微生物的生理生化反应

微生物鉴定中的生理生化试验

一．实验目的

1. 证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不

同的酶系统。

2. 掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。

3. 了解糖发酵的原理，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 4. 了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。

二．实验原理

由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。具体的原理如下：

1. 大分子水解试验

微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质分解后，才能被微生物利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输至细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖，脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸，蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等，这些过程均可通过观察细菌菌落周围的物质变化来证实。如淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的区域，用碘液测定时，不再产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。脂肪水解后产生脂肪酸可改变培养基的pH，使

实验十 一 IMViC与硫化氢试验

指导教师：李海花 周六 第三组

学号：060122010041 姓名：宋天佳 专业：2010级水产养殖 学号：030212010025 姓名：皇 昊 专业：2010级化学1班 学号：060122010055 姓名：续鹏辉 专业：2010级水产养殖

一、实验目的

了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。 二、实验原理

IMViC是I－吲哚（indol test）、M－甲基红（methyl red test）、V－伏-普（Voges-Prolauer test）和C－柠檬酸盐（citrate test）4个实验的缩写。这4个实验主要用来快速鉴别产气杆菌与大肠杆菌，多用于水的细菌检查。大肠杆菌虽非致病菌，但在饮用水时若超过一定指标，则表示水质受粪便污染。产气杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水是要将两者分开。硫化氢（H2S）实验也是检查肠道细菌的生化实验。 （一）吲哚试验（indol test）

吲哚试验是用来检测吲哚试验的产生，有些细菌分解培养基中的色氨酸生成吲哚（靛基质），经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红

实验十 微生物鉴定中常用的生理生化试验

摘要

本次实验包括大分子水解试验、糖发酵试验和IMViC试验（吲哚、甲基红试验）三类试验，根据要求本实验使用六种培养基分别对所需菌种组合进行了大约24h的培养，之后按照实验要求进行各个试验。最后观察到了实验现象，了解了所用菌种鉴别的方法和原则。

关键词

微生物鉴定；生理生化试验；大分子水解试验；糖发酵试验；IMViC试验

前言

类的微生物有着不同的代谢类型，例如对一些物质的分解能力及分解代谢的产物的不同反映出他们不同的生理特征，这些特征可以用来对不同种类微生物进行鉴定和分类。因此可以对微生物的不同生化反应进行试验，以此证明微生物生理特征的多样性，证明微生物分类鉴别的依据。生理生化试验相比其他鉴别方法而言相对简便、快捷、经济实用，在一般的实验室中都可以进行，因此在微生物种类的初步鉴别中被广泛使用。

一、 实验目的

1、大分子水解试验

证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统，掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 2、糖发酵试验

了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中的重要作用，掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 3、IMViC试验

了解IMViC的原理

微生物鉴定中常用的生理生化试验的观察

姓名：俞华军 班级：09生科三班 学号：200900140157 日期：2010/12/04

组别：四 同组者：谢英健 张刚刚 岳永胜 余振洋

一．实验目的

1．证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同

微生物有着不同的酶系统。

2．掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 3．了解糖发酵的原理在肠细菌鉴定中的重要作用。 4．掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。

5．了解吲哚、甲基红试验的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法

二．实验原理

1.大分子物质的水解试验

微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质水解后，才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输至细胞内。

A．淀粉水解试验

某些细菌能够分泌一种胞外酶,即淀粉酶。它可将淀粉水解为小分子的糊精、麦芽糖和葡萄糖，再被细菌吸收利用。

淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能产淀粉酶的微生物在含淀粉培养基上培养后，由于淀粉被细菌的淀粉酶水解，遇碘不再变蓝色，培养基上菌体周围会出现无色透明圈。据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。

如菌苔周围

微生物鉴定中常用的生理生化试验的观察

姓名：俞华军 班级：09生科三班 学号：200900140157 日期：2010/12/04

组别：四 同组者：谢英健 张刚刚 岳永胜 余振洋

一．实验目的

1．证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同

微生物有着不同的酶系统。

2．掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 3．了解糖发酵的原理在肠细菌鉴定中的重要作用。 4．掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。

5．了解吲哚、甲基红试验的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法

二．实验原理

1.大分子物质的水解试验

微生物对大分子物质如淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须依靠产生的胞外酶将大分子物质水解后，才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合物，使其能被运输至细胞内。

A．淀粉水解试验

某些细菌能够分泌一种胞外酶,即淀粉酶。它可将淀粉水解为小分子的糊精、麦芽糖和葡萄糖，再被细菌吸收利用。

淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能产淀粉酶的微生物在含淀粉培养基上培养后，由于淀粉被细菌的淀粉酶水解，遇碘不再变蓝色，培养基上菌体周围会出现无色透明圈。据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。

如菌苔周围

微生物与生化药学专业

2009年硕士研究生入学复试具体实施办法

生物与制药工程学院“微生物与生化药学”专业2009年硕士研究生入学复

试办法按《武汉工业学院2009年硕士研究生复试办法》执行，具体实施办法如下：

一、复试内容

1、综合面试：包含外语听说能力测试、专业知识考核和面试及实践环节测试等复试内容。

（1）外语听说能力测试：主要包括专业外语和日常用语两方面的考核，采取口试形式，满分为100分。

（2）专业知识考核：满分为100分。重点考查考生对专业理论与技能及相关知识的掌握是否扎实、深厚和宽广，是否具备本专业研究生入学的基本要求。考核设天然药物资源利用、药物设计与合成、药物的微生物转化和提取、微生物与生化药物四个方向的问题。

（3）面试及实践环节测试：采取口试形式，满分为100分。主要考查政治思想品德、专业综合知识、实践动手能力、科学思维、创新能力和反应的能力等。

（4）计分方法：总分＝外语听说能力测试成绩×20%＋专业知识考核成绩×40%＋面试及实践环节测试成绩×40%。

说明：考生复试程序为：首先进行专业知识考核的考试，然后进行逐个面试。面试部分先进行英文自我介绍，导师提问，最后进行实践环节测试。

2、同等学历加试

同等学历加

微生物鉴定之生化实验大全

入社群：听大咖微课+看医学视频+会议直播微生物鉴定之生化实验大全

不同的细菌具有各自的独特的酶系统，因而对底物的分解能力各异，其代谢的产物也不相同。这些代谢产物又具有不同的生物化学特性，可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌。掌握各种生化反应的原理和应用是细菌鉴定的基础。生理生化特性的测定主要根据Shirling＆Gottlieb《International Journal of Systematic Bacteriology》中鉴定的有关试验。

（一）碳水化合物代谢实验： 糖（醇、苷）类发酵实验

（1）原理：细菌分解糖的能力与该菌是否含有分解某种糖的酶密切相关，故分解糖的能力各不相同，细菌分解糖类后的终产物亦不一致，在含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气，使培养基颜色改变，从而判断细菌是否分解某种糖或其他碳水化合物。

（2）基本培养基：在培养基中加入0.5%-1%的糖类（单糖、双糖、或者多糖）、醇类（甘露醇、肌醇）苷类（水杨苷、菊糖等）。培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型。

（3）实验方法：取某一种细菌的24h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基

实验三 微生物生化需氧量（BOD5）的测定

实验目的：了解生化需氧量的测定方法。 实验材料：

（一）器材

恒温培养箱（20℃?1℃）、溶解氧瓶、三角瓶、移液管、滴定管、量筒、容量瓶、抽气泵等。

（二）材料准备

1．pH7.2磷酸盐溶液 称取21.75g化学纯K2HPO4，8.5g化学纯KH2PO4，33.4g化学纯Na2HPO4?7H2O，1.7g化学纯NH4Cl，溶解于蒸馏水中，并定容至1L，pH7.2。

2．MgSO4溶液 称取22.5g化学纯MgSO4?7H2O，溶于蒸馏水中，并定容至1L。 3．CaCl2溶液 称取27.5g化学纯CaCl2，溶于蒸馏水中，并定容至1L. 4．FeCl3溶液 称取0.25g化学纯FeCl3?6H2O，溶于蒸馏水中，并定容至1L。 5．稀释水的制备

在20L大玻璃瓶中加入18L蒸馏水，嚗气1~2天，使溶解氧量达8mg/L，达到饱和状态。使用前，每升水加入FeCl3溶液、FeCl3溶液、MgSO4溶液、磷酸缓冲液各1mL，混匀，调节pH至7.2，稀释水的BOD5 ?0.2mg/L。

6．接种稀释水

稀释水应含有能进行生物氧化的微生物，否则应在稀释水中加入一些生活污水，作为微生物接种。

取适量生活污水在20℃

微生物学假期综合教学实习

实习时间： 2013年 6 月 25 日 开始

实习班级： 应技1101-1102 人

生命科学技术学院微生物教研室

微生物教学实习基本实验流程

第 配制牛肉膏固体培养基、3倍和单倍乳糖发酵液， 一准备无菌水及各种器皿、器材 天

）

灭菌

采集样品

（

第按要求做10倍梯度稀释

二

天

）配制伊红美测样品的细菌总数： 乳糖培养基初发酵试验：

样品的稀释液涂布按实验要求将稀释液接入兰固体和E.C液 牛肉膏平板 3倍、单倍乳糖发酵培养液 体培养基

37OC培养 37OC培养 灭菌

数平板上菌落看乳酸发酵 倒伊红美兰平板 （数，计算样品的细结果，查MPN表 第菌总数 三 检验乳酸发酵管中产酸产气的样品天 ）

伊红美兰平板划线 接E.C管

37OC培养 44.5OC培养

（挑有金属光泽、看结果，鉴定是 第

无光泽的菌落 否有粪大肠杆菌 四

天接单倍乳糖发酵管 革兰氏染色 ）

37OC培养

看复发酵结果 （ 第 综合本实验的六项结果（细菌总数、乳糖管初发酵（MPN）、伊红美兰平板鉴定、 五E.C平板鉴定、革兰氏染色、乳糖复发酵），写出实验报告 天清洗器材，并做好室内清洁。 ） （

微生物学综合教学实习

学习目

第四章 病毒

1 病毒具有哪些特点？病毒壳体有哪几种对称类型？

答：①体积微小 ②无完整的细胞结构，主要成分是核酸跟蛋白质 ③严格活细胞内寄生 ④对干扰素敏感，对抗生素不敏感 ⑤繁殖方式是复制，且具有感染性；有螺旋对称型、二十面体对称型、复合对称型。

2 什么是病毒的一步生长曲线？包括几个期？各有何特点？

答：主要以烈性噬菌体为例，一步生长曲线是定量描述烈性噬菌体生长规律的曲线，反映了每种噬菌体的三个重要的特征参数：潜伏期、裂解期的长短及裂解量。包括潜伏期、裂解期和平稳期，潜伏期细胞正处于复制噬菌体核酸和合成蛋白质衣壳的阶段，裂解期宿主菌迅速裂解、溶液中噬菌体颗粒急速增加的阶段，平稳期宿主细胞已经全部裂解，溶液中噬菌体效价达到最高峰的时期。

3 以噬菌体为例，说明病毒的增殖过程。

答：①吸附和侵入：噬菌体感染细菌时，其尾部为吸附器官，能识别宿主菌表面的特殊受体，然后分泌酶类溶解细胞壁，使细胞壁出现小孔，讲头部的核酸注入宿主菌内，蛋白质外壳留在宿主菌细胞外；②生物合成：进入宿主菌内的噬菌体核酸，首先转录翻译产生早期蛋白，进行晚期转录并复制子代核酸，再转录产生噬菌体的结构蛋白，子代核酸和蛋白质按一定程序装配成完整的子代噬菌体颗粒；③当宿主菌细胞