血清效价

姓名：王贤臣 学号：1125400080 （成都医学院 医学检验 成都610500）

【摘要】目的：通过实验掌握间接酶联免疫吸附测定技术（ELISA）的原理及

操作过程及间接ELISA检测抗血清效价的实验条件优化及效价的确定。方法：间接ELISA双抗体夹心法对包被抗原及酶标抗体工作浓度进行探索。结果：经过预实验初步确定抗人白蛋白血清包被浓度和一二抗的浓度，然后在正式实验确定其浓度，从而再进行研究。讨论：间接ELISA检测抗血清效价的影响因素。并将预实验方法的结果与确定实验的结果进行对比，和分析在实验过程中的注意事项。

【关键词】抗人白蛋白ABL ELISA

前言：1971年Engvall和Perlmann 发表了酶联免疫吸附测定用于IgG 定量测 定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展为体液标本中微量物质的测定方法。之一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持器免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原后抗体即保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不

实验四 编程模拟处理机调度（实现一种算法）

一、实验内容

选择一个调度算法，实现处理器调度。 二、实验目的

在采用多道程序设计的系统中，往往有若干个进程同时处于就绪状态。当就绪进程个数大于处理器数时，就必须依照某种策略来决定哪些进程优先占用处理器。本实习模拟在单处理器情况下的处理器调度，帮助学生加深了解处理器调度的工作。

三、实验题目

设计一个按优先数调度算法实现处理器调度的程序。 [提示]：

(1) 假定系统有五个进程，每一个进程用一个进程控制块PCB来代表，进程控制块的格式为：

进程名 指针 要求运行时间 优先数 状态 其中，进程名——作为进程的标识，假设五个进程的进程名分别为P1，P2，P3，P4，P5。

指针——按优先数的大小把五个进程连成队列，用指针指出下一个进程的进程控制块的首地址，最后一个进程中的指针为“0”。

要求运行时间——假设进程需要运行的单位时间数。

优先数——赋予进程的优先数，调度时总是选取优先数大的进程先执行。 状态——可假设有两种状态，“就绪”状态和“结束”状态。五个进程的初始状态都为“就绪”，用“R”表示，当一个进程运行结束后，它的状态为“结束”，用“E”表示。

(2) 在每次运行你所设计的处理器调度程序之前，