CYP450酶的细胞定位

【细胞色素P450酶系与药物的代谢，李国昌，陈卫军，浦宇红】 【细胞色素P450的催化作用，张莉，李卫华】

【细胞色素P450 CYP2E1酶构型特征及其表达调控机制的研究进展，刘晨晖，乐江】 【中药对细胞色素P450调控作用的研究进展，钟育敏，吴文康】 【CYP450酶特性及其应用研究进展，《中国临床药理学与治疗学》2008年 第8期 | 李晓宇 刘皋林 上海交通大学附属第一人民医院临床药学室 上海200080】

【细胞色素P450与药物代谢的研究现状， 朱立勤； 娄建石】

【细胞色素P450酶系在药物代谢中的作用， 朱大岭； 韩维娜； 张荣】 【细胞色素P450酶系对药物生物转化的作用， 刘萍； 边强】

【苯巴比妥对鸡肝微粒体CYP450活性的影响， 杨海峰； 江善祥】 【恩诺沙星对小鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响， 卢丽红】

【苯巴比妥和地塞米松对鸡细胞色素P450的诱导作用， 杨海峰； 张玲玲； 覃少华； 江善祥】

【细胞色素P450表达的诱导机制及其筛选方法的研究进展， 王青秀】 【细胞色素P450酶与合理用药， 吴伯镛】

【药物代谢中的肝细胞色素P450， 骆文香； 张银娣】 【细胞色素P450酶系与药物代谢的相互作用，

【细胞色素P450酶系与药物的代谢，李国昌，陈卫军，浦宇红】 【细胞色素P450的催化作用，张莉，李卫华】

【细胞色素P450 CYP2E1酶构型特征及其表达调控机制的研究进展，刘晨晖，乐江】 【中药对细胞色素P450调控作用的研究进展，钟育敏，吴文康】 【CYP450酶特性及其应用研究进展，《中国临床药理学与治疗学》2008年 第8期 | 李晓宇 刘皋林 上海交通大学附属第一人民医院临床药学室 上海200080】

【细胞色素P450与药物代谢的研究现状， 朱立勤； 娄建石】

【细胞色素P450酶系在药物代谢中的作用， 朱大岭； 韩维娜； 张荣】 【细胞色素P450酶系对药物生物转化的作用， 刘萍； 边强】

【苯巴比妥对鸡肝微粒体CYP450活性的影响， 杨海峰； 江善祥】 【恩诺沙星对小鼠肝微粒体细胞色素P450酶系的影响， 卢丽红】

【苯巴比妥和地塞米松对鸡细胞色素P450的诱导作用， 杨海峰； 张玲玲； 覃少华； 江善祥】

【细胞色素P450表达的诱导机制及其筛选方法的研究进展， 王青秀】 【细胞色素P450酶与合理用药， 吴伯镛】

【药物代谢中的肝细胞色素P450， 骆文香； 张银娣】 【细胞色素P450酶系与药物代谢的相互作用，

细胞色素P450亚酶CYP2D6（AMMC）活性荧光定量检测试剂盒产品说明书

（中文版）

主要用途

细胞色素P450亚酶CYP2D6（AMMC）活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过AMMC去甲基化酶反应系统中AMMC转化为AMHC后荧光峰值的变化，即采用荧光法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞或组织裂解萃取液样品（动物、人体）或纯化微粒体样品细胞色素P450亚酶2D6的活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

细胞色素P450酶是肝细胞微粒体复合功能单加氧化酶系统的总称。其分成五十多个亚酶：CYP1至CYP51。作用在于体内外源化合物（xenobiotics），包括药物、致癌剂、化学污染物的氧化代谢，即单加氧化作用（monooxygenation）和羟化作用（hydroxylation）。AMMC羟基化酶（AMMC 7-hydroxylase）的活性是细胞色素P450亚酶2D6的诊断标记，其基于AMMC羟基化酶选择性催化细胞色素P450亚酶2D6的活性。人体细胞色素P450亚酶2D6（CYP2D6；EC1.14.14.1），主要表达在肝、肾、胎盘、脑

细胞色素P450酶诱导模型

摘要

细胞色素氧化酶P450是人体内一类参与内源性和外源性化合物代谢的重要代谢酶，代谢活化许多药物，前致癌物，前毒物，和质变剂。大约有60%的药物主要依赖细胞色素氧化酶P450的代谢作用清除的。

本文主要建立了细胞色素P450酶的诱导模型，有望为研究新药提供参考。

建立化合物对细胞色素P450酶的诱导的模型时，我们选择了利福平,奥美拉挫和苯巴比妥分别作为1A2,3A4和2B6酶的诱导剂。此模型使用肝细胞来建立的，化合物加入到细胞培养液中，通过LC-MS来从测定代谢产物的变化。同时,我们进行了基因水平的检测,在基因水平上我们检测了化合物对细胞的诱导作用.通过此模型，我们可以直接从LC-MS测定的代谢产物的多少来确定未知的化合物是否对细胞色素CYP450是否有诱导作用。由实验得知，利福平,奥美拉挫和苯巴比妥对1A2,3A4和2B6的诱导能力很强，都超过20倍。

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前言

细胞色素P450(cytochrome,CYP450)是一类以还原态与CO结合后在450

酶和细胞的固定化

Chapter 5 Immobilized Enzyme and Cell

固定化酶和细胞

酶和细胞的固定化

Contents of chapter 51、什么是固定化技术和固定化酶 2、固定化酶的研究历史 3、酶的固定化技术(重点) 4、固定化酶的特点(重点) 5、固定化酶的应用 6、细胞、原生质体的固定化

酶和细胞的固定化

什么是固定化酶？ 5.1 什么是固定化酶？水溶性酶 水不溶性载体

水不溶性酶 水不溶性酶 (固定化酶) 固定化酶)

酶和细胞的固定化

什么是固定化酶？ 5.1 什么是固定化酶？酶的固定化技术和固定化酶 酶 可溶 间歇 吸附 包埋 间歇 交联 化学偶联 连续 固定化

酶和细胞的固定化

什么是固定化酶？ 5.1 什么是固定化酶？来源固定化酶： 固定化酶：经提取和分离纯化后的酶 固定化菌体(死细胞 死细胞): 固定化菌体(死细胞):含酶菌体或菌体 碎片

酶和细胞的固定化

什么是固定化酶？ 5.1 什么是固定化酶？特点优点——不溶于水，易于与产物分离； 不溶于水，易于与产物分离； 优点 不溶于水 可反复使用； 可反复使用； 可连续化生产； 可连续化生产； 稳定性好。 稳定性好。 缺点——固定化过程中往往会引起酶的失活。 固定化过程中往

44JournalofAnimalScienceandVeterinaryMedicine　　Vol.28　　No.3　　2009

端粒酶与细胞永生化

李改霞

(陕西省米脂中学,陕西米脂　718100)

摘　要:端粒是真核细胞染色体末端的一种特殊结构,由端粒DNA和端粒蛋白质组成。正常动物

细胞DNA的端粒随着细胞分裂而缩短,当缩短到一定长度时细胞将停止增殖并死亡。端粒酶可以从端粒DNA3′OH末端延伸端粒或合成新的端粒。本文主要介绍了端粒酶的结构和功能以及在细胞永生化中的应用。

关键词:端粒;端粒酶;永生化

[中图分类号]　S852.33　　[文献标识码]　A　　[文章编号]　100426704(2009)0320044203

ProgressonTelomeraseandImmortalization

LIGai-xia

(Mizhimiddleschoolin,　　Abstract:Telomereissrendofeukaryoticchromosomes.Mostofnormalanimal

somaticcellscannumbertimbecomesenescent.Telomeraseisanenzymethatimpartsreplicative

细胞内蛋白质的定位信号序列

1.内质网信号序列(ER signal sequence) 2.驻留信号( retention signal):

①ER驻留信号(包括KDEL即Lys-Asp-Glu-Leu和HDEI即His-Asp-Glu-Ile两个4肽信号序列)；

②ER回收信号(ER retrieval signal，可溶蛋白的KDEL和ER膜蛋白上的KKXX)

3.核输入信号(nuclear import signal):也称NLS，常含Pro-Lys-Lys-Lys-Lys-Arg-Val

4.核输出信号(nuclear export signal)：核糖体蛋白上相间排列的疏水性氨基酸

5.过氧化物酶体引导信号(peroxisomal targeting signal, PTS):C端的SKL即Ser-Lys-Leu

6.转运肽(transit peptide):即导肽，进入线粒体蛋白的N端的带正电的氨基酸(Arg)和不带电的氨基酸(Ser)构成的信号序列

一、 内质网信号肽

内质网蛋白定位信号总体可以分为返回信号和保持信号。内质网逃逸的蛋白主要通过COPⅠ有被小泡将其返回内质网，因此区分保持信号与返回信号一个很重要

细胞色素p450

摘要：细胞色素P450酶是广泛存在于生物界的含亚铁血红素单加氧酶, 参与不同生物中多种重要的生化反应，如甾类激素的合成、脂溶性维生素代谢、药物代谢等. 文章结合近期p450研究综述了细胞色素P450生物分布、结构特点、功能、降解及其部分应用。

关键字：p450 发现 分布 代谢

细胞色素p450是生物界中广泛存在的一种含高铁血红素的蛋白，作为细胞色素p450酶系的末端氧化酶，具有关键作用。其以铁原卟啉为辅基，属于单链b族细胞色素蛋白。因其还原态与CO结合后，在450nm处具有高光吸收峰而得名。由于细胞色素P450 酶在生物体内广泛参与甾类激素的合成、脂溶性维生素代谢、多不饱和脂肪酸转换为生物活性分子, 以及致癌作用和药物代谢，细胞色素p450被各大实验室广泛研究。

1、 P450的发现

细胞色素P450（CYPs）代表着一个很大的可自身氧化的亚铁血红素蛋白家族，属于

单氧酶的一类，因其在450纳米有特异吸收峰而得名 。1958年，这些细胞色素在肝脏细胞微粒体中被发现。这个细胞色素家族的成员在进化路途中（从细菌到人类）的所有生物体中都存在。在原核生物中，CYPs的功能具有可塑性，而真核生物中它们的功能是不同的，哺乳动物CY

细胞色素p450

摘要：细胞色素P450酶是广泛存在于生物界的含亚铁血红素单加氧酶, 参与不同生物中多种重要的生化反应，如甾类激素的合成、脂溶性维生素代谢、药物代谢等. 文章结合近期p450研究综述了细胞色素P450生物分布、结构特点、功能、降解及其部分应用。

关键字：p450 发现 分布 代谢

细胞色素p450是生物界中广泛存在的一种含高铁血红素的蛋白，作为细胞色素p450酶系的末端氧化酶，具有关键作用。其以铁原卟啉为辅基，属于单链b族细胞色素蛋白。因其还原态与CO结合后，在450nm处具有高光吸收峰而得名。由于细胞色素P450 酶在生物体内广泛参与甾类激素的合成、脂溶性维生素代谢、多不饱和脂肪酸转换为生物活性分子, 以及致癌作用和药物代谢，细胞色素p450被各大实验室广泛研究。

1、 P450的发现

细胞色素P450（CYPs）代表着一个很大的可自身氧化的亚铁血红素蛋白家族，属于

单氧酶的一类，因其在450纳米有特异吸收峰而得名 。1958年，这些细胞色素在肝脏细胞微粒体中被发现。这个细胞色素家族的成员在进化路途中（从细菌到人类）的所有生物体中都存在。在原核生物中，CYPs的功能具有可塑性，而真核生物中它们的功能是不同的，哺乳动物CY

带Luciferin荧光素酶细胞转染实验的具体步骤及方法

一、细胞名称LLC-GFP-luc

二、组织小鼠肺癌细胞系

三、母细胞来源ATCC

四、转染方法与标记过程的描述慢病毒转染Hygromycin筛选

(一) 质粒部分

1.酶切载体：pGL4.10（luc2）由酶切获得1400bp的luc2基因片断；EGFP片段由PCR扩增获得700-800bp左右片段；pSin-hyg-T2A载体酶切线性化。

2.电泳和胶回收：上述酶切产物DNA电泳，TAKARA试剂盒胶回收，回收产物取少量电泳鉴定。

3.连接载体与目的片段:使用Invitrogen T4连接酶连接luc2、EGFP片段和pSin-hyg-T2A线性化载体，连接使用20ul体系，25℃，10min。

4.转化：感受态菌One Shot Stbl3在冰上融化后，加入连接产物，静置25min 后在水浴42℃，45sec热休克，后加入250ul无抗培养基225转摇菌1h，将转化的菌铺于有氨苄抗性平板37度过夜。

5.挑取单克隆：观察平板后挑取15个单克隆至含2ml氨苄抗性LB培养基摇菌管中，255转摇菌

6.5h。

6.小抽质粒与鉴定：使用碱裂解法小抽，质粒用25ul含RNA酶ddH2O溶解；酶切鉴定: 重