动物细胞在细胞工程中的作用

实验时间 4月11日 4月18日 4月25日 实验内容 实验一 培养用液的配制、除菌与分装 实验二 细胞的传代培养 实验三 鱼类细胞原代培养（组织块法）（1-5组）401 实验四 染色体制备（6-10组）301 5月2日 实验三 鱼类细胞原代培养（组织块法）（6-10组）401 实验四 染色体制备（1-5组）301 5月9日 实验五 细胞的复苏与冻存

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实验一 培养用液的配制、除菌与分装

【实验目的】

1. 掌握常见培养用液的配制方法。 2. 掌握常用的灭菌方法。 3. 了解每种培养用液的作用。

【实验原理】

常用细胞培养用液包括磷酸盐平衡盐溶液（Phosphate Buffered Saline，PBS）、液体培养基、胰蛋白酶（Trypsin）和EDTA溶液。PBS用于清洗细胞、配制胰蛋白酶和 EDTA。培养基含有细胞生长需要的各种营养元素，使用时通常还需填加血清和抗生素。鱼类细胞培养的培养基常用种类是MEM 和L-15；用于动物的一般是DMEM和RPMI-1640。胰蛋白酶可将贴壁的细胞从培养瓶壁上消化下来，通常使用浓度为0.25%或0.125%。EDTA 用于清洗细胞表面，螯合Ca2+等二价离子，使细胞易于为胰蛋白酶消化。

细胞

动物细胞工程课堂笔记

动物细胞工程常用的技术

? 动物细胞培养：是其他动物细胞工程技术的基础。 ? 动物细胞融合 ? 动物细胞核移植

? 生产单克隆抗体等

? 一.动物细胞培养

(一)概念

（二）、原理：

? 如何进行细胞培养?

（三）相关概念

1.细胞贴壁：培养贴附性细胞时,细胞要能贴附于底物上才能生长繁殖.

2.细胞接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。

3.原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。一般培养的第1代细胞与传10代以内

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的细胞称为原代细胞培养。

4.传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。

5.细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。 6.细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。

7.细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。

动物细胞工程复习题

绪论

1、动物细胞工程技术应用的两面性。 2、动物细胞工程包含哪些主要研究内容？

实验室设置及无菌操作技术

1、你认为动物细胞培养无菌操作的要点有哪些？ 2、动物细胞培养液的主要成分有哪些？

3、常用的培养动物细胞的培养基的种类？目前实验室中中常用的培养基是什么？

4、什么是天然培养基、合成培养基和无血清培养基？ 5、目前常用的合成培养基有哪些？有哪些优点？

6、什么是无血清培养基?无血清培养基成分有哪些？无血清培养在实验研究中有什么特殊意义？

7、BSS有哪些功能？常用的BSS有哪些？ 动物细胞组织培养 名词解释： 原代培养

传代培养 接触抑制 密度抑制 细胞克隆 细胞系 细胞株

动物细胞固定化培养 微载体培养技术 大孔载体培养技术 有限细胞系和无限细胞系 问答题：

1、体外培养细胞有哪些类型及各自特点？

2、细胞系的生长过程包括哪些主要阶段？每一生长阶段各有什么特征？ 3、每代细胞的生长曲线包括哪几个主要时期？各期细胞有什么特点？ 4、动物细胞原代培养的方法？举例说明培养的基本过程。 5、贴壁细胞传代时采用何种方法，其技术关键是什么？ 6、为保证好的冻存复苏效果，需要考虑那些问

动物细胞工程 12月20日

动物细胞工程常用技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等，其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 一、动物细胞培养

1、定义：就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 2、原理：细胞增殖 3、过程 注意：

①10代以内细胞保持正常的二倍体核型，无突变发生，常用于实践或冷冻保存。 ②超过50代，极少数细胞突破自然寿命极限，突变成癌细胞，具有无限增殖能力；若超过50代，细胞不再增殖，全部死亡，则说明细胞没有发生癌变。

③分瓶之前，称原代培养；出现接触抑制用胰蛋白酶处理，再分瓶培养为传代培养。 思考回答：

⑴、为什么选用幼龄动物组织或胚胎进行细胞培养?

答：其细胞的分化程度低，增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培养。 ⑵、动物细胞培养需要脱分化吗?为什么?

答：不需要。因为高度分化的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个体的能力，所以没有类似植物组织培养的脱分化过程，要想使培养的动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细胞，使其分化成所需要的组织或器官。

⑶、进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞

第二章细胞工程基础

本章是本课程的理论基础和技术基础，重点回顾了一些重要的与细胞工程有关的理论背景知识，以及涉及的相关设施与技术，目的是为后续细胞工程各章的学习奠定基础。 内容提要：第一部分细胞工程的理论基础

第二部分细胞工程的技术基础

第一部分细胞工程的理论基础 一、细胞的基本结构及功能 四、组织与器官 二、细胞分化及细胞凋亡 五、生殖与发育 三、细胞周期及细胞分裂

一、细胞的基本结构及功能

细胞（cell）是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成，但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。

1、由膜包围的原生质团，通过质膜与周围环境进行物质和信息交流；

2、构成有机体的基本单位，具有自我复制的能力，是有机体生长发育的基础； 3、代谢与功能的基本单位，具有完整的代谢和调节体系，不同的细胞执行不同的功能； 4、遗传的基本单位，具有发育的全能性。

（一）细胞的基本共性

1、所有的细胞表面均有由磷脂双分子层与镶嵌蛋白质构成的生物膜，即细胞膜。 2、所有的细胞都含有两种核酸：即DNA与RNA作为遗传信息复制与转录的载体。 3、作为蛋白质合成的机器─核糖体，毫无例外地存在于一切细胞内。 4、所有细胞的增殖都以一分为二的方式

第二章 细胞工程

第二节 动物细胞工程的应用（3）

【课标要求】

1．简述动物的细胞培养与体细胞克隆 2．举例说出细胞融合与单克隆抗体 【教学目标】

1.简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 2.举例说出动物细胞融合与单克隆抗体的原理和应用。 【教学过程】

知识点三、细胞融合和单克隆抗体 （一）动物细胞融合

1、概念：动物细胞融合也称细胞杂交，是指在一定的条件下将 。融合后形成的具有原来 遗传信息的单核细胞，称为 。科学研究表明，不同类型的动物细胞之间能进行融合形成杂种细胞，如鼠—鸡、鼠—猴杂种细胞等 【思考】动物细胞融合的原理？

2、动物细胞融合的方法：主要有 （如 ）、 （如 ）和 （如 ）。目前，应用 进行细胞融合的效率较高，且对细胞伤害小，易操作、控制和观察，因此在实验室被广泛使用。在细胞融合后，还需对融合细胞进行筛选和检测。 3、细胞融合技术的优点：_______________

第二章 细胞工程

第二节 动物细胞工程的应用（1）

【课标要求】

1．简述动物的细胞培养与体细胞克隆 2．举例说出细胞融合与单克隆抗体 【教学目标】

1．简述动物细胞培养的过程、条件。（知识目标） 2．举例说出动物细胞培养的应用。（知识目标） 3．比较植物组织培养与动物细胞培养。（能力目标） 【教学过程】

总述：动物细胞工程常用的技术手段有：____________________、_______________________、 _____________________、_________________________等。其中_____________________是其他动物工程技术的基础。如：如何解决大面积烧伤病人自体健康肤源有限的问题？解决途径：_________________________________。 知识点一、动物细胞与组织培养 【什么是动物细胞与组织培养？】

（一）概念：动物细胞与组织培养（animal cell culture）就是

实验一细胞的凝集反应

一、实验目的

了解细胞膜的表面结构； 二、实验原理

凝集素是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，能与细胞外被的寡糖链相连接，使细胞发生凝集。 三、实验用品

1 ．器材: 显微镜、天平、载玻片、滴管、离心管、烧杯、10ml移液管、试管、试管架 2 ．材料: 土豆块茎、 2％鸡血红细胞 3 ．试剂: 抗凝血剂（ 3.8%柠檬酸钠）、PBS缓冲液（pH 7.4 0.2mol/L Na2HPO4 49ml + 0.2mol/L NaH2PO4 51ml, PBS缓冲液一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用）、0.17mol/L氯化钠。

四、实验步骤

1２％鸡血红细胞悬液制备

取已加抗凝剂的新鲜鸡血1 mL，加等量生理盐水轻轻混匀后2000 r/min离心５ min，重复3次，按红细胞压积用生理盐水配成２％鸡血红细胞悬液（淡红色）。 2 土豆凝集素制备

土豆２克切成薄片后加10 ml PBS，浸泡0.5-2 h（写具体时间，80min） 3 细胞凝集反应

制备不同浓度梯度的红细胞液：取1ml已制备好的2%的鸡血细胞悬液，通过系列稀释将血细胞悬液制备成不同浓度：在1ml的试管上编号为2%；在标号2%的试管中取0.5ml于另一只试管中，在试管

如何表示细胞、细胞核、染色体 DNA的关系？

细 胞

细 胞 核

染 色 体

DNA

2015/10/18

细胞分裂中最重要的变化是 什么？(是染色体复制加倍) 该变化有何意义？ ( 保证新细胞含有与原细胞 ) 相同的遗传物质2015/10/18 2

2015/10/18

第二章

细胞怎样构成生物体动 物

?细胞

人 体

植 物

第二节动物体的结构层次

2015/10/18

一、细胞分化形成组织受精卵细胞分裂

多个细胞细胞分化？

组织？上皮 组织

细胞分裂

肌肉 组织

细胞分化？ 大部分神经 组织

小部分结缔 组织

保持分裂能力的细胞

细胞分化与组织的概念1.细胞分化在个体发育过程中，一个或一种细胞通过分裂产生的后代，在形态、结构和生理功能方面发生差异性 变化，这个过程叫做细胞分化。

2、组织细胞分化产生了不同的细胞群，每个细胞群都 是由形态相似，结构、功能相同的细胞联合在一起 形成的，这样的细胞群叫做组织(tissue)。

受精卵

两个细胞

四个细胞

多个细胞

细胞分裂细胞生长 细胞分化

细胞数目增多 细胞体积增大 细胞种类增多

你来试一试。。。

“(一)”代表什么？ “(二)”代表什么？

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人体四种基本组织上皮组织 肌肉组织

神经组织

结缔组织

1. 上 皮 组 织

消化道上皮

表皮

腺上皮

由上皮

动物细胞培养总结 一．实验准备

1.实验器械、器皿的清洗和消毒 （1）清洗和包装

离心管(1.5ml，2ml,15ml)若干，冻存管若干放进铝饭盒，用牛皮纸包裹，系紧棉绳，用笔在饭盒上和牛皮纸上标记盒内所装物品名称、数量、日期和所属人名称。

蓝枪头两盒，黄枪头白枪头各一盒用牛皮纸包裹，用棉绳扎紧。 取适量蒸馏水于4L玻璃瓶，瓶盖拧松半圈。

过滤器，250ml玻璃瓶，500ml玻璃瓶用自来水毛刷洗涤剂刷洗，蒸馏水润洗，烘干。

过滤器两部分分别包裹，先将瓶口部位用锡纸包裹后，再罩以牛皮纸，再用棉布密包起来，用棉绳扎紧。

玻璃瓶拧下瓶盖，瓶身浸酸。浸酸时应注意安全，须穿戴耐酸手套和白大褂，注意保护好面部和身体裸露部分，提前备好一盆水在旁以便浸酸结束后清洗耐酸手套，防止走动时酸液滴到地板上不好清洗。瓶口慢慢沉入液面下，注意缓慢降低瓶身，使液体慢慢浸入瓶内，以免产生气泡溅出酸液，发生危险。浸酸时器皿要充满酸液，勿留气泡，浸泡过夜。取出瓶身时，须穿戴耐酸手套和白大褂，注意保护好面部和身体裸露部分，提前备好一盆水在旁，取出后将瓶身放入盆内水中在转移至水池边清洗，以免酸液滴落地板不好清洗。换水洗几次，待水澄清后开始冲洗，每瓶都用自来水灌满，倒掉，重复15次，