dna电泳常见问题分析

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DNA测序常见问题及其分析 - 图文

标签:文库时间:2025-02-17
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测序常见问题及其分析 Collected by RobertoRun,12.10.2008

(From: http://biology.aweb.com.cn/news/2007/9/5/14270898.shtml)

HTUTU

UUTTH

1、PCR产物测序时出现重叠峰

问题图1(模板中有碱基缺失,往往是单一位点(1-1)或两个位点(1-2)碱基缺失导致测序结果移码)

图1-1

图1-2

解决方法:将PCR产物克隆到质粒(如T载体)中挑单克隆测序,或将PCR产物进行PAGE纯化(至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化)后再进行测序。

问题图2(PCR产物不纯,含部分序列一致的两种以上的片段,长度不一)

图2

解决方法:主要原因是PCR产物没有纯化,含有部分序列一致的两种以上长度不一的片段,将PCR产物进行PAGE纯化(至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化)后再进行测序,便可解决。

问题图3(测序引物有碱基缺失)

测序引物有碱基缺失(一般是引物的5'端缺失),和模板的碱基缺失即图1有些类似,所不同的是模板碱基缺失一般是在一段正常测序序列后才出现移码,而引物碱基缺失的话,则从测序一开始就出现移码,表面在图形上便是一开始就是严重的

DNA测序常见问题及其分析 - 图文

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测序常见问题及其分析 Collected by RobertoRun,12.10.2008

(From: http://biology.aweb.com.cn/news/2007/9/5/14270898.shtml)

HTUTU

UUTTH

1、PCR产物测序时出现重叠峰

问题图1(模板中有碱基缺失,往往是单一位点(1-1)或两个位点(1-2)碱基缺失导致测序结果移码)

图1-1

图1-2

解决方法:将PCR产物克隆到质粒(如T载体)中挑单克隆测序,或将PCR产物进行PAGE纯化(至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化)后再进行测序。

问题图2(PCR产物不纯,含部分序列一致的两种以上的片段,长度不一)

图2

解决方法:主要原因是PCR产物没有纯化,含有部分序列一致的两种以上长度不一的片段,将PCR产物进行PAGE纯化(至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化)后再进行测序,便可解决。

问题图3(测序引物有碱基缺失)

测序引物有碱基缺失(一般是引物的5'端缺失),和模板的碱基缺失即图1有些类似,所不同的是模板碱基缺失一般是在一段正常测序序列后才出现移码,而引物碱基缺失的话,则从测序一开始就出现移码,表面在图形上便是一开始就是严重的

DNA和RNA提取常见问题分析及对策

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DNA和RNA提取常见问题

DNA和RNA提取 和 提取 常见问题分析及对策

DNA和RNA提取常见问题

DNA提取专题 DNA提取专题第一部分: 第一部分:DNA提取方法简介 提取方法简介 第二部分: 第二部分:DNA提取常见问题分析及对策 提取常见问题分析及对策

DNA和RNA提取常见问题

前言DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物 是遗传信息的载体, 是遗传信息的载体 信息分子,是分子生物学研究的主要对象。 信息分子,是分子生物学研究的主要对象。为 了进行测序、杂交和基因的表达,获得高分子 了进行测序、杂交和基因的表达, 量和高纯度的DNA是非常重要的前提。 是非常重要的前提。 量和高纯度的 是非常重要的前提

DNA和RNA提取常见问题

DNA提取原则 DNA提取原则保证DNA结构的完整性 纯化后不应存在对酶有抑制作用的物质 排除有机溶剂和金属离子的污染 蛋白质、多糖、脂类等降低到最低程度 排除其他核酸分子的污染

DNA和RNA提取常见问题

DNA提取的几种方法 DNA提取的几种方法染色体DNA的提取 染色体DNA的提取 DNACTAB法 法 SDS法 SDS法 其它

DNA和RNA提取常见问题

DNA提取的几种方法 DNA提取的几种方法非染色体DNA的提取

DNA测序常见问题解析

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Q:为什么我在测序报告上找不到我的引物序列? A:这里分以下几种情况:

1. PCR引物作为测序引物进行测序时,所测序列是从引物3'末端后第一个碱基开始的,而且刚刚开始的碱基由于在毛细管电泳中不能很好地分离而导致准确性下降,所以找不到您的引物序列。

对于较短的PCR产物(<600 bp),可以用另一端的引物进行测序,从另一端测序可以一直测到序列的末端,就可以在序列的末端得到您的引物的反向互补序列。

对于较长的序列,一个测序反应测不到头,因此就只能将您的PCR产物片段克隆到适当的载体中,用载体上的通用引物进行测序。由于载体上的通用引物与您的插入序列之间还有一段距离,因此就可以得到您的完整的引物序列。

由于在测序的起始端总会有一些碱基无法准确读出,因此,您如果想得到您的PCR产物的完整序列,最好克隆后进行测序。

2. 有时质粒做模板进行测序时,由于某些原因,质粒上没有插入外源片段,为空载体,所测的序列完全为载体序列,此时也找不到引物序列。

3. 找不到克隆片段的扩增引物。发生这种情况原因有2个:

(1)您在构建质粒时采用的工具酶的酶切位点距离您的测序引物太近,由于荧光染料的干扰在序列开始的部分会不十分准确。比如pBluescript Ⅱ KS这个质粒如果采用Sac I做工具酶,采用T7引物测序:

那么从T7引物末端到 Sac I的酶切位点只有6个bp,这样酶切位点后的扩增引

日照分析常见问题

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二、基本问题

1、什么是高度角?如何计算高度角?

高度角是指直射阳光与水平面夹角。 计算公式为:

序号 1 2 3 4 5 计算公式 sinh。=cos(φ-δ) h。=90o-(φ-δ) h。=90o-(δ-φ) h。=90o-φ h。=90o+φ 注释 当A=0,t=0(正午12时太阳高度角) φ>δ δ>φ φ>δ春秋分正午 δ>φ春秋分正午 ( 式中h为高度角、δ为太阳赤纬、φ为当地纬度 )

2、什么是方位角?如何计算方位角?

方位角指的是直射阳光与水平投影和正南方位的夹角,正南为0o,午前为负值。 方位角的计算公式为:

序号 1 2 3 4 5 6 7 计算公式 注释 sinh=sinφsinδ+cosφcosδcost -90o≤h≤90o sinA=cosδsint/cosh -180o≤A≤180o或0o≤A≤360o cosA=(sinhsinφ-sinδ)coshcosφ -180o≤t≤180o或0o≤t≤360o sinA。=cosδcost cos A。=-sinδ/cosφ cost。=-tgφtgδ t=15o(n-12) H=0(日出日没时方位角) H=0 负值为日出时角,正值为日没时角

岩土常见问题分析

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常见问题 边坡

1. 在边坡稳定分析中,土体中的孔隙水压力有几种计算方法,他们的区别是什么?

答:两种,分别为近似方法计算、渗流方法计算。区别是:

前者认为孔隙水压力等于静水压力,是一种近似方法;

后者是精确计算孔隙水压力。需要通过读入渗流软件计算结果才能实现。

2. 边坡软件中,如何考虑锚杆作用?

答:软件要求输入锚杆抗拉力、锚杆总长、锚固段长度、锚固段周长、粘结强度等参 数,当锚杆穿过圆弧滑动面时,则锚杆的有效作用力=min{锚杆抗拔力、锚杆抗拉力} 锚杆抗拔力=圆弧滑动面外锚杆锚固段长度*锚固段周长*粘结强度 锚杆抗拉力=锚杆抗拉力

3. 锚杆的抗拉力交互的是标准值还是设计值?粘结强度是标准值还是设计值?

答:标准值和设计值的概念是在锚杆设计时用的,由于软件不设计锚杆,而是应用锚杆提供的锚杆力的

分力作用在滑面上,使得抗滑力增加或下滑力减少,来计算边坡的稳定。

锚杆力=Min﹛抗拉力,锚固体周长*锚固长度*粘结强度﹜。在软件中,交互的数值在软件中被直接使用,软件不做任何修正。

4. 土工布或锚杆的抗拉力和水平间距的关系是什么?

答:软件是先用交互的抗拉力除以水平间距,得出单位宽度的抗拉力,以单位宽度的抗拉力带入计算。 如果土工布时满铺的,

引物合成常见问题分析

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引物合成常见问题分析 1.需要合成多少OD的oligo?

一般来说,20BP 2 OD引物可以做400-500次50ul标准PCR反应,以及 2000—2500 次的测序反应。因此,2 OD 的DNA 量足以进行一般的实验工作。如果是做基因拼接或退火后做连接,1 OD就足够了,无论是 PAGE 纯化,还是 HPLC 纯化,增大每次的纯化量会大大降低制品的纯度。所以,为了保证制品质量,我们一般把每次的纯化量控制在 2 OD 左右。

如何测定引物的OD值:

DNA的量与260nm处的吸光度值(OD值)成正比,因此使用紫外分光光度计定量是最科学的,测定时溶液的光密度最好稀释到0.2-1.0之间。进行OD值测定时,分光光度计上显示的数值为每毫升溶液中的OD值。

例如:您拿到一管引物DNA干粉,用1ml水溶解成母液。取该母液50μL稀释成1ml,在1ml标准比色杯中测定其吸光度为0.25,说明该50μL中含有0.25OD的DNA,也即说明原来1ml母液中含有5OD的DNA。

2. 如何检测Oligo DNA的纯度?

实验室检测时比较方便的作法是进行PAGE凝胶电泳。一般用加有7M尿素的16%的聚丙烯酰胺凝胶进行电泳即可

学生常见问题分析(背诵)

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一、贪玩,自制力差:谁都有自制力差的时候,这不是您孩子一个人的问题,有可能有以下几种原因造成的:

首先,原因应该从小的时候来看,可能以前没有注意对孩子注意力的培养,造成孩子的注意力分散;

其次是生活环境的多样性,造成孩子对环境的适应性弱,久而久之就产生了贪玩的特点,应该说,孩子贪玩是自制力差的根本原因。

第三是没有目标,由于现在生活条件好,孩子不需要操心,什么也不用他来操心,而且家长也不让孩子多操心,他的动手能力和动脑能力都没有得到开发,而他心理上又有能量,需要活动,这样他就寻找自己心理能量的发泄方式,就形成了贪玩的特点

我们提供解决的办法是:

第一,让学生自己有机会沉下心来学习,开始时家长要进行督促,但不要进行强制性安排,而是通过提醒的办法,让他自己去做,过一段时间,他自己能做好了,再放手让学生自己做。

第二,让孩子多动手,家里有些力所能及的活要让他亲手干,多动手是培养自制力的好方法。

第三是要帮他树立目标,男孩子往往都有自己崇拜的英雄,要帮他分析成为英雄的条件是什么,所谓学有榜样,干有劲头,包括他所喜欢的动画英雄,都可以帮他分析,让他有学习的榜样。

第四,要多注意他都玩些什么,有时可以和他一起玩,特别是做父亲的,更要多和孩子沟通,和孩子

小学儿童常见问题分析

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小学儿童常见问题分析<1>——孩子为什么不注意听讲

因为每周二上午接听齐鲁晚报的成长热线,每周四接听山东商报的家长热线,我听到了太多的家长向我反映,孩子不注意听讲,孩子不愿意写作业,孩子粗心马虎,孩子磨磨蹭蹭,孩子撒谎拿钱,孩子有攻击行为,动不动就打人;孩子有退缩行为,在学校里老是受欺负,等等等等,家长为此困惑不已。孩子的这些问题到底是怎样形成的?应该怎样帮助孩子克服这些问题?今天,由于时间的关系,我不可能把这些问题都讲透了。如果家长认为有必要,可以反映给活动中心,再安排一次课/我今天只重点讲两个方面的问题,一个是孩子不注意听讲的问题,一个是孩子粗心马虎的问题。

一、不注意听讲

几乎每个孩子都有不注意听讲、走神的时候。我们这里不讨论一般的不注意听讲问题,我们讨论的是严重的不注意听讲,即经常的、持续的、弥漫性的、公然的、屡教不改的、令老师无法忍受的那一类的不注意听讲。

许多老师遇到严重不注意听讲的情况,都简单地认为是孩子对学习不重视,或者不想学习。老师的对策,就是给孩子大讲学习的重要性,课上提醒、批评、罚站,赶出教室,再解决不了,

1

就请家长。家长呢,听到老师的反映,不是设法了解孩子不注意听讲的原因,而是反复地叮咛孩子,要认真听讲,要认真听讲,可是

常见问题

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1.A:在公司代码分配折旧表时报错?

在公司代码分配折旧表时报错,提示是“3000 的公司代码分录不完全-参见长文本”

希望各位大侠帮我看看。

3000 的公司代码分录不完全-参见长文本

R: a.你把零进项税的代码分配给这个公司代码就可以了 .没有指定非税代码,OBCL

b.据此可能company code 设置有问题,检查一下OBY6

2.a,维护客户科目组:财政供应链管理->现金和流转情况管理->现金管理->主数据->子分类帐科目->客户控制->维护客户科目组

b,创建客户帐户编号范围:财务会计->应收帐目和应付帐目->客户帐户->主数据->创建客户主记录的准备->创建客户帐户编号范围

c,对客户帐户组分配编号范围: 财务会计->应收帐目和应付帐目->客户帐户->主数据->创建客户主记录的准备->对客户帐户组分配编号范围 3.MMPV 物料数据估算期间.开物料帐. 4.MMRV 允许对前期记帐.

5.OX19 维护成本控制范围,把公司分配给控制范围.

6.OMSY 第一次开物料帐可以用OMSY所物料帐开到当前时间,以后就用MMPV开物料帐.

7.FBN1 会计凭证号范围. VN01 SD凭证号码范围.

8.