试剂配制的实验原理

1 DEPC水(1‰) 1000ml 水 1ml DEPC

根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。

2 0.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris

1000ml DEPC水

用HCL调ph至7.5，高压备用。

3 4%PFA的配制(ph 7.0) 40g PFA

1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压)

将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。

3 0.2% 甘油/0.1M tris

20ml 甘油

980ml 0.1Mtris

4 20XSSC Nacl 175.3g

（ph 7.0） 柠檬酸钠 88.2g

DEPC水 1000ml

分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用

5 HEPES 溶液 HEPES 23.8g

(ph6.8-8.0) DEPC H2O 100ml

6 50X Denhaldt′s 液

聚蔗糖（Ficoll 400）

1 DEPC水(1‰) 1000ml 水 1ml DEPC

根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。 2 0.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris

1000ml DEPC水 用HCL调ph至7.5，高压备用。

3 4%PFA的配制(ph 7.0) 40g PFA

1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压)

将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。

3 0.2% 甘油/0.1M tris 20ml 甘油 980ml 0.1Mtris

4 20XSSC Nacl 175.3g （ph 7.0） 柠檬酸钠 88.2g DEPC水 1000ml 分别稀释至2XSSC和0

1 DEPC水(1‰) 1000ml 水 1ml DEPC

根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。 2 0.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris

1000ml DEPC水 用HCL调ph至7.5，高压备用。

3 4%PFA的配制(ph 7.0) 40g PFA

1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压)

将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。

3 0.2% 甘油/0.1M tris 20ml 甘油 980ml 0.1Mtris

4 20XSSC Nacl 175.3g （ph 7.0） 柠檬酸钠 88.2g DEPC水 1000ml 分别稀释至2XSSC和0

1 DEPC水(1‰) 1000ml 水 1ml DEPC

根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。

2 0.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris

1000ml DEPC水

用HCL调ph至7.5，高压备用。

3 4%PFA的配制(ph 7.0) 40g PFA

1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压)

将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。

3 0.2% 甘油/0.1M tris

20ml 甘油

980ml 0.1Mtris

4 20XSSC Nacl 175.3g

（ph 7.0） 柠檬酸钠 88.2g

DEPC水 1000ml

分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用

5 HEPES 溶液 HEPES 23.8g

(ph6.8-8.0) DEPC H2O 100ml

6 50X Denhaldt′s 液

聚蔗糖（Ficoll 400）

一，蛋白质电泳相关试剂及缓冲液

（一）30％（W/V）丙烯酰胺溶液

﹡组分浓度 30％（W/V） Acrylamide ﹡配制量 100ml ﹡配制方法

1．称取下列试剂，置于250ml烧杯中。 Acrylamide 29g BIS 1g

2．向烧杯中加入约80ml的去离子水，充分搅拌溶解；最后定容至100ml，用0.45μm滤膜过滤除杂。 3．置于棕色瓶中4℃保存。

（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性。配制时应戴手套操作）

（二）40％（W/V）丙烯酰胺溶液

﹡组分浓度 40％（W/V） Acrylamide ﹡配制量 100ml ﹡配制方法

1．称取下列试剂，置于200ml烧杯中 Acrylamide 38g BIS 2g

2．向烧杯中加入约80ml的去离子水，充分搅拌溶解；最后定容至100ml，用0.45μm滤膜过滤除杂。 3．置于棕色瓶中4℃保存。

（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性。配制时应戴手套操作）

（三）10％（W/V）过硫酸铵

﹡组

一，蛋白质电泳相关试剂及缓冲液

（一）30％（W/V）丙烯酰胺溶液

﹡组分浓度 30％（W/V） Acrylamide ﹡配制量 100ml ﹡配制方法

1．称取下列试剂，置于250ml烧杯中。 Acrylamide 29g BIS 1g

2．向烧杯中加入约80ml的去离子水，充分搅拌溶解；最后定容至100ml，用0.45μm滤膜过滤除杂。 3．置于棕色瓶中4℃保存。

（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性。配制时应戴手套操作）

（二）40％（W/V）丙烯酰胺溶液

﹡组分浓度 40％（W/V） Acrylamide ﹡配制量 100ml ﹡配制方法

1．称取下列试剂，置于200ml烧杯中 Acrylamide 38g BIS 2g

2．向烧杯中加入约80ml的去离子水，充分搅拌溶解；最后定容至100ml，用0.45μm滤膜过滤除杂。 3．置于棕色瓶中4℃保存。

（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性。配制时应戴手套操作）

（三）10％（W/V）过硫酸铵

﹡组

E L I S A试剂配制及实验流程

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定(( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。以双抗体夹心法举例说明。

试剂配制：

(1) 包被缓冲液 + 碳酸盐缓冲液)：

Na

2CO

3

NaHCO

3

加蒸馏水至1000ml。（用时稀释成1x，加%BSA）(2) 洗涤缓冲液 0.15M PBST)：

%Tween-20

加在PBS缓冲液1000ml中。

PBS缓冲液：

KH

2PO

4

0.27g

Na

2HPO

4

·12H

2

O 3.58g

NaCl 8g

KCl

加蒸馏水至1000ml。

(3) 封闭缓冲液：

牛血清白蛋白(BSA) 2% 2g

（或5%脱脂奶粉）加洗涤缓冲液100ml。

(4) 稀释液：

牛血清白蛋白 %

加PBS 缓冲液100ml。

(5) 底物缓冲液：

Na

2HPO

4

(无水L，带12结晶水L) 取

柠檬酸(无水L，带1结晶水L) 取加蒸馏水至100ml。

(或Na

2HPO

4

·12H

2

O 1.84g

柠檬酸·H

2

O 0.51g

加蒸馏水至100ml)

(6) TMB(四甲基联苯胺)显色液（显蓝色）：HRP-

TMB(2mg/ml水)

底物缓冲液

30% H

2O 2

１、1%酚酞

1）称取1g酚酞溶于100ml95%乙醇中

2）称取1g酚酞溶于95.3ml无水乙醇，用蒸馏水稀释到100ml即可 ２、0.02%甲基橙

称0.02g甲基橙，加入100ml蒸馏水即可 3、0.1%甲基橙

称取0.1g甲基橙溶于70度的蒸馏水中，冷却稀释至100ml 4、0.1%甲基红

称取0.1g甲基红溶于95%乙醇稀释至100ml 5、甲基红—次甲基蓝（2:1）

甲基红、甲基蓝各称0.1g，各加100ml95%乙醇，摇匀后分别吸甲基红2份，甲基蓝1份 6、溴甲酚绿—甲基红（3:1）

称取溴甲酚绿0.1g,甲基红0.2g,各加100ml95%乙醇摇匀后取溴甲酚绿3份，甲基红1份

7、溴甲酚绿—甲基红（1：1）

称溴甲酚绿0.1g,甲基红0.1g,各加100ml无水乙醇中等量吸取 8、电解液配制：

轻油硫：0.5g碘化钾，0.6g迭氮化钠，5 ml冰乙酸，1000 ml蒸馏水，棕色瓶避光储存

重油硫：5g碘化钾，5g溴化钾，10ml冰乙酸，300ml蒸馏水，棕色瓶避光储存

9、博士实验亚硫酸钠配制

25g乙酸铅溶于200ml蒸馏水中，过滤并将滤液加入到溶有60gNaOH的100ml蒸馏水中，在沸水浴中加热此混合液30min，

常用试剂的配制

一、 目的

为保证检测的准确性，制定本规范。

二、 适用范围

本方法适用于化验室检测用常规试剂的配制。 名称 化学式 相对分子质量 盐酸 HCL 36.463 硝酸 HNO3 63.016 硫酸 H2SO4 98.08 沸点℃ 密度 g/ml ％ g/100 浓度 c mol/l 12 110 1.18-1.19 36-38 122 1.39-1.4 68 15 338 1.83-1.84 95-98 18 磷酸 H3PO4 98.00 氢氧化钠 NaOH 40.01 氨水 NH3。HO2 35.048 213 1.69 85 15 1.53 50.5 商品溶液 25-28 NH3 19.3 0.91-0.90 15

三、A.指试剂及其配制规范

A.1 酚酞 PH变色域8.0无色-10.0红色 所需药品：酚酞，分析纯

用途：酸碱指示剂

配制方法：称取1g酚酞，用100mL60%的乙醇溶解

A.2 0.5g/l甲基橙

所需药品：甲基橙PH变色域3.0无色-4.4黄色 用途：配制甲基橙指示剂

配制方法：称取0.5g甲基橙，溶于1000mL水中 A.3 0.1%溴甲酚绿 PH变色域3.8黄绿色-5.4蓝色

所需

（一）Western-blot实验 1. Western blot主要实验试剂

溴酚蓝（Bromphenol Blue） 丽春红（Ponceau S） 考马斯亮蓝（Coomassie brilliant blue R-250）

吐温-20（Tween-20） β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol) 十二烷基硫酸钠（SDS ） 过硫酸铵（APS） TEMED 聚丙烯酰胺凝胶单体贮备溶液 4×浓缩胶缓冲液