分光光度计的使用与维护

实训实验任务名：

课程分析仪器结构及维护

情境三紫外-可见分光光度计

课时：4地点：实C403

目录

介绍 (2)

目的 (2)

预习参考资料 (2)

课1.

分光光度计原理 (5)

分光光度计结构 (5)

课2.

分光光度计检定(测试)的主要项目对分析结果的影响 (5)

课3.

与分光光度计正确使用和维护有关的几个注意事项 (2)

课4.

分光光度计操作中容易出现的几个典型故障及其排除方法 (7)

课2.

练习1-1 (8)

介绍

在完成这一个单元的学习之后，学员将能理解紫外可见分光光度计的结构及常见故障排除。同时具备必要的维护和更换相应部件的技能

目的

1.了解紫外可见分光光度计的理论和操作

2.了解一个典型的分光光度计的结构和常见故障排除

3.掌握成功维修常见故障的技术

技能要求

1.熟悉紫外-可见分光光度计的基本结构及各主要部件的作用；

2．掌握紫外-可见分光光度计一般操作程序和具体操作要求；

3．掌握紫外-可见分光光度计的安装要求和维护保养知识；

讲师的任务:

1.描述721分光光度计结构

2.描述721分光光度计常见故障

预习参考资料

课1.理论和操作

分光光度计的基本工作原理是基于物质对光

(对光的波长)的吸收具有选择性，不同的物质都有各

自的吸收光带，所以，当光色散后的光谱通过某一

溶液时，其中某些

分光光度计考试题

答卷人： 评分： 一、判断题（每题一分）

1. 在一定的光强照射下，光电流与射入的光量近似成正比。( )

2. 在分光光度计中，用光电管代替硒光电池可以提高测量的准确度。( )

3. 单光束紫外-可见分光光度计是根据物质的分子对紫外、可见区辐射(光)产生的吸收光谱和Lambert-Beer定律测量物质的性质和含量的分析仪器。 ( ) 4. 单光束紫外-可见分光光度计的检定周期一般为半年。 ( ) 5. 单光束紫外-可见分光光度计的仪器类别分为A类和B类。（ ）

6. 检定紫外-可见分光光度计所使用的光谱中性滤光片的标称值为10%、20%、30%(或40%)。（ ） 7. 仪器无需预热就能检定。（ ）

8. 单光束紫外-可见分光光度计检定规程规定，仪器透射比重复性应不大于相应投射比准确度绝对值的2倍。（ ）

9. 适用于可见光区的光源，常用的有钨灯和普通灯。 ( )

10．杂散光的存在，会使测量结果吸光度值增加，透射比值减小。 ( )

分光光度计的使用方法

1、使用方法

1.接通电源，打开仪器开关，掀开样品室暗箱盖，预热10分钟。

2.将灵敏度开关调至“1”档（若零点调节器调不到“0”时，需选用较高档）

3.根据所需波长转动波长选择钮。

4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处，用擦镜纸擦清外壁，放入样品室内，使空白管对准光路。

5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器，使读数盘指针指向t=0处。

6.盖上暗箱盖，调节“100”调节器，使空白管的t=100，指针稳定后逐步拉出样品滑竿，分别读出测定管的光密度值，并记录。

7.比色完毕，关上电源，取出比色皿洗净，样品室用软布或软纸擦净。

2、注意事项

①空白溶液与供试品溶液必须澄清，不得有浑浊。如有浑浊，应预先过滤，并弃去初滤液。 ②在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸收度，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确，除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内；否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度，并以吸收度最大的波长作为测定波长。 ③一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3～0.7之间的误差较小。

④由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数，再计算含量。

⑤在测定时或

分光光度计的使用方法

1、使用方法

1.接通电源，打开仪器开关，掀开样品室暗箱盖，预热10分钟。

2.将灵敏度开关调至“1”档（若零点调节器调不到“0”时，需选用较高档）

3.根据所需波长转动波长选择钮。

4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处，用擦镜纸擦清外壁，放入样品室内，使空白管对准光路。

5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器，使读数盘指针指向t=0处。

6.盖上暗箱盖，调节“100”调节器，使空白管的t=100，指针稳定后逐步拉出样品滑竿，分别读出测定管的光密度值，并记录。

7.比色完毕，关上电源，取出比色皿洗净，样品室用软布或软纸擦净。

2、注意事项

①空白溶液与供试品溶液必须澄清，不得有浑浊。如有浑浊，应预先过滤，并弃去初滤液。 ②在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸收度，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确，除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内；否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度，并以吸收度最大的波长作为测定波长。 ③一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3～0.7之间的误差较小。

④由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数，再计算含量。

⑤在测定时或

1.吸光度测量步骤：

（1） 按动“功能”键，切换到透过率测量模式。 （2） 调整测试波长。

（3） 置入遮光体，按下“0%T”键调零。 （4） 按动“功能”键，切换到吸光度测量模式。

（5） 置入参比样品，按下“100%T”键调百。此时仪器显示“.000” （6） 置入测试样品，读取测试数据。

（7） 测量值超过1.999时，显示“1–––”,即超出显示范围。 （8） 测量值低于-1.999时，显示“1–––”,即超出显示范围。

2.调零（0%T）步骤：

将遮光体置入样品架，并拉动样品架拉杆使其进入光路。然后按下仪器的“0%T”按钮，便可完成调零。 *注意事项：

a. 调零时光路内必须置入挡零块，否则无法正常完成调零，显示“E1”。 b. 调零时不要打开样品室盖。

c. 调零在透过率模式下显示“00.0”，在吸光度模式下显示“1–––”,即超出显示范围。

3.调百（100%T）步骤：

将空白样品置入样品架，并拉动样品架拉杆使其进入光路。然后按下仪器上的“100%T”，此时屏幕显示“BL”便可以完成调百。 *注意事项：

a. 调百时不要打开样品室盖。

b. 调百时不能把挡零块置入光路，否则无法调百，显示“E2”。

c. 调100%在

简要介绍资料的主要内容,以获得更多的关注

721分光光度计的使用规程

①该仪器应放在干燥的房间内，使用时放置在坚固平稳的工作台上，室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风，防止灯泡灯丝发亮不稳定。

②使用本仪器前，使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理，以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前，应该对仪器的安全性能进行检查，电源接线应牢固，通电也要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再按通电源开关。

③在仪器尚未接通电源时，电表指针必须于“0”刻线上，若不是这种情况，则可以用电表上的校正螺丝进行调节。

④将仪器电源开通，打开比色皿暗箱盖，选择需用的单交波长，灵敏度选择请参照“5”调节“0”电位器使用电表指“0”；然后将比色皿暗箱盖合上，比色皿座处于蒸馏水校正位置，使光电管受光，旋转调“100%”电位器，使电表指针到满度附近，仪器预热20分钟。

⑤放大器灵敏度有五档，是逐步增加的，“1”最低。其选择原则是保证能使空白档良好调到“100%”的情况下，尽可能采用灵敏度较低档，这样仪器将有更高的稳定性。所以使用时一般置“1”，灵敏度不够时再逐渐升高，但改变灵敏度后需按“4”重新校正“0”和“100%”，仪器即可进行测定工作。

⑥预热后，按“4”连续

1. 2. 3.

4.

建议: 在每次测量完毕后，用蒸馏水清洁样品平台，这样可以保证下一次测量的准确性。 每次测量的样品量建议不少于2微升

Nanodrop分光光度计操作说明

双击电脑屏幕上的Nanodrop图标,启动软件.

选择所需的测量模式,屏幕上会弹出初始化仪器的提示.往仪器的加样孔中加入2微升的蒸馏水,合上上盖使形成液柱,然后点击确定以开始初始化,可以听见电磁阀开合的声音.

五六秒后屏幕上的提示信息消失,表示初始化完成.用擦镜纸将蒸馏水擦干净,加入2-3微升的Buffer,合上上盖并点击Blank.

Blank完成后,用擦镜纸将Buffer擦干净即可以开始上样,点击Measure开始测量.

图一 图二

图三 图四

5. 测量完成后,点击Show Report查看结果,选择Save进行保存. 6. 保存的数据对应地保存在C:\\Nanodrop Data文件夹.

注: 具体的实验方法如BCA,Bradford等以及标准曲线的建立请参阅生物学资料和说明书

名词介

一、 原子荧光分光光度计 技术参数 1、工作条件要求 1.1电源: 220V，50Hz 1.2温度: 15～35℃ 1.3相对湿度: 10-75% 2、技术能力要求

2.1用途：用于食品卫生检验、环境样品检验、城市给排水检测、农产品检验、地质冶金检验、化妆品检验、土壤肥料饲料检验等样品中As、Sb、Bi、Hg、Se、Te、Sn、Ge、Pb、Zn、Cd元素的痕量分析。 2.2分析方法：非色散光学系统,进行两道元素同时测量

*2.2.1氢化物发生进样方式：双注射泵联合进样，蠕动泵主动排废

2.2.2检测能力：适用于As、Hg、Se、Pb、Ge、Sn、Te、Bi、Sb、Cd、Zn等十一种元素的痕量测定

2.2.3检测限(D.L.)：As、Pb、Se、Bi、Sn、Sb、Te、Hg≤0.01μg/L； Hg（冷原子测汞）、Cd≤0.001μg/L； Ge≤0.05μg/L;Zn≤1.0μg/L *2.2.4相对标准偏差（RSD)：≤0.8% 2.2.5线性范围：≥三个数量级

*2.3光学光源系统：双光束、实时监控，脉冲恒流或集束脉冲供电，无色散光学系统，自识空心阴极灯

2.4气路设计（气路控制模块）： 2.4.1控制方式：质量流量控制器（MFC）

荧光分光光度计技术指标

一．设备的主要用途、功能及特点

该设备可用于食品、饲料、生化样品、药品以及环境样品中荧光物质的定性定量分析。采用石英涂层的光学系统。可同时测定荧光、磷光、化学和生物发光。软件具有扫描（激发光谱、发射光谱、3D光谱、同步光谱、等高线图）、浓度、动力学、时间分辨以及仪器校准、性能认证等功能。 二．技术参数及指标

*2.1 光源：闪烁式氙灯，脉冲半峰宽小于2微秒，功率≥70KW，氙灯必须只在工作时才闪烁；

2.2 无需关闭样品室就可以测试荧光数据，样品体积大小不受仪器限制； 2.3 切尼－特纳型单色器，超低杂散光。

*2.4 最大扫描速率：＞22000 nm/min，可以在3s左右完成全波长扫描； *2.5 水平狭缝光路，采用标准比色皿（1cm光程）测试样品量最少体积≤0.6mL； 2.6 波长精度：±0.5nm(541.92nm)； 2.7 波长重现性：±0.2nm； *2.8 波长范围

激发态：200-900nm， 发射态：200-900nm； 2.9、灵敏度(水的Raman峰信噪比)

≥750：1 RMS，350nm激发，发射和激发狭缝为10nm，平均采样时间为1秒； *2.10 激发/发射单色器配置下列自动滤光片，

仪器分析习题参考解答——第4章 紫外可见分光光度法

第4章 紫外可见分光光度法-习题解答

思考题

1．什么是选择性吸收？它与物质的分子结构有什么关系？

【答】当对某一物质从长波到短波进行扫描时，光波能量E?h?符合某一价电子的量子化能级差?E?E激发态?E基态时，该频率?（或波长?）的光则被吸收，而其它波长的光不被吸收的现象，称为光的选择性吸收。被选择性吸收的某一波长光的大小反映了某一跃迁所需的量子化能级差的大小，与跃迁类型有关，即与组成分子的元素和化学键类型有关，所以选择性吸收的波长是物质分子结构的反映。

2．紫外吸收光谱有什么特征？紫外光谱说明什么？ 【答】（1）紫外吸收光谱是由于分子的价电子能级跃迁引起的，是带状光谱。

（2）由于分子的价电子能级跃迁只有???、n??、π?π、n?π四种基

????本跃迁类型，加上电荷迁移跃迁和配位场跃迁两种变化形式，所以分子的紫外吸收光谱一般吸收峰的数量比较少，而且各种能级跃迁的能量差别不是很大，各吸收带之间常常有重叠而不易区分的现象，特征性不是很强。

（3）紫外光谱的三大要素为吸收峰的位置（横坐标）、强度（纵坐标）和光谱形状。吸收峰在横坐标的位置和形状为化合物定性的指标，而峰的强度为化合物定量的指标；