细胞克隆形成实验6孔板接种多少细胞

细胞克隆形成实验

当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞，大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测。

细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大：

一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。

实验方法：

平板集落形成实验、软琼脂集落形成实验

(a) 平板集落形成实验：本法适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞

(b) 软琼脂集落形成实验：本法适用于非锚着依赖性生长的细胞，如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系。

平板克隆形成实验基本步骤：

1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。

2、将细胞悬液作梯度倍数稀

细胞克隆形成实验

当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞，大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测。

细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大：

一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。

实验方法：

平板集落形成实验、软琼脂集落形成实验

(a) 平板集落形成实验：本法适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞

(b) 软琼脂集落形成实验：本法适用于非锚着依赖性生长的细胞，如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系。

平板克隆形成实验基本步骤：

1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。

2、将细胞悬液作梯度倍数稀

实验一细胞的凝集反应

一、实验目的

了解细胞膜的表面结构； 二、实验原理

凝集素是一类可逆结合特异糖基的蛋白质，能与细胞外被的寡糖链相连接，使细胞发生凝集。 三、实验用品

1 ．器材: 显微镜、天平、载玻片、滴管、离心管、烧杯、10ml移液管、试管、试管架 2 ．材料: 土豆块茎、 2％鸡血红细胞 3 ．试剂: 抗凝血剂（ 3.8%柠檬酸钠）、PBS缓冲液（pH 7.4 0.2mol/L Na2HPO4 49ml + 0.2mol/L NaH2PO4 51ml, PBS缓冲液一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用）、0.17mol/L氯化钠。

四、实验步骤

1２％鸡血红细胞悬液制备

取已加抗凝剂的新鲜鸡血1 mL，加等量生理盐水轻轻混匀后2000 r/min离心５ min，重复3次，按红细胞压积用生理盐水配成２％鸡血红细胞悬液（淡红色）。 2 土豆凝集素制备

土豆２克切成薄片后加10 ml PBS，浸泡0.5-2 h（写具体时间，80min） 3 细胞凝集反应

制备不同浓度梯度的红细胞液：取1ml已制备好的2%的鸡血细胞悬液，通过系列稀释将血细胞悬液制备成不同浓度：在1ml的试管上编号为2%；在标号2%的试管中取0.5ml于另一只试管中，在试管

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

1. 2. 3. 4. 5.

实验前准备

? 根据自己实验的情况提前预定超净台 ? 进入细胞室之前必须穿鞋套，戴手套

? 将实验所需要的实验仪器放入超净台内紫外照射灭菌15-20min

高压灭菌操作

将所需灭菌的枪头，EP管等仪器放入枪头盒或饭盒中，并用报纸将枪头盒包好。

将仪器放入灭菌锅之前，首先要检测一下锅内的水位是否超过锅底的圆圈，若没有超过则需加水。

检测水位之后，将包好的器材放入锅内，盖上锅盖并拧紧螺丝。 插上电源，先将电压调至250V，目的在于排尽锅内的空气，（当排气阀有白气冒出时，说明空气已排尽）空气排尽后，关闭排气阀。

关闭排气阀后指针上升，当指针竖直时，将电压调至125V，保持锅内压力的稳定。

开始计时，灭菌30min。结束时关闭电源，等至指针慢慢降下即可。 拿出锅内的器材放入恒温烘箱中烘干，2天后即可拿出。

（组织内）蛋白质提取过程

对癌组织和癌旁正常组织进行称重，记录数值。

根据RIPA裂解液Ⅲ说明书（每100mg组织中加入1ml溶液A，1ul溶液B，5ul溶液C）按照组织块得大小配好ABC混合液。

将组织块加入匀浆器中，并加入相应量得ABC混合液，冰上静置5-10min，开

学习目标：1.列表比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的异同2.理解和掌握动物细胞融合的原理、过程和意义自主学习：1.动物细胞融合常探究交流知识点一.动物细胞融合课堂反馈1.下图表示

选修三学案 胶州四中高二生物

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体

学习目标：

1.列表比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的异同

2.理解和掌握动物细胞融合的原理、过程和意义

3.理解和掌握单克隆抗体制备的过程的步骤和应用

学习重难点：1.动物细胞融合的原理、过程和意义。2.单克隆抗体制备的过程的步骤和应用

知识回顾：1、植物体细胞杂交过程应用了那些技术?

2、植物与动物细胞结构有何区别？

自主学习：

1．动物细胞融合常用的诱导因素有、点是 。

2．制备单克隆抗体的技术流程是：用羊的红细胞对小鼠进行注射，使小鼠产生反应。然后，把

相应的 细胞和 细胞融合，再用 进行筛选，在该培养基上， 未融合的

亲本 细胞和

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实验六细 融合胞组员：

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一实验、设(计步初) 细 融合率胞 ?—— 化进平的高低水 ？ — 亲—关系的远近？缘

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、一实验设(计步) 初 、1极情端：况 –A亲、关系最缘：同种近物

生–B、 亲缘关系远：动物最植物+–(更 端的极情况可是以真+核核)原一、

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验实计(设步初) 2、度梯置设 –鉴时间于系关材料难及，易设梯置时度只虑考 物动分部 – 、同A种(物)动– B、 属同异种 (物动) –C、同亚门 不同 纲(动亚物 ) –、不D界(动物+植同)

物

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、一实设计验初(步 ) 、3验材料选实定:– 、A同种鸡+鸡) – B、同属(异 种鸡+(鸭) 区分?能染可上有色区；待别定，若不可可先用 性染活染其中一种，料一种另染不，合融。– C同亚、门 不同亚纲(+鸡) 兔乳哺动物无，核融时可合辨分2细种

–胞D、 不界同(鸡+草)烟

一

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实验设计、初()步 4、实验方 选定法–电融合

法

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什么动物只？鸡有 算？,了得去懒材搞料了一、

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验设计实(改1) 修3 实、材料验选：定–A、同种 (洋葱洋+)葱– B 同属 异种、洋葱+(菜韭 ) C、–亚纲 同同目不(葱洋烟草+

明明刚出生一个月,却不幸感染了巨细胞病毒,在医院治疗了很长时间,才回家。这天,保健所的医生通知孩子该接种疫苗了。妈妈不知能不能接种,便带着化验单来找我咨询。我看了化验结果是巨细胞病毒感染,而且特异性IgM抗体呈阳性。因此明确告诉儿童家长,目前该新生儿不能接种任何疫苗。那么,什么是巨细胞病毒,儿童感染巨细胞病毒后有什么危害,应如何进行预防接种？

维普资讯

疾病明明剐出生一

防治

长期观察中，发现一些患者在某一时

期发生了十二指肠溃疡。也发现两病个月，却不幸感染了巨细胞病毒，在合并存在的患者，在渍疡愈合后已数

日。炎症仍然存在，示两病有因果而提

医院治疗了很长时

关系。故多数学者相信十二指肠炎可为十二指肠溃疡的前驱期，而溃疡则

间，回家。这天，才

保健所的医生通知 孩子该接种疫苗了。妈妈不知能不能接种，便带着化验单来找我咨询。

可能为整个炎症过程中的一部分， 系

炎症的发展加重表现。本病的临床表现不一，有症状者

缺乏特异性，概括起来，可有以下四种我看了化验结果是

临床表现：①部分患者无症状；②表现巨细胞病毒感染，与慢性胃炎或消化不良相似，如食后而且特异性 I M抗 g上腹饱胀、适或隐痛，嗳气、酸、体呈阳性。因此明不伴反

渝O无锡市疾病预防控制中心主任医师杨永钦

渝

恶心、呕吐等

明明刚出生一个月,却不幸感染了巨细胞病毒,在医院治疗了很长时间,才回家。这天,保健所的医生通知孩子该接种疫苗了。妈妈不知能不能接种,便带着化验单来找我咨询。我看了化验结果是巨细胞病毒感染,而且特异性IgM抗体呈阳性。因此明确告诉儿童家长,目前该新生儿不能接种任何疫苗。那么,什么是巨细胞病毒,儿童感染巨细胞病毒后有什么危害,应如何进行预防接种？

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长期观察中，发现一些患者在某一时

期发生了十二指肠溃疡。也发现两病个月，却不幸感染了巨细胞病毒，在合并存在的患者，在渍疡愈合后已数

日。炎症仍然存在，示两病有因果而提

医院治疗了很长时

关系。故多数学者相信十二指肠炎可为十二指肠溃疡的前驱期，而溃疡则

间，回家。这天，才

保健所的医生通知 孩子该接种疫苗了。妈妈不知能不能接种，便带着化验单来找我咨询。

可能为整个炎症过程中的一部分， 系

炎症的发展加重表现。本病的临床表现不一，有症状者

缺乏特异性，概括起来，可有以下四种我看了化验结果是

临床表现：①部分患者无症状；②表现巨细胞病毒感染，与慢性胃炎或消化不良相似，如食后而且特异性 I M抗 g上腹饱胀、适或隐痛，嗳气、酸、体呈阳性。因此明不伴反

渝O无锡市疾病预防控制中心主任医师杨永钦

渝

恶心、呕吐等

山东大学实验报告 2011年9月23日

姓名 系年级 组别 同组者

科目 细胞生物学实验 题目 细胞渗透性实验 学号

一、实验目的

1.了解溶血现象及其发生机制

2. 了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。 3. 掌握估测、比较各类物质进入细胞速度的方法。

二、实验原理

细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障，是一种半透膜，可选择性地控制物质进出细胞。将红细胞放在低渗溶液中，水分子大量渗透到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，溶液由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血。由于溶质渗透入细胞的速度不同，溶血的时间也不同，因此，发生溶血现象所用的时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。影响物质穿膜能力大小的因素主要有三个：一是物质脂溶性的大小，因为膜骨架是有脂双层分子构成的，所以脂溶性物质易于穿过细胞膜；二是分子体积大小，较小的分子易穿过细胞膜；三是物质带电状况，因为细胞表面一般带电，不带电的物质易进入细胞。

判定细胞溶血不溶血的方

细胞培养实验报告

细胞培养主要包括细胞复苏、细胞传代和细胞冻存三个过程。

一、实验仪器及用品

（一）超净台：

1. 枪头：10 mL、5 mL、1 mL、200 μL、10 μL； 2. 移液枪：同上，及相应的支架；

3. 离心管：50 mL、15 mL、1.5 mL，及相应支架与盛皿； 4. 记号笔； 5. PBS缓冲液； 6. 酒精棉；

7. 废液杯×2：一个装枪头，一个装废液； 8. 封口膜； 9. 排枪卡槽； （二）细胞间：

1. 离心机：中型、小型；

2. 培养瓶：透气的用于培养，密封的用于运输，培养皿； 3. 灭菌离心管、枪头、冻存管等备用；

4. 毛巾、手套、口罩、酒精喷壶、灭菌超纯水、除菌滤膜； 5. 100 μL排枪； 6. 血球计数板、载玻片； 7. 水浴锅； （三）冰箱： 1. 双抗、环丙沙星；

2. 4℃：DMEM、1640、PBS、已配培养基； 3. -20℃：MTT、MTS、DMSO、血清、胰酶； （四）缓冲间： 1. CO2罐、液氮罐； （五）换衣间

1. 实验服、拖鞋、手套、口罩、酒精喷壶；

二、实验前准备

（一）实验前将需要带入的物品洗净、高温灭菌、喷酒精，放入传送窗，将传送窗与细胞间紫外开启杀菌半小时；