氰甲基化反应

哺乳动物线粒体中DNA甲基化转移酶1，胞嘧啶甲基化和胞嘧啶羟甲基化

Mitochondrial DNA (mtDNA) has been reported to contain 5-methylcytosine (5mC) at CpG dinucleotides, as in the nuclear genome, but neither the mechanism generating mtDNA methylation nor its functional signi ficance is known. We now report the presence of 5-hydroxymethylcytosine (5hmC) as well as 5mC in mammalian mtDNA, suggesting that previous studies underestimated the level of cytosine modification in this genome. DNA methyltransferase 1 (DNMT1) translocates to the mitochondria,driven by a

（19）中华人民共和国国家知识产权局

（12）发明专利说明

书

（10）申请公布号

CN106866661B

（43）申请公布日 2019.02.22（21）申请号CN201710086047.8

（22）申请日2017.02.17

（71）申请人南京师范大学

地址210097 江苏省南京市鼓楼区宁海路122号

（72）发明人孙培培;刘平;昌青;刘正易

（74）专利代理机构南京苏高专利商标事务所(普通合伙)

代理人郑立发

（51）Int.CI

权利要求说明书说明书幅图（54）发明名称

一种氰甲基化咪唑并吡啶类化合物的制备方法

（57）摘要

本发明公开了一种氰甲基化咪唑并吡啶类

化合物的制备方法，以咪唑并[1,2?a]吡啶类化合

物为原料，将其与溴乙腈或者碘乙腈在光催化作

用下反应，即得。相对于现有技术，本发明方法

避免了使用剧毒品氰化钾或者氰化钠、碘甲烷，

且在制备咪唑并[1,2?a]吡啶类化合物的氰甲基化

产物的过程中，将该化学转化由原来的三步缩短

至一步。本发明制备路线短，制备方法简单，生

产成本低，产物收率高，减少了溶剂的使用及排

实战经验：

甲基化检测方法总结——（亚硫酸氢盐修饰后测序法）

第一部分 基因组DNA的提取

这一步没有悬念，完全可以购买供细胞或组织使用的DNA提取试剂盒，如果实验室条件成熟，自己配试剂提取完全可以。DNA比较稳定，只要在操作中不要使用暴力，提出的基因组DNA应该是完整的。

此步重点在于DNA的纯度，即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提取过程中需使用蛋白酶K及RNA酶以去除两者。 使用两者的细节：

1：蛋白酶K可以使用灭菌双蒸水配制成20mg/ml；

2：RNA酶必须要配制成不含DNA酶的RNA酶，即在购买市售RNA酶后进行再处理，配制成10mg/ml。否则可能的后果是不仅没有RNA，连DNA也被消化了。两者均于-20度保存。 验证提取DNA的纯度的方法有二： 1：紫外分光光度计计算OD比值； 2：1%-1.5%的琼脂糖凝胶电泳。

我倾向于第二种方法，这种方法完全可以明确所提基因组DNA的纯度，并根据Marker的上样量估计其浓度，以用于下一步的修饰。

第一天只需下午半天即可 下午3点开始，先配好试剂再开始做实验 需提前消毒的物品：1.5mlEP管一大盒，双蒸水200ml，15ml离心管，开水浴锅， 第二部分 亚硫酸氢钠修饰

河南农业科学

ＤＮＡ甲基化检测方法研究进展

邢宝松１，郭启祥２，马

强１，阎祥洲１，白红杰１

（１．河南省农业科学院畜牧兽医研究所，河南郑州４５０００２；２．河南省进出境检验检疫局，河南郑州４５０００３）

中图分类号：Ｑ７５文献标识码：Ｂ文章编号：１００４—３２６８（２００７）１１—００１７—０３

分离与杂种优势有关的基因提供一些新的思路。因此，ＤＮＡ甲基化的研究逐渐成为新的研究热点。随着对甲基化研究的不断深入，各种各样甲基化检测方法被开发出来以满足不同类型研究的要求。因此，探讨甲基化形成与改变的可能机制，建立准确性高，灵敏度高，操作简单的ＤＮＡ甲基化检测方法，对探讨甲基化调控规律，提高哺乳动物体细胞核移植效率、揭示杂种优势的表观遗传学基础意义重大。

１１．１

ＤＮＡ甲基化是一种重要的遗传外修饰，是表观遗传学（ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ）的重要组成部分［１］。它参与了动物胚胎发育、基因印迹和Ｘ染色体失活等过程，在基因表达的调控中具有重要作用，异常甲基化可以导致肿瘤的形成。ＤＮＡ甲基化与组蛋白去乙酰化协同调节基因的表达。ＤＮＡ甲基化可以随着外界环境因素的变化而改变。在哺乳动物胚胎移植和体细胞核移植（ＳＣＮＴ）过程中，人工操作会引起ＤＮＡ甲基化修饰改变，从而影响成功

河南农业科学

ＤＮＡ甲基化检测方法研究进展

邢宝松１，郭启祥２，马

强１，阎祥洲１，白红杰１

（１．河南省农业科学院畜牧兽医研究所，河南郑州４５０００２；２．河南省进出境检验检疫局，河南郑州４５０００３）

中图分类号：Ｑ７５文献标识码：Ｂ文章编号：１００４—３２６８（２００７）１１—００１７—０３

分离与杂种优势有关的基因提供一些新的思路。因此，ＤＮＡ甲基化的研究逐渐成为新的研究热点。随着对甲基化研究的不断深入，各种各样甲基化检测方法被开发出来以满足不同类型研究的要求。因此，探讨甲基化形成与改变的可能机制，建立准确性高，灵敏度高，操作简单的ＤＮＡ甲基化检测方法，对探讨甲基化调控规律，提高哺乳动物体细胞核移植效率、揭示杂种优势的表观遗传学基础意义重大。

１１．１

ＤＮＡ甲基化是一种重要的遗传外修饰，是表观遗传学（ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ）的重要组成部分［１］。它参与了动物胚胎发育、基因印迹和Ｘ染色体失活等过程，在基因表达的调控中具有重要作用，异常甲基化可以导致肿瘤的形成。ＤＮＡ甲基化与组蛋白去乙酰化协同调节基因的表达。ＤＮＡ甲基化可以随着外界环境因素的变化而改变。在哺乳动物胚胎移植和体细胞核移植（ＳＣＮＴ）过程中，人工操作会引起ＤＮＡ甲基化修饰改变，从而影响成功

DNA甲基化检测技术应用与技术比较

DNA甲基化作为表观遗传学研究的重要范畴，已经越来越受到研究者的关注。近些年来，随着DNA甲基化与组蛋白甲基化的联合作用机制、RNA干扰机制及去

甲基化机制的发现，使得DNA甲基化研究受到广泛关注，从医学领域扩展到动植物研究当中，同时在研究方法上也取得了很大的突破。现在用于DNA甲基化检测

的方法大概有十多种，从应用上来分，大致可以分成两类：全基因组甲基化分析及特异位点甲基化检测。下面，我们就这两大类检测技术进行分析比较，以便于在实际的科研工作中进行选择。

一、全基因组甲基化检测技术

1. 基于芯片平台的全基因组甲基化筛选

芯片平台作为目前比较成熟的筛选工具，已经在很多领域有了相应的应用。多家芯片公司在DNA甲基化这块儿有了相应的产品提供，其中应用最为广泛的就

Agilent平台和Illumina平台，相应的产品包括Agilent

Human CpG Island Microarray

Kit，Infinium HumanMethylation27 BeadChip和Infinium HumanMethylation450K

BeadChip。另外Roche NimbleGen和A

DNA甲基化研究

维普资讯

逢 H R DT S(ei ) 20年 3 3() 9—33 EEI A Bi g 08 j n月，03: 5 0 2

I N 23 7 W W h aee r S 5- 7 S0 92 W .i gn.l cn cDoI 1 .7 4S J.0 52 0 .0 9 : 0 3 2 I P. 1 0 .0 80 2 5

综述

芯片技术与肿瘤中 D A甲基化研究 N田筱青，孙丹凤，张燕捷，房静远 上海交通大学医学院附属仁济医院，上海市消化疾病研究所，海 2 0 0上 00 1

摘要：D NA甲基化是表观遗传学的一个重要部分。它参与基因转录调控，x染色体失活，发育调控及细胞分化的过程。异常的 DNA甲基化与癌症的发生密切相关。芯片技术的发展为高通量研究 D NA甲基化提供了新的 方法。各种芯片技术以不同的 DN预处理方法为基础，包括免疫沉淀和限制性内切酶等。免疫沉淀方法特异 A性高，而限制性酶的方法具有较高的灵敏度。虽然每种方法都有一定的局限性，但是它们为在基因组范围研究 癌症的甲基化谱提供了更多的选择。 关键词： DNA甲基化；芯片；免疫沉淀；限制性内切酶；癌症

M i r a r y ba e e ho o i ntf

。。，？。ｊ

ｉ

ｊ。二ｊ一．ｊ。一｜。ＲｅｖｉｅｗｓａｎｄＭｏｎｏｇｒａｐｈｓ

ＰＩｌｌ，：豢蕊嚣乞…记ｓ

ＷＷＷ．ｐｉｂｂ．ａｃ．ｃｎ

ＤＮＡ甲基化的生物信息学研究进展

凡时财１，２）张学工１）”

（１）生物信息学教育部重点实验室，清华信息国家实验室牛物信息学研究部，清华大学自动化系，北京１０００８４；

≈电子科技大学自动化工程学院，成都６１００５４）

摘要作为重要的表观遗传学现象之一，ＤＮＡ甲基化对基因的表达发挥重要的调控功能．随着高通量检测技术的不断发展，对ＤＮＡ甲基化的生物信息学研究也成为ＤＮＡ甲基化研究中的一个非常活跃的热点．对生物信息学在ＤＮＡ甲基化状态的预测、ＣｐＧ岛不易被甲基化的机制研究、探索ＤＮＡ甲基化同其他表观遗传学现象之间的关系以及ＤＮＡ异常甲基化同癌症的发生和发展之间的关系等方面的研究进展进行综述．

关键词ＤＮＡ甲基化，生物信息学研究，ＣｐＧ岛，预测，机制，表观遗传学学科分类号Ｑ３，Ｑ６，Ｑ７

ＩＮ）Ｉ：１０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．１２０６．２００８．００４２６

在多细胞生物的发育过程中，细胞如何分化很大程度上取决于其内部的基因表达模式，而基因的表达模式不仅仅依赖于细胞内转录因子的作用，还同表观遗传学因素密切相关．表观遗传学是指在不改变ＤＮＡ

植物生理学通讯　　第４３卷　第１期，２００７年２月85

光暗条件下大蒜ＤＮＡ甲基化差异的初步研究

何艳霞，王子成＊，曹红平，张成婉

河南大学农业生物技术研究所，河南开封４７５００１

提要：用甲基敏感扩增多态性（ＭＳＡＰ）技术分析光暗条件下生长的大蒜ＤＮＡ甲基化水平差异。结果表明，用　８对引物组合扩增出３４３条带，完全一致的带型２４０条，不一致的１０３条。在不一致的条带中，光照条件下相同的４７条带与黑暗条件下相同的带型有差异，与黑暗相比光照下出现的去甲基化带２８条，有５６条差异带在２个处理内个体间也有差异。总的趋势是光照引起大蒜ＤＮＡ去甲基化。

关键词：ＤＮＡ甲基化；甲基敏感扩增多态性；大蒜

Initial Study of DNA Methylation Difference of Garlic (Allium sativum L.)Growing in Light and Darkness

HE Yan-Xia, WANG Zi-Cheng*, CAO Hong-Ping, ZHANG Cheng-Wan

Institute of Agricultural Biotechnology, Henan University, Kaifeing, Henan 4

95

　第21卷　第1期　2008年1月

医学研究生学报

JournalofMedicalPostgraduates

Vol.21　No.1

Jan.2008

综　　述

营养与肿瘤表观遗传学关系的

研究进展———DNA腾丽娟,　;(515041)

摘要:　DNA,在肿瘤细胞中基因组甲基化模式常常发生改变;作为DNA甲基化的状况,与肿瘤的发生关系密切。作者着重阐述营养、甲基化和肿瘤三者的关系:描述甲基化和相关机制,探讨肿瘤在甲基化水平上发生、发展的分子机制,初步总结与甲基化相关的营养素在分子水平上对肿瘤发生、发展的影响机制,并在群体营养摂入水平上对肿瘤预防提出若干建议。关键词:　营养;　肿瘤;　DNA甲基化

中图分类号:　R735.1　　　文献标识码:　A　　　文章编号:　100828199(2008)0120095203

3

Relationshipofnutritionwithcancer

anditsepigeneticDNAmethylationmechanism

TENGLi2juan,ZHANGChang2songreviewing,LIKechecking

(DepartmentofMolecularEpidemiology,ShantouUniver