免疫共沉淀igg作用
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免疫共沉淀
免疫共沉淀 from WHU SKY
1用细胞刮子收细胞,3000rpm,5min,离心,去上清;或者弃培养基后直接用裂解液裂解细胞。从细胞裂解开始要保持低温,冰上或4度冰箱或4度离心机。
2 PBS清洗,重复步骤1
3选择合适的bufer裂解细胞,现加1000XAL(一般核质均分布的建议使用NP-40,核内分布的建议使用High Salt ,只要求拉下抗原的建议使用RIPA buffer),加入1ml Buffer (106-107个细胞),4℃,30min(在功能旋转仪上旋转裂解)。 4 12000rpm,15min,离心取上清(若上清仍浑浊,可重复离心1-2次)50ul上清作为 Input,其它各取400ul分别加入特异性抗体和对照IgG均1ug(可根据抗体效价酌情增减),4℃,旋转2-4h,
加抗体时要计算使用相同抗体的样品数,取(N+1~2)*1ug,用小量裂解buffer
稀释,再均分到各样品中,以保证抗体加入量的一致。 5细胞裂解液和抗体孵育期间,准备Protein G(一个反应20ul纯beads,如果beads原管中液体和beads体积比是1:1,一个样品取总体积40ul,多个样品需要多取1-2个样品的beads/液体混合物)
免疫共沉淀Co-IP步骤
免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤
一、原理:
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。
其优点为:(1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;(2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;(3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为:(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;(3)必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若预测不正
免疫共沉淀Co-IP步骤
免疫共沉淀Co-IP实验操作步骤
一、原理:
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。
其优点为:(1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;(2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;(3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为:(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;(3)必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若预测不正
黄芪多糖的免疫作用
黄芪多糖的免疫作用
黄芪是一种补气药物,含有多糖、生物碱、氨基酸、黄酮类、甙类、微量元素等多种生物活性物质,其中黄芪多糖(Astragalus Polysacharin,APS)的免疫活性尤为突出,即可显著增强免疫功能。目前,黄芪多糖已广泛应用于动物养殖,能提高动物的抗病能力,降低发病率。
1、黄芪多糖对免疫器官的促进作用
免疫器官包括中枢免疫器官和外周免疫器官, 前者包括胸腺、骨髓(禽类为法氏囊);后者包括脾脏、淋巴结、消化道、呼吸道及泌尿生殖道的淋巴结。免疫器官的发育状况会直接影响到机体免疫力的高低。黄芪多糖对动物机体免疫器官的促进作用,主要体现在对动物胸腺、脾脏、法氏囊重量的增加上。黄芪多糖也能对抗免疫抑制剂泼尼松龙或强的松龙所造成的对脾、胸腺、肠淋巴结等免疫器官的萎缩作用,也能对抗环磷酰胺引起的脾脏萎缩。
应用小鼠非麻醉状态下Ⅲ度烧伤模式,观察烧伤后8d细胞免疫功能的变化及AIS体内应用对烧伤后细胞免疫功能的影响。结果显示,烧伤后8d小鼠的脾脏指数(脾脏重量/体重)和胸腺指数(胸腺重量/体重)降低,AIS经腹腔注射(260mg/kg体重,1次/d,连用10d)不仅明显提高正常小鼠的脾脏指数和胸腺指数,还可使烧伤小鼠的脾脏指数和胸腺指数恢复正常
猪的免疫器官及其生理作用 - 图文
主题策划
FEATURE
如何有效提高猪群免疫力策划/孙德林 杨汉春
当前猪的疾病严重威胁着一些猪场,使猪场的经济效益受到很大影响,如何控制疾病的发生成为一个棘手的问题,在目前的饲养管理模式下,引种频繁、过度采用高床饲养、过度消毒、大量抗生素和劣质霉变饲料的使用等等都会导致猪群免疫力的减退。
近年来,我国养猪业集约化、规模化程度不断提高,伴随着发展而来的也有气势汹汹的疫病。一般情况下,猪群机体自身的免疫力可以抵抗病菌的侵害,但是当遇到外界不利因素时,如生产应激、营养不平衡等都会造成猪群免疫力下降,正常的免疫应答不能产生,进而造成猪群发生疫病。如何避免生产中的不利因素造成的猪群免疫力下降,提高猪群生产性能,让我们来共同探讨。
猪的免疫器官及其生理作用
苏丹萍,蒋爱翔,贺东生*
(华南农业大学兽医学院广东省人畜共患病重点实验室,广东 广州 510642)
现代猪业养殖以集约化为发展方向,疫病控制是集约化养猪需要重点解决的问题。在实际生产中,随着各种各样的疫苗及免疫增强药物的广泛使用,为了取得良好的免疫防病效果,需要对猪的免疫器官、免疫细胞和免疫机理有更进一步的了解。猪的免疫器官是猪机体执行免疫功能的组织结构,包括中枢免疫器官和外周免疫器官。两类器官有着极其紧
沉淀平衡
习题 6(沉淀平衡一)
1.解释下列现象。
a. CaF2在 pH=3的溶液中的溶解度较在 pH=5的溶液中的溶解度大;
b. Ag2CrO4在0.0010 mol·L1AgNO3溶液中的溶解度较在0.0010 mol·L1 K2CrO4溶液中
--
的溶解度小;(参考答案) 答:
a. 这是由于酸效应的影响。因为
,随着[H]的增大,
+
也增大,
也随之增大,即溶解度变大。所以,CaF2在 pH=3的溶液中的溶解度较在 pH=5的溶液中的溶解度大。
b. Ag2CrO4的pKsp=11.71
Ag2CrO4在0.0010 mol·LAgNO3溶液中的溶解度s1:
-1
-1
Ag2CrO4在0.0010 mol·L K2CrO4溶液中的溶解度s2:
-1
-1
所以, s1< s2,即Ag2CrO4在0.0010 mol·LAgNO3溶液中的溶解度较在0.0010 mol·L K2CrO4溶液中的溶解度小。
2.某人计算M(OH)3沉淀在水中的溶解度时,不分析情况,即用公式Ksp==[ M3+][ OH]3计算,
-
已知Ksp=1×1032,求得溶解度为4.4×109 mol·L1。试问这种计算方法有无错误?为什么?
---
(参考答案) 答: 错误。
因为按此方法求得[OH-]=4×10 mol·L,即p
第9章 沉淀平衡和沉淀滴定法
无机及分析化学
塔里木大学化学与化工系
第9章
沉淀平衡和沉淀滴定法
Chapter 9 Precipitation-dissolution equilibrium and Precipitation Titration
本章内容§9.1§9.2
溶度积和溶解度沉淀-溶解平衡的移动
§9.3§9.4
影响沉淀溶解度的因素影响沉淀纯度的因素
§9.5§9.6
沉淀的形成条件沉淀分析法
§9.1 溶度积和溶解度实验现象:
实验步骤:
几滴 KI溶液
在上层清液中滴 加KI溶液后,有 黄色沉淀产生。
静置,待上层 液体变澄清
结论解释:PbI2(s) Pb2+(aq) + 2I-(aq)
将少量的 PbI2固 体加入装有适量水 的试管中,震荡。
PbI2
PbI2在水中溶解平衡
Pb2+ l-
尽管PbI2固体难溶于水, 但仍有部分Pb2+和I-离开 固体表面进入溶液,同时 进入溶液的Pb2+和I-又会 在固体表面沉淀下来,当 这两个过程速率相等时, Pb2+和I-的沉淀与PbI2固 体的溶解达到平衡状态即 达到沉淀溶解平衡状 态.PbI2固体在水中的沉 淀溶解平衡可表示为:
溶解
PbI2(s)沉淀
Pb2+(aq) + 2
自由沉淀实验
实验一 自由沉淀实验(累积沉泥量法)
一、实验目的
本实验采用测定沉淀柱底部不同历时累计沉泥量方法,找出去除率与沉速的关系。通过本实验希望达到下述目的:
1.初步了解用累计沉泥量方法计算颗粒物杂质去除率的原理和基本实验方法。 2.加深理解沉淀的基本概念和颗粒物的沉降规律。
二、实验原理
累计沉泥量测定法的具体计算分析如下: 假定沉降颗粒具有同一形状和密度,由此得出两个关系式:
颗粒沉速us与颗粒重量m的函数关系式:
m??(us)m?au?Sb1??u1??S颗粒沉速us与颗粒数目n的函数关系式:
n??(us)n?式中,a,b,?,?是系数,与颗粒形状、密度,水的粘滞性等因素有关,其中
?,?大于1。
由以上二式可得出水样中原始悬浮物浓度C0:【重量g,数目n/mL,浓度=m×n(g/mL)】
ab????1umax0????1水中等于、大于沉速uS,的颗粒浓度为C?us:
umaxabab??????1????1???1C?us??abu?du?(u?u)?C?u?ssmaxs0sus????1????1ab?A, 令 ????1?B则:
(????1)C0C0??mdn?
抗酪氨酸磷酸酶抗体IgG测定试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求新产业
抗酪氨酸磷酸酶抗体IgG 测定试剂盒
(化学发光免疫分析法)
2.性能指标
2.1外观和性状
2.1.1试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏;包装标签应清晰,准确、牢固。2.1.2试剂盒内组分(磁性微球除外)应为澄清的液体,无沉淀、无悬浮物、无絮状物。
2.2净含量
试剂盒各组分净含量应不少于额定装量(见表1)。
表1 各组分额定装量
2.3批内精密度
批内变异系数(CV)应≤8%。
2.4批间精密度
批间变异系数(CV)应≤15%。
2.5准确度
回收率应在(90.0%~110.0%)范围内。
2.6空白限
空白限应≤ 2.5 U/mL。
2.7线性
在(3.5~280.0)U/mL 浓度范围内,线性相关性系数(r)绝对值应大于0.9900。
2.8校准品
2.8.1校准品准确度
相对偏差应在±10% 范围内。
2.8.2校准品瓶内重复性
校准品瓶内重复性(CV)应≤8%。
2.8.3校准品瓶间均一性
校准品瓶间均一性(CV)应≤10%。
2.9质控品
2.9.1质控品准确度
质控品1 每次测定结果均应在[14.1~26.1] U/mL 浓度范围内,质控品2 每次测定结果均应在[36.9~68.5] U/mL 浓度范围内。
2.9.2质控品瓶内重复性
质控品瓶内重复性(CV)应≤8%。
2.9.3质
沉淀池
沉淀池
沉淀池是利用重力沉降作用将密度比水大的悬浮物颗粒从水中去除的处理构筑物,是污水处理中应用最广泛的处理单元之一,可用于污水的一级处理、生物处理的后处理以及深度处理。按水流方向划分,沉淀池可分为平流式、辐流式和竖流式三种,还有根据“浅层理论”发展出来的斜板(管)沉淀池。
沉淀池包括进水区、沉淀区、缓冲区、污泥区和出水区五个部分。进水区和出水区的作用是使水流均匀地流过沉淀池,避免短流和减少紊流对沉淀产生的不利影响,同时减少死水区、提高沉淀池的容积利用率;沉淀区也称澄清区,即沉淀池的工作区,是可沉淀颗粒与污水分离的区域;污泥区是污泥贮存、浓缩和排出的区域;缓冲区则是分隔沉淀区和污泥区的水层区域,保证已经沉淀的颗粒不因水流搅动而再行浮起。 1、 基本概念
(1) 沉淀池的表面水力负荷,即沉淀池单位时间单位面积所承
受的水量,单位是m3/(m2.h)。根据表面水力负荷可以确定沉淀池澄清区的面积和有效水深。
沉淀池的水面上升流速和其水力负荷在数值上是相同的,但两者的单位和意义上不同,上升流速的单位是m/h。比如说在竖流式沉淀池中,只有沉淀速度大于沉淀池水面水面上升流速的杂质颗粒才能在沉淀池中去除,而沉降速度等于或小于沉淀池水面上升流速的杂质颗粒会随