抗氧化酶体系

叶绿体的提取

一、试剂配置

1、PBS提取液：每L水依次加入MES(195.2×0.05=9.76g)、山梨糖醇(0.33×182.2=60.126g)、NaCl（0.010×58.5=0.585g）、MgCl（0.002×95=0.19g）、EDTA（292.25×0.002=0.5845g）、KH2PO（0.0005=0.1g）；4200×使用时加入ASA-Na（198.1×0.002=0.3962g）; 2、悬浮液：将PBS提取液中的MES换为238.3×0.05=11.915g的HEPES（238.3×0.05=11.915g）； 3、80%Percol：80ml原液+20ml水；40%Percol：40ml原液+60ml水；

实际配制：

PBS提取液2000ml(3个处理*2个品种*3个重复*20ml*3次=1080ml),

悬浮液100ml（3个处理*2个品种*3个重复*1ml*3次=54ml）;

80%Percol 200ml; 40%Percol 200ml.（3个处理*2个品种*3个重复*3ml*3次=162ml）

二、提取步骤

1、10g鲜样加20ml提取PBS（50mM MES PH6.1，含0.33M山梨糖醇，10

.

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法

一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法）

1、试剂的配制

（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：

A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g；

B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。

分别用蒸馏水定容到1000ml。

0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。加入10gPVP（聚乙烯吡咯烷酮）

参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。

（2）130mmol/L甲硫氨酸溶液：取1.399g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至100ml。网上说定容到100ML我也不懂。拜托

（3）100μmol/L EDTA-Na2溶液：取0.03721g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml；

（4）100μM核黄素溶液：取0.0075g核黄素用蒸馏水定容至100ml，避光保存，随用随配

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法

一、 超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法） 1、试剂的配制

（1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)：

A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量358.14）71.7g； B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量156.01）31.2g。 分别用蒸馏水定容到1000ml。

0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml，B母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。加入10gPVP（聚乙烯吡咯烷酮）

参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。

（2）130mmol/L甲硫氨酸溶液：取1.399g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至100ml。网上说定容到100ML我也不懂。拜托

（3）100μmol/L EDTA-Na2溶液：取0.03721g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml； （4）100μM核黄素溶液：取0.0075g核黄素用蒸馏水定容至100m

葡萄糖氧化酶 在食品加工中的应用

1.葡萄糖氧化酶EC1.1.3.4 葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,EC1.1.3.4, 简称GOD),最先于1928年在黑曲霉和灰绿青霉中 发现。 最适温度：30~50℃,最适pH :5.6~6.5。 Ag+、Hg+、NaHSO3对它有强烈的抑制作用， Na+、Ca 、Mg2+、zn 、Mn 对其具有不同程度 的激活作用 催化葡萄糖与氧反应，生成葡萄糖酸和过氧化氢：

C6H12O6+O2 C6H12O7 +H2O2

2.反应机理

3.GOD在食品中的应用 葡萄糖氧化酶在食品工业上有广泛： ①除氧保鲜 ②去葡萄糖 适用于食品工业中许多的产品，例如啤酒、 果汁、油脂、奶制品、蛋黄酱、食品罐头 和饮料的除氧； 鱼、虾、蟹、肉等的保鲜； 蛋品加工、炸制食品的脱糖； 面食品的增筋等等。

3.GOD在食品中的应用四个方面： 一是去葡萄糖 二是脱氧杀菌 三是测定葡萄糖含量 四是其他应用

3.1去葡萄糖 葡萄糖氧化酶最重要的应用之一就是防止美拉德 反应。 蛋类制品脱糖：应用葡萄糖氧化酶进行脱糖，即 将适量的酶添加到蛋白液中，不断供给适量的氧 气，使葡萄糖完

第２７卷第２期食品与生物技术学报

Ｖ０１．２７Ｎｏ．２

２００８年３月

Ｊｏｕｒｎａｌ‘ｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ

Ｍａｒ．２００８

文章编号：１６７３—１６８９（２００８）０２—００５５—０６

鲜切莲藕组织中多酚氧化酶的分离纯化

潘永贵１’２，

陈维信２

（１．海南大学食品学院，海南儋州５７１７３７；２．华南农业大学园艺学院，广东省果蔬保鲜重点实

验室，广东广州５１０６４２）

摘

要：酶促褐变是影响鲜切莲藕加工贮藏的主要问题，多酚氧化酶（ＰＰＯ）是引起酶促褐变的重

要酶类。用磷酸缓冲液提取鲜切莲藕组织中的多酚氧化酶，并通过硫酸铵沉淀，ＤＥＡＥ—Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换柱层析以及Ｐｈｅｎｙｌ

Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｆａｓｔ

Ｆｌｏｗ疏水柱层析进行纯化。该酶被纯化了９５．６６

倍，产率为２．４％。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳确定为单一条带。同时研究表明，鲜切莲藕组织中ＰＰＯ相

对分子质量在６５９００－－一６６１００之间。

关键词：鲜切莲藕；多酚氧化酶；纯化中图分类号：Ｓ

６０９．３

文献标识码：Ａ

ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＰｏｌｙｐｈｅｎｏｌＯｘｉｄａｓｅｆｒｏｍＦｒｅｓｈ—ＣｕｔＬｏｔｕｓＲｏｏｔ

ＰＡＮＹｏｎｇ—ｇｕｉｌ”．

ＣＨＥ

温度对鲜切苹果多酚氧化酶活性影响的研究

孙荣

(生物与食品工程学院12级食品质量与安全班)

指导老师:陈军

摘要：以姬娜苹果、青蛇果、红蛇果、家优鲜红富士、金帅苹果五个品种为实验材料，采用分光光度法以邻苯二酚为底物，分别在0℃，4℃，8℃，20℃，25℃条件下贮藏不同时间的鲜切苹果的多酚氧化酶活性进行了测定。结果表明：在不同温度贮藏下不同品种鲜切苹果多酚氧化酶变化趋势大致相同，呈现先上升后下降的变化趋势；其中不同品种鲜切苹果在20℃和25℃贮藏条件下多酚氧化酶的活性较高，而在4℃贮藏条件下其多酚氧化酶的活性最低。鲜切红蛇果的多酚氧化酶活性最高，而鲜切姬娜苹果，鲜切家优鲜红富士苹果，鲜切青蛇果，鲜切金帅苹果的多酚氧化酶活性均小于鲜切红蛇果。 关键词：鲜切苹果；温度；多酚氧化酶

引言

鲜切苹果是指新鲜苹果经分级、清洗、整修、去皮、切分、保鲜、包装等处理后, 供消费者立即食用或餐饮业使用的一种新型苹果加工产品。它具有新鲜、方便、卫生等优点,在欧美及日本等地已经形成了巨大的消费市场,同时在我国也开始占到一定市场份额, 并在快速增长。但是，鲜切苹果加工过程中造成的机械损伤会使苹果天然的组织结构遭到破坏,膜透性增加,酚类物质和多酚氧化酶(PPO)迅

温度对鲜切苹果多酚氧化酶活性影响的研究

孙荣

(生物与食品工程学院12级食品质量与安全班)

指导老师:陈军

摘要：以姬娜苹果、青蛇果、红蛇果、家优鲜红富士、金帅苹果五个品种为实验材料，采用分光光度法以邻苯二酚为底物，分别在0℃，4℃，8℃，20℃，25℃条件下贮藏不同时间的鲜切苹果的多酚氧化酶活性进行了测定。结果表明：在不同温度贮藏下不同品种鲜切苹果多酚氧化酶变化趋势大致相同，呈现先上升后下降的变化趋势；其中不同品种鲜切苹果在20℃和25℃贮藏条件下多酚氧化酶的活性较高，而在4℃贮藏条件下其多酚氧化酶的活性最低。鲜切红蛇果的多酚氧化酶活性最高，而鲜切姬娜苹果，鲜切家优鲜红富士苹果，鲜切青蛇果，鲜切金帅苹果的多酚氧化酶活性均小于鲜切红蛇果。 关键词：鲜切苹果；温度；多酚氧化酶

引言

鲜切苹果是指新鲜苹果经分级、清洗、整修、去皮、切分、保鲜、包装等处理后, 供消费者立即食用或餐饮业使用的一种新型苹果加工产品。它具有新鲜、方便、卫生等优点,在欧美及日本等地已经形成了巨大的消费市场,同时在我国也开始占到一定市场份额, 并在快速增长。但是，鲜切苹果加工过程中造成的机械损伤会使苹果天然的组织结构遭到破坏,膜透性增加,酚类物质和多酚氧化酶(PPO)迅

百合ACC氧化酶基因全长cDNA的克隆及序列分析

西北植物学报,2008,28(4):0651-0656ActaBot.Boreal. Occident.Sin.

文章编号:1000 4025(2008)04 0651 06*

百合ACC氧化酶基因全长cDNA的克隆及序列分析

刘鲜艳,刘雅莉*,王跃进,张宗勤

(农业部西北园艺植物种质资源与遗传改良重点开放实验室,陕西省农业分子生物学重点实验室,西北农林科技大学园艺学院,陕西杨陵712100)

摘 要:以亚洲百合 Polyanna (Liliumspp.)花瓣为材料,根据已报道的百合ACC氧化酶基因片段设计1对末端扩增特异引物,采用RACE方法,获得百合ACC氧化酶基因的全长cDNA(GenBank登录号为EU296623).该cDNA全长1152bp,具有一个954bp的开放阅读框,编码318个氨基酸.Blast搜索结果显示,百合ACC氧化酶基因核苷酸序列与其它植物已报道的ACC氧化酶基因具有71%~82%的相似性,氨基酸序列有70%~87%的相似性,聚类分析表明,与单子叶植物百合科郁金香首先聚类,其次与双子叶植物聚类,最后与单子叶禾本科和兰科植物聚类.

关键词:ACC氧化酶;cDNA

β-胡萝卜素漂白法测定莲子心粗多糖抗脂质

过氧化的活性 30 mL 试管中加入0. 5 mLβ-胡萝卜素(β2caro2

毛头牛蒡子醇提物抗氧化活性研究

目的", 研究毛头牛蒡子提取物的抗氧化活性。方法",将毛头牛蒡子乙醇提取物采用溶剂萃取法, 分成极性不同的

4 个部分, 并采用DPPH 法和邻苯三酚自氧化法测定各部分的清除DPPH 自由基和超氧阴离子自由基的能力, 以测定其抗氧化活性, 并与抗坏血酸进行比较

DPPH 法抗氧化活性分析", DPPH 自由基是一种很稳定的以氮为中心的自由基, 在517 nm 处有强吸收, 其乙醇水溶液呈很深的蓝紫色, 加入受试物后,517 nm 处可以动态监测DPPH 自由基被清除的效果, 这种效果通常用对DPPH 的清除率来表示。清除率越大, DPPH 自由基清除越彻底, 受试物的抗氧化活性越强[ 6",7] 。计算清除率的公式为:

其中, A0 为未加样DPPH 溶液的原始吸

光度; A为加样后DPPH 液的吸光度; A 样为样品溶液自身的吸光度。公式中引入A0 是为了消除样品溶液本身颜色对实验结果的影响。A 0 的测定: 用移液器取2. 0 mL95% 乙醇, 再取2. 0 mL 已配制好的DPPH

抗氧化剂

抗氧化剂（ Antioxidants）是阻止氧气不良影响的物质。 它是一类能帮助捕获并中和自由基，从而祛除自由基对人体损害的一类物质。人体的抗氧化剂有自身合成的，也有由食物供给的。较强的抗氧化剂如艾诗特ASTA（astaxanthin的简称）等，一般人类无法合成，必须从食物中等摄取

饮食中抗氧化剂长期以来倍受国内外学者关注，这是因为: ①食物中抗氧化剂能够保护食物免受氧化损伤而变质。

②在人体消化道内具有抗氧化作用，防止消化道发生氧化损伤。 ③吸收后可在机体其他组织器官内发挥作用。

④来源于食物的某些具有抗氧化作用的提取物可以作为治疗药品。抗氧化剂的作用机理包括鳌合金属离子、清除自由基、淬灭单线态氧、清除氧、抑制氧化酶活性等。

举例：如维生素A、C、E；类胡萝卜素（虾青素、角黄素、叶黄素，B-胡萝卜素等）；微量元素：硒、锌、铜和锰等 分类：

1．自由基吸收剂：如酚类抗氧化剂，维生素 E，类胡萝卜素。 2．氧清除剂：如类胡萝卜素及其衍生物、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、异抗坏血酸和异抗坏血酸钠等。

3．金属离子螯合剂：枸橼酸、EDTA和磷酸衍生物。

食品中抗氧化剂可以防止各种食品成分的氧