生化实验试剂配制

1 DEPC水(1‰) 1000ml 水 1ml DEPC

根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。

2 0.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris

1000ml DEPC水

用HCL调ph至7.5，高压备用。

3 4%PFA的配制(ph 7.0) 40g PFA

1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压)

将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。

3 0.2% 甘油/0.1M tris

20ml 甘油

980ml 0.1Mtris

4 20XSSC Nacl 175.3g

（ph 7.0） 柠檬酸钠 88.2g

DEPC水 1000ml

分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用

5 HEPES 溶液 HEPES 23.8g

(ph6.8-8.0) DEPC H2O 100ml

6 50X Denhaldt′s 液

聚蔗糖（Ficoll 400）

1 DEPC水(1‰) 1000ml 水 1ml DEPC

根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。 2 0.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris

1000ml DEPC水 用HCL调ph至7.5，高压备用。

3 4%PFA的配制(ph 7.0) 40g PFA

1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压)

将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。

3 0.2% 甘油/0.1M tris 20ml 甘油 980ml 0.1Mtris

4 20XSSC Nacl 175.3g （ph 7.0） 柠檬酸钠 88.2g DEPC水 1000ml 分别稀释至2XSSC和0

1 DEPC水(1‰) 1000ml 水 1ml DEPC

根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。 2 0.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris

1000ml DEPC水 用HCL调ph至7.5，高压备用。

3 4%PFA的配制(ph 7.0) 40g PFA

1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压)

将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。

3 0.2% 甘油/0.1M tris 20ml 甘油 980ml 0.1Mtris

4 20XSSC Nacl 175.3g （ph 7.0） 柠檬酸钠 88.2g DEPC水 1000ml 分别稀释至2XSSC和0

1 DEPC水(1‰) 1000ml 水 1ml DEPC

根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。

2 0.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris

1000ml DEPC水

用HCL调ph至7.5，高压备用。

3 4%PFA的配制(ph 7.0) 40g PFA

1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压)

将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。

3 0.2% 甘油/0.1M tris

20ml 甘油

980ml 0.1Mtris

4 20XSSC Nacl 175.3g

（ph 7.0） 柠檬酸钠 88.2g

DEPC水 1000ml

分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用

5 HEPES 溶液 HEPES 23.8g

(ph6.8-8.0) DEPC H2O 100ml

6 50X Denhaldt′s 液

聚蔗糖（Ficoll 400）

一，蛋白质电泳相关试剂及缓冲液

（一）30％（W/V）丙烯酰胺溶液

﹡组分浓度 30％（W/V） Acrylamide ﹡配制量 100ml ﹡配制方法

1．称取下列试剂，置于250ml烧杯中。 Acrylamide 29g BIS 1g

2．向烧杯中加入约80ml的去离子水，充分搅拌溶解；最后定容至100ml，用0.45μm滤膜过滤除杂。 3．置于棕色瓶中4℃保存。

（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性。配制时应戴手套操作）

（二）40％（W/V）丙烯酰胺溶液

﹡组分浓度 40％（W/V） Acrylamide ﹡配制量 100ml ﹡配制方法

1．称取下列试剂，置于200ml烧杯中 Acrylamide 38g BIS 2g

2．向烧杯中加入约80ml的去离子水，充分搅拌溶解；最后定容至100ml，用0.45μm滤膜过滤除杂。 3．置于棕色瓶中4℃保存。

（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性。配制时应戴手套操作）

（三）10％（W/V）过硫酸铵

﹡组

一，蛋白质电泳相关试剂及缓冲液

（一）30％（W/V）丙烯酰胺溶液

﹡组分浓度 30％（W/V） Acrylamide ﹡配制量 100ml ﹡配制方法

1．称取下列试剂，置于250ml烧杯中。 Acrylamide 29g BIS 1g

2．向烧杯中加入约80ml的去离子水，充分搅拌溶解；最后定容至100ml，用0.45μm滤膜过滤除杂。 3．置于棕色瓶中4℃保存。

（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性。配制时应戴手套操作）

（二）40％（W/V）丙烯酰胺溶液

﹡组分浓度 40％（W/V） Acrylamide ﹡配制量 100ml ﹡配制方法

1．称取下列试剂，置于200ml烧杯中 Acrylamide 38g BIS 2g

2．向烧杯中加入约80ml的去离子水，充分搅拌溶解；最后定容至100ml，用0.45μm滤膜过滤除杂。 3．置于棕色瓶中4℃保存。

（注意：丙烯酰胺具有强烈的神经毒性，可通过皮肤吸收并具有累积性。配制时应戴手套操作）

（三）10％（W/V）过硫酸铵

﹡组

E L I S A试剂配制及实验流程

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定(( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。以双抗体夹心法举例说明。

试剂配制：

(1) 包被缓冲液 + 碳酸盐缓冲液)：

Na

2CO

3

NaHCO

3

加蒸馏水至1000ml。（用时稀释成1x，加%BSA）(2) 洗涤缓冲液 0.15M PBST)：

%Tween-20

加在PBS缓冲液1000ml中。

PBS缓冲液：

KH

2PO

4

0.27g

Na

2HPO

4

·12H

2

O 3.58g

NaCl 8g

KCl

加蒸馏水至1000ml。

(3) 封闭缓冲液：

牛血清白蛋白(BSA) 2% 2g

（或5%脱脂奶粉）加洗涤缓冲液100ml。

(4) 稀释液：

牛血清白蛋白 %

加PBS 缓冲液100ml。

(5) 底物缓冲液：

Na

2HPO

4

(无水L，带12结晶水L) 取

柠檬酸(无水L，带1结晶水L) 取加蒸馏水至100ml。

(或Na

2HPO

4

·12H

2

O 1.84g

柠檬酸·H

2

O 0.51g

加蒸馏水至100ml)

(6) TMB(四甲基联苯胺)显色液（显蓝色）：HRP-

TMB(2mg/ml水)

底物缓冲液

30% H

2O 2

１、1%酚酞

1）称取1g酚酞溶于100ml95%乙醇中

2）称取1g酚酞溶于95.3ml无水乙醇，用蒸馏水稀释到100ml即可 ２、0.02%甲基橙

称0.02g甲基橙，加入100ml蒸馏水即可 3、0.1%甲基橙

称取0.1g甲基橙溶于70度的蒸馏水中，冷却稀释至100ml 4、0.1%甲基红

称取0.1g甲基红溶于95%乙醇稀释至100ml 5、甲基红—次甲基蓝（2:1）

甲基红、甲基蓝各称0.1g，各加100ml95%乙醇，摇匀后分别吸甲基红2份，甲基蓝1份 6、溴甲酚绿—甲基红（3:1）

称取溴甲酚绿0.1g,甲基红0.2g,各加100ml95%乙醇摇匀后取溴甲酚绿3份，甲基红1份

7、溴甲酚绿—甲基红（1：1）

称溴甲酚绿0.1g,甲基红0.1g,各加100ml无水乙醇中等量吸取 8、电解液配制：

轻油硫：0.5g碘化钾，0.6g迭氮化钠，5 ml冰乙酸，1000 ml蒸馏水，棕色瓶避光储存

重油硫：5g碘化钾，5g溴化钾，10ml冰乙酸，300ml蒸馏水，棕色瓶避光储存

9、博士实验亚硫酸钠配制

25g乙酸铅溶于200ml蒸馏水中，过滤并将滤液加入到溶有60gNaOH的100ml蒸馏水中，在沸水浴中加热此混合液30min，

安徽科威金属材料股份有限公司 质保部 化验室溶液配制规程 操作规程 编号 ZB-03-311 版本: 1.0 生效日期: 05-01-01 页码 Page: 1/7 常用案头试剂

1、 二甲酚橙指示剂（0.1％水溶液）：称取0.1g二甲酚橙于200mL烧杯中，加100mL水溶

解完全，移入棕色滴瓶中。 2、 乙酸－乙酸钠缓冲溶液（PH＝5.5）：将500g结晶乙酸钠CH3COONa-3H2O溶于适量水

中，加入50mL冰乙酸，溶解后，加水稀释至2500mL，混匀。

3、 甲基红－次甲基蓝指示剂：称取0.12g甲基红和0.1g次甲基蓝，溶于100mL无水乙醇

中。

4、 钙黄绿素指示剂：称取1g钙黄绿素、50g 硫酸钾和50g活性碳，于碾钵中碾磨均匀。 5、 氨水－氯化铵缓冲溶液（PH＝10）：称取168g氯化铵，溶于1430mL氨水中，用水稀至

2500mL，摇匀。 6、 K－B混合指示剂：称取0.1g酸性铬兰K与0.2g萘酚绿B及2g干燥的硫酸钾，研细，

混匀，保存在磨口瓶中，防止吸水。 7、 硫氰酸钾溶液（40％）：称取80g硫氰酸钾溶于150mL水中，加入3g碘化钾，1mL淀

粉溶液（0.5%），滴加碘液使溶液变蓝色，再用硫代硫

实验室常用溶液及试剂配制

实验室常用溶液、试剂的配制 表一 普通酸碱溶液的配制

名 称 （分子式） 比重 （d） ） ） 盐 酸 （HcL） 硝 酸 （HNO3） 硫 酸 （H2SO4） 冰醋酸 （Hac） 磷 酸 （H3PO4） 氨水（NH3·H2O） 氢氧化钠（NaOH） 氢氧化钾（KOH） 9） 表二 常用酸碱指示剂

指示剂 In 百里酚蓝 （麝香草酚蓝） 甲基橙 3.4 3.1～4.4 红 黄 溴甲酚绿 4.9 3.8～5.4 黄 蓝 0.1%的20%乙醇溶液或0.1g指示剂溶于2.9ml 0.05mol/L NaOH加水稀释至100ml 橙0.05%水溶液 1.65 PKHpH 12.～2.8 变色范围色 红 酸色 黄 0.1%的20%乙醇溶液 碱配 制 方 法 0.90～0.91 0） （330） （240） （173） （12） （11.5） （80） （56（4028 15 400 200 134 77 1.69 85 15 39 19 12 6 1.05 99.9 17 253 177 118 59 1.83～1.84 95～98 18 84 42 28 14 1.39～1.40 65～6