考马斯亮蓝染色细胞骨架原理

考马斯亮蓝染色的原理和方法

在蛋白质染色方法中，目前以考马斯亮蓝染色最为常用。因为它既克服了氨基黑染色灵敏度不高的限制，又比银染简便易操作。 考染的历史

考马斯亮蓝染色最早由Fazekas等在1963年用于醋酸纤维素膜电泳，并认为同样可用于纸电泳，琼脂糖电泳和淀粉凝胶电泳。1965年Meyer等将此方法应用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。 考染的灵敏度

考马斯亮蓝染色可以达到0.2~0.5 μg（200~500 ng），最低可检出0.1 μg蛋白；银染的灵敏度比考染高将近100倍，最低可以检出2 ng蛋白。

通过考染条带的深浅粗细，可以大致判断该条带有多少蛋白，如在8.6×6.8 cm（W×L）?.75 mm厚的胶上15~20 μg蛋白大约是下面这样的条带： 考马斯亮蓝染料的种类

考马斯亮蓝分为R-150、R-250、R-350、G-250等。其中R-350最为灵敏，R为红蓝色，G为绿蓝色。R-250即三苯基甲烷，每个分子含有两个SO3H基团，偏酸性，与氨基黑一样也是结合到蛋白质的碱性基团上。G-250即二甲花青亮蓝，是一种甲基取代的三苯基甲烷。 推荐一种考染的方法

⑴ 电泳后的凝胶立即浸泡在固定液（500 ml 乙醇，100 ml 冰醋酸，400 m

考马斯亮蓝染色的原理和方法

在蛋白质染色方法中，目前以考马斯亮蓝染色最为常用。因为它既克服了氨基黑染色灵敏度不高的限制，又比银染简便易操作。 考染的历史

考马斯亮蓝染色最早由Fazekas等在1963年用于醋酸纤维素膜电泳，并认为同样可用于纸电泳，琼脂糖电泳和淀粉凝胶电泳。1965年Meyer等将此方法应用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。 考染的灵敏度

考马斯亮蓝染色可以达到0.2~0.5 μg（200~500 ng），最低可检出0.1 μg蛋白；银染的灵敏度比考染高将近100倍，最低可以检出2 ng蛋白。

通过考染条带的深浅粗细，可以大致判断该条带有多少蛋白，如在8.6×6.8 cm（W×L）?.75 mm厚的胶上15~20 μg蛋白大约是下面这样的条带： 考马斯亮蓝染料的种类

考马斯亮蓝分为R-150、R-250、R-350、G-250等。其中R-350最为灵敏，R为红蓝色，G为绿蓝色。R-250即三苯基甲烷，每个分子含有两个SO3H基团，偏酸性，与氨基黑一样也是结合到蛋白质的碱性基团上。G-250即二甲花青亮蓝，是一种甲基取代的三苯基甲烷。 推荐一种考染的方法

⑴ 电泳后的凝胶立即浸泡在固定液（500 ml 乙醇，100 ml 冰醋酸，400 m

考马斯亮蓝

科技名词定义

中文名称：

考马斯亮蓝

英文名称：

Coomassie brilliant blue;coomassie [brilliant] blue

定义1：

属于三苯甲烷类染料，可与蛋白质形成较强的非共价复合体。考马斯亮蓝R250多用于聚丙烯酰胺凝胶电泳后蛋白质条带的染色；考马斯亮蓝G250是布拉德福德(Bradford)蛋白质定量试剂的主要成分。

所属学科：

生物化学与分子生物学（一级学科）；方法与技术（二级学科）

定义2：

广泛用于对电泳蛋白质染色的蓝色染料。也可显示出细胞骨架及蛋白质在细胞中的显微分布。

所属学科：

细胞生物学（一级学科）；细胞生物学技术（二级学科）

本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布 目录

化学性质 考马斯蓝染色 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量 处理方法 化学性质 考马斯蓝染色 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量 处理方法 展开 编辑本段化学性质 分子结构如右图 Coomassie brilliant blue G-250

考马斯亮蓝有G250和R250两种。

考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在465nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-

考马斯亮蓝

科技名词定义

中文名称：

考马斯亮蓝

英文名称：

Coomassie brilliant blue;coomassie [brilliant] blue

定义1：

属于三苯甲烷类染料，可与蛋白质形成较强的非共价复合体。考马斯亮蓝R250多用于聚丙烯酰胺凝胶电泳后蛋白质条带的染色；考马斯亮蓝G250是布拉德福德(Bradford)蛋白质定量试剂的主要成分。

所属学科：

生物化学与分子生物学（一级学科）；方法与技术（二级学科）

定义2：

广泛用于对电泳蛋白质染色的蓝色染料。也可显示出细胞骨架及蛋白质在细胞中的显微分布。

所属学科：

细胞生物学（一级学科）；细胞生物学技术（二级学科）

本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布 目录

化学性质 考马斯蓝染色 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量 处理方法 化学性质 考马斯蓝染色 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量 处理方法 展开 编辑本段化学性质 分子结构如右图 Coomassie brilliant blue G-250

考马斯亮蓝有G250和R250两种。

考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在465nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-

第七章 细胞骨架

第七章 细胞骨架

一、填空题

A-七-1. 细胞骨架是指存在于真核细胞中的蛋白纤维网架体系，狭义的骨架系统主要包括 微丝 、 微管 和 中间丝 。

A-七-2. 构成微管的蛋白有两类： α微管蛋白 和 β微管蛋白 。

A-七-3. 微管在细胞中有三种存在形式：单管、 二联管 和 三联管 ，其中主要分布在纤毛和鞭毛杆状部位的是 二联管 。

A-七-4. 装配时具有“踏车现象”的细胞骨架是 微丝 和 微管 。

A-七-5. 紫杉醇是作用于 微管 的特异性药物，而鬼笔环肽是作用于 微丝的特异性药物。

A-七-6. 微丝的基本组成单位是 肌动蛋白 ，其在细胞中也有两种存在方式： ① 球状肌动蛋白 ② 纤丝状肌动蛋白 。

A-七-7. 在细胞骨架系统中较为稳定的一种骨架纤维是 中间纤维 。 A-七-8. 中间纤维蛋白分子 八 聚体之间在纵向端对端首尾相连组成一条原纤维， 四 条原纤维侧向相互作用最终形成中间纤维。

A-七-9. 细胞骨架中具有极性的为 微丝 和 微管 。

B-七-10. 鞭毛和纤毛内部是由 微管 组成的轴丝构成的结构。其基部的结构式为__三联管__，而其杆部的结构

细胞骨架与肿瘤

一、什么是细胞骨架

细胞骨架是真核细胞中真核细胞内蛋白纤维交织而成的立体网架结构，参

与细胞形态的维持、细胞运动、细胞分裂等几乎所有的细胞生命活动。广义的细胞骨架有：细胞质骨架、核骨架、核纤层、细胞外基质。狭义上可分为：微管、微丝和中间纤维。细胞骨架作为支架可维持细胞的形态，亦可为细胞内细胞器提供附着位点；还分别参与细胞转运、信号转导、细胞分裂等功能。

1、微管，直径约25nm。典型的微管是由,根原纤维形成的一个空管,常延伸到像纤毛、鞭毛或某些原生动物的轴伪足这样一些长细胞突起中,形成有规则构型的复合物。由微管蛋白和微管结合蛋白组成，微管的装配分三个时期：成核期、延长期和稳定期。微管组装的动态调节模型有：非稳态动力模型和踏车模型。影响微管组装的因素有：微管蛋白浓度、GTP、Mg离子、温度和PH。其功能有：维持细胞形态，参与细胞特定结构的形成，参与细胞内物质的运输，参与细胞的运动，参与细胞内信号转导，维持细胞内细胞器的定位和分布。

2、微丝，直径为6一8nm。在微绒毛、褶终膜和微靖等细胞的伸展部分尤为显著。其结构与功能和微管相似。

3、中间纤维，除微丝和微管外,在高等生物细胞中通常还能观察到第三类纤维—中等纤维(其直径界

实验六 考马斯亮蓝染色法测定牛奶中蛋白质含量

一、目的要求

学习考马斯亮蓝染色法测定牛奶中蛋白质含量的方法和原理，标准曲线的绘制和回归方程的使用，分光光度计的使用。 二、基本原理

考马斯亮蓝所含疏水基团在酸性条件下与蛋白质的疏水微区具有亲和力。通过疏水作用与蛋白质相结合，形成的蓝色蛋白质染料复合物，在595 am处有最大吸光度，在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质染料复合物在595 nm处的吸光度与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质含量的测定。 分光光度法的原理：通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。 三、器材和试剂 1．器材

可见分光光度计，玻璃比色皿，试管 2．试剂

考马斯亮蓝G一250溶液：精确称取考马斯亮蓝G一250 100 mg，溶于50 mL 95％的乙醇，再加入100 mL 85％的磷酸，稀释定容至1 000 mL备用。

标准蛋白质溶液：精确称取牛血清白蛋白10 mg，加水溶解并定容至10 ml，冰冻，用时吸取上述溶液1 ml，用蒸馏水稀释至10 ml，即为100 μg/ml的标准蛋白质溶液。

样品的制作：准确吸取2 ml牛奶(市场上现买)加水至1000 ml制作样品。

四、操

考马斯亮蓝法测定(实验报告)

考马斯亮蓝法测定苹果组织微量可溶性蛋白含量

吴凡郭梦雨

摘要: 本实验以苹果果肉为研究对象，采取考马斯亮蓝比色法测定蛋白质的吸光度值，通过对果实可溶性蛋白提取缓冲液、缓冲液浓度、pH fi、外源添加物对果

肉可溶性蛋白提取效率的影响的研究，优化苹果果实可溶性蛋白含量测定方法，以期优化果实可溶性蛋白测定条件，为客观反映果实可溶性蛋白水平提供一种可行的方法。结果表明：外源添加PV嗣EDT/以是苹果可溶性蛋白提取率的主要影响因素。实验最终确定的提取条件为0.1mol/L pH9.0 Tris-HCl 提取缓冲液(内含1mmol/L EDTA和1% PVP)，此条件下苹果果实可溶性蛋白的有效测定含量为34.93%。

关键词：苹果、考马斯亮蓝法、Tris-HCl 缓冲液、外援添加物

1 实验部分

1.1 实验原理

果蔬可溶性蛋白质含量(soluble protein content) 是一个重要的生理生化指标，也是果蔬品质和营养的重要评价指标之一。许多可溶性蛋白是构成果蔬中酶的重要组成部分，参与果蔬多种生理生化代谢过程的调控，与果蔬的生长发育、成熟衰老，抗病性、抗逆性密切相关。

考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下呈棕红色，最大光吸收在46

[来源学科网ZXXK]

细胞骨架

A型题：

1.细胞骨架是由哪几种物质构成的

A.糖类 B.脂类 C.核酸 D.蛋白质 E.以上物质都包括 2.下列哪种结构不是由细胞中的微管组成

A.鞭毛 B.纤毛 C.中心粒 D.内质网 E.以上都不是 3.关于微管的组装，哪种说法是错误的

A.微管可随细胞的生命活动不断的组装与去组装 B.微管的组装分步进行

C.微管的极性对微管的增长有重要意义

D.微管蛋白的聚合和解聚是可逆的自体组装过程 E.微管两端的组装速度是相同的

4.在电镜下可见中心粒的每个短筒状小体

A.由9组二联微管环状斜向排列 B.由9组单管微管环状斜向排列

C.由9组三联微管环状斜向排列 D.由9组外围微管和一个中央微管排列 E.由9组外围微管和二个中央微管排列 5.组成微丝最主要的化学成分是

A.球状肌动蛋白 B.纤维状肌动蛋白 C.原肌球蛋白 D.肌钙蛋白 E.锚定蛋白 6.能够专一抑制微丝组装的物质是

A.秋水仙素 B.细胞松弛素B C.长春花碱 D.鬼笔环肽 E.Mg+ 7.在非肌细胞中，微丝与

Chapter 1０ 细胞骨架与细胞运动

10.1 细胞骨架的组成和功能

10.1.1 细胞骨架的组成和分布

微管：主要分布在核周围,并呈放射状向胞质四周扩散； 微丝：主要分布在细胞质膜的内侧； 中间纤维：分布在整个细胞中。 10.1.2 细胞骨架的功能

①作为支架(scaffold)； ② 在细胞内形成一个框架(framework)结构；③ 为细胞内的物质和细胞器的运输及运动提供机械支持；④ 为细胞的位置移动提供力；⑤ 为信使RNA提供锚定位点，促进 mRNA翻译成多肽；⑥ 是细胞分裂的机器；⑦ 参与信号转导。

10.2 微管(microtuble, MT)

10.2.1 微管的结构和类型

中空的管状；外径约 24 nm，内径约 14 nm, 壁厚 5 nm；长度变化不定。 细胞内微管呈网状和束状分布, 并能与其他蛋白共同组装成纺锤体、基粒、中心粒、纤毛、鞭毛、轴突、神经管等结构。 A 微管的结构

微管是由微管蛋白异源二聚体为基本构件，螺旋盘绕而成；在每根微管中二聚体头尾相接, 形成细长的原纤维(protofilament)； 13条原纤维纵向排列组成微管的壁。

B 微管蛋白(tubulin)类型：

α和β微管蛋白：直径4nm的