微生物检测培养基配制

微生物检测培养基及试剂原理

1.细菌与培养有关的生理结构。 1.1

细胞壁（cell wall）

主要成分：肽聚糖

革兰氏阳性菌（G+）:细胞壁有15-50层肽聚糖，厚20-80nm，组成三维立体框架，结构坚固致密。革兰氏染色紫色。

革兰氏阴性菌（G-）:细胞壁有1-2层肽聚糖，厚10-15nm，不能形成三维结构。但在肽聚糖之外，有G-特有的结构-外膜。革兰氏染色红色。

1.2 细胞膜（cell membrance）

细胞膜位于细胞壁内侧，紧包住细胞质，结构为平行的磷脂双分子层，其中镶嵌有多重蛋白质，大多为酶类和载体蛋白。 功能：物质转运 呼吸 分泌 生物合成

胞质周围间隙：G-菌的细胞膜与细胞壁之间的空间。此处聚集了若干种胞外酶，主要是水解酶。

1.3 细胞质（cytoplasm）

细胞质的主要成分是水、蛋白质、核酸、糖、无机盐等。细胞质含有多种酶系统，是细菌合成蛋白质和RNA的场所。细菌的分解代谢和合成代谢都在胞质中进行。

1.4 核蛋白体

核蛋白体是细菌合成蛋白质的场所。链霉素能与细菌核蛋白体的30s亚基结合；红霉素能与50s亚基结合，干扰细菌的蛋白质合成，从而杀灭细菌。

2. 细菌的物理性状

细菌虽小，也有独立的生命活动。能从外界环境

孟加拉红培养基

用途:用于食品中霉菌和酵母菌总数的测定。 成分(g/L) 蛋白胨 5.0 葡萄糖 10.0 磷酸二氢钾 1.0 硫酸镁 0.5 琼脂 20.0 孟加拉红 0.033 氯霉素 0.1 用法

称取本品 36.6g,加热溶解于 1000ml 纯化水中,分装三角瓶,121℃高压灭菌 15 分钟备用。

蒙金娜基础培养基：葡萄糖10g，(NH4)2SO4 0.5g，NaCl 3g, KCl 0.3g，FeSO4 7H2O 0.03g，MnSO4 H2O 0.03g，MgSO4 7H2O 0.3g，CaCO3 5g，酵母膏 0.4g，蒸馏水1000ml，pH7.0~7.5。灭菌前分装为10×100ml小瓶，每组1瓶。 1. 无机磷培养基

100ml的蒙金娜基础培养基加入1g磷矿粉（或磷酸钙2g作为无机磷源）和2g琼脂粉，包装，灭菌。 2. 有机磷培养基

100ml的蒙金娜基础培养基加入2g琼脂粉，包装，灭菌。 用酒精擦净新鲜鸡蛋外壳，用解剖刀切破鸡蛋两端，流去蛋清后将蛋黄流

孟加拉红培养基

用途:用于食品中霉菌和酵母菌总数的测定。 成分(g/L) 蛋白胨 5.0 葡萄糖 10.0 磷酸二氢钾 1.0 硫酸镁 0.5 琼脂 20.0 孟加拉红 0.033 氯霉素 0.1 用法

称取本品 36.6g,加热溶解于 1000ml 纯化水中,分装三角瓶,121℃高压灭菌 15 分钟备用。

蒙金娜基础培养基：葡萄糖10g，(NH4)2SO4 0.5g，NaCl 3g, KCl 0.3g，FeSO4 7H2O 0.03g，MnSO4 H2O 0.03g，MgSO4 7H2O 0.3g，CaCO3 5g，酵母膏 0.4g，蒸馏水1000ml，pH7.0~7.5。灭菌前分装为10×100ml小瓶，每组1瓶。 1. 无机磷培养基

100ml的蒙金娜基础培养基加入1g磷矿粉（或磷酸钙2g作为无机磷源）和2g琼脂粉，包装，灭菌。 2. 有机磷培养基

100ml的蒙金娜基础培养基加入2g琼脂粉，包装，灭菌。 用酒精擦净新鲜鸡蛋外壳，用解剖刀切破鸡蛋两端，流去蛋清后将蛋黄流

（一）材料与试剂 1．原始菌种采集：

用特制不锈钢内衬有机硅薄膜的箱式釆样器采集小清河五柳闸片区的底泥，根据不同的应用采取不同的保存方法。 2．培养基【4】:

（1）牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌、芽孢杆菌用）：

成分：牛肉膏3g，蛋白胨10g ，NaCl 5g ，琼脂15g ， 蒸馏水1000ml，

pH 7.2

制法：称取蛋白胨和NaCl，加入水中，用玻璃棒挑取牛肉膏置于另一烧杯

中称量，加热融化然后加入上述烧杯中。加入所需琼脂加热融化，定容，最后调节至所需pH。121摄氏度灭菌20分钟。

（2）脑心浸液培养基（1000ml）（北京路桥技术有限责任公司，用于链球菌、

肺炎球菌、脑膜炎球菌及其它对营养苛求菌的培养）

成分：脑心浸液培养基37g （蛋白胨10g， 牛脑浸粉 12.5g， 葡萄糖2g，

牛心浸粉5g，氯化钠 5g， 磷酸氢二钠 2.5g） 琼脂粉20g 最后定容到1000ml, 121℃灭菌20分钟。

（3）硝化细菌培养基（培养硝化细菌）

成分：亚硝酸钠1g 磷酸氢二钾0.75g 磷酸二氢钠0.25g 碳酸钠

1g 硫酸镁0.03g 硫酸锰0.01g 加蒸馏水1000ml,121℃灭菌20分钟。

微生物培养基及其成分介绍

培养基通常指人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养物质。广义上说，凡是支持微生物生长和繁殖的介质或材料均可以作为微生物的培养基。培养基的种类繁多，因考虑的角度不同，可将培养基分成以下一些类型：

天然培养基：利用生物组织、器官及其抽取物或制品配成；根据对培养基成分了解的程度

合成培养基：使用成分完全了解的化学药品配制而成；

半合成培养基：由部分天然材料和部分已知的纯化学药品组成

液体培养基：各营养成分按一定比例配制而成的水溶液或液体状态的培养基；

根据培养基物理状态

固体培养基：液体培养基中加入一定量的凝固剂配制而成的固体状态的培养基；

半固体培养基：琼脂加入量为0.2%-0.5%而配制的固体状态的培养基；

种子培养基：适合微生物菌体生长的培养基；

培养基 根据培养的目的

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培养基管理规程

1 目的

规范微生物实验室培养基的申购、配制、培养基质量控制、储存、使用、废弃处理等。 2 依据

《药品质量管理规范》、《中国药典》2015年版 四部。 3 范围

适用于微生物实验室检验用的所有培养基。 4 职责

4.1 化验室负责人：监督本规程的实施。 4.2 化验室检验员：按照本规程实施。 5 工具 5.1 定义 培养基 干粉培养基 系指用人工方法将多种物质按各种微生物生长繁殖的需要配制成的一种混合营养物，用于微生物限度检查、控制菌检查等。 指以干粉形式存在的培养基。 6 内容

6.1 培养基的购买 6.1.1

培养基管理员每月清点干粉培养基的库存量，及时申请购买培养基，以保证实验的

正常进行。 6.1.2

新购进的干粉培养基由培养基管理员验收。验收内容包括：培养基质量检验报告书、

数量，批号、厂家、有效期、包装情况（应包装完整、容器密闭）。若发现包装不完整、不密闭、培养基受潮或物理性状发生了明显改变等应拒绝接收。验收合格后填写《培养基接收记录》，在培养基外部加贴《干粉培养基标签》，填写内容为：名称、接收日期、批号、有效期至、储存条件。

微生物学---培养基的制作

? 牛肉汤培养基

1. 去掉筋膜及脂肪的新鲜牛肉,切成条、绞碎、按1000g牛肉加入DH2O 2000ml浸泡,

置冰箱过夜.

2. 次晨,将其煮沸半小时,并同时不断用不锈钢饭勺去掉脂肪及油汽（注意:不能用铁勺

以免Fe2+掉入汤中影响细菌生长）,静置15分钟,肉汤分层,将上清液吸出,沉渣过滤. 3. 于上述肉汤中加入蛋白胨10g每1000ml,NaCl 3g 每1000Ml,再煮沸3分钟,用

10mol/L的NaOH调节PH 7.2～7.6（实际应用中应调到处7.7～8.0 每12000ml 加入10mol/L 的NaOH调出浓度即大致为PH约为8 即每400ml加入1mlNaOH） 4. 再按2g每1000ml 加入K2HPO4（对肉汤的PH起缓冲作用）,煮沸150秒,静置30

分钟吸取上清液,沉淀过滤用1mol/L NaOH 滴到PH为8 （以酚红作指示剂）再煮沸静置1～2小时,吸取上清液,以DH2O补至原有体积,再测PH8（因高压会使PH降低）分装、高压灭菌、置室温备用

? 肝化汤

1. 取猪胃数个,洗净绞碎称400g 与绞碎的猪肝400gI混合,再加50摄氏度DH2O

4000ml 浓盐酸40ML置50～5

汉水生群大型活丑动三

20之7-00212六高年考题知点识类汇编分

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和___________ 再化分过程。 琼脂 。( 2)中图培养植外的培养体中基常用凝的固是_剂________培养_基中的长生素细和

常用培养基的配制

（一）营养琼脂培养基

【用途】供细菌总数测定、保存菌种、细菌纯化、一般细菌培养、血琼脂培养基基础之用。

【成分】牛肉膏 3g

NaCl 5g 蛋白胨 10g 琼 脂 20g

【pH值】7.2±0.2

【制法】上述成分称取38g加蒸馏水1000ml，经121.3℃ 30min高压灭菌备用。 （二）蛋白胨水培养基

【用途】供细菌培养、吲哚试验之用。

【成分】蛋白胨 10g

氯化钠 5g

【pH值】7.6 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，过滤，分装于试管，每管2～3ml，经121.3℃ 20min高压灭菌备用。

（三）半固体培养基

【用途】供观察细菌动力、菌种保存、H抗原位相变异试验等。 【成分】蛋白胨 10g

氯化钠 5g 琼脂 2.5～3g

【pH值】7.6

【制法】上述成分加入1000ml蒸馏水中，加热溶解，分装于试管，每管3～4ml，经 121.3℃ 20min高压灭菌备用。

（四）营养肉汤培养基

【用途】供一般细菌培养、转种、复苏、增菌等，也可用于消毒效果的测定。 【成

培养基的配制及灭菌

一． 实验目的

1. 三角瓶，培养皿，试剂瓶，试管，枪尖盒等仪器的清洗。

2. 三角瓶棉塞的制作，三角瓶，吸管，培养皿，试剂瓶，试管，枪尖盒的包装与灭菌。

3. 高温蒸汽灭菌原理的学习。

4. LB和MacConkey培养基的制作与灭菌。

二． 实验原理

1. 高温灭菌的原理：

由于培养基配置过程中并非是无菌操作，所以要通过立即灭菌来防止配制过程中混入的杂菌利用培养基中的营养物质进行繁殖从而破坏培养基的性能。

高压蒸汽灭菌是生物试验应用最广，效果最好的一种湿热灭菌法。在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。

注意：①使用高压蒸汽灭菌前一定要完全排除锅内空气，使锅内全部是水蒸气，灭菌才能彻底。否则在同一压力下，锅内实际温度和理想温度就会有差距，不能达到最好灭菌效果。②在使用灭菌锅前切勿忘记加水，水加至与三角搁架相平，以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。③使用完后要等到压力降为零再打开锅盖，否则会因为锅内外压力不平衡而导致棉塞蹦出造成污染，也容易伤害到操作者。

2. 培养基的配置原