酶抑制常数

第二节 酶促反应动力学

一、酶促反应

1913年，Michaelis和Menten根据Henri等提出的酶-底物复合物学说，用简单的快速平衡或准平衡概念推导了单底物的酶促反应方程，即米-曼氏方程（Michaelis-Menten equation）。酶促反应可表示为：

k1 k2

E + S ES E + P

k-1

酶 底物 酶-底物复合物 酶 产物

根据公式进行推导，反应速率（V0或v）与底物浓度[S]、酶浓度[E]和产物浓度[P]的关系如下：

Vo?[S][P]k2[E][S]Vmax[S] ???dtdtKm?[S]Km?[S]式中Vmax为最大反应速率。这一公式与根据快速平衡学说推导的米-曼氏原始方程形式相同，区别在于用米氏常数Km取代了复合物ES的解离常数Ks，因此仍称

钙调磷酸酶抑制剂

（一）器官移植排斥反应

1、移植排斥反应

人体的免疫系统对各种致病因子有着非常完善的防御机制，能够对细菌、病毒、异物、异体组织、人造材料等“异己成分”进行攻击、破坏、清除，这种复杂的免疫学反应是人体非常重要的一种保护机制。受者进行同种异体组织或器官移植后，外来的组织或器官等移植物作为一种“异己成分”被受者免疫系统识别，后者发起针对移植物的攻击、破坏和清除，这种免疫学反应就是移植排斥反应（transplant rejection）。移植排斥反应是影响移植物存活的主要因素之一。

移植排斥反应是非常复杂的免疫学现象，涉及细胞和抗体介导的多种免疫损伤机制，发生原因主要是受体和移植物的人类白细胞抗原HLA（human leucocyte antigen）不同。因此，供者与受者HLA的差异程度决定了排异反应的轻或重。除同卵双生外，二个个体具有完全相同的HLA 系统的组织配型几乎是不存在的，因此在供受者进行配型时，选择HLA配型尽可能地接近的供者，是减少异体组织、器官移植后移植排斥反应的关键

2、发病机制

排斥反应的发生机制主要包括细胞免疫和体液免疫两个方面。临床最常见的急性排斥反应主要由细胞免疫介导，而超急性排斥反应和慢性排斥反应主要由

具有抗炎、抗过敏活性磷脂酶

抑制剂的研究进展*

王 寅 朱再明

(辽宁师范大学化学系 大连 116029)

刘 彦

(大连医科大学生化教研室 大连 116027)

摘 要 磷脂酶参与细胞跨膜信息传递，磷脂酶A2还是机体炎症、过敏介质产生的关键酶。因此，磷脂酶抑制剂的合成研究对研究细胞表达某种功能的信息传递机制及与磷脂酶A2激活相关的疾病治疗机制和药物研究具有重要意义。本文主要综述了近期有关磷脂酶A2抑制剂的合成、结构、抑效性能、构效关系及应用前景等,对磷脂酶C和磷脂酶D的抑制剂作了简要介绍。

关键词 磷脂酶A2 磷脂酶C 磷脂酶D 磷脂酶抑制剂

Recent Advances in Phospholipase Inhibitors

Wang Yin Zhu Zaiming

(Department of Chemistry, Liaoning Normal University, Dalian 116029,

China) Liu Yan

（Department of Biochemistry， Dalian Medical University, Dalian 116027,

China) Abstract Phospholipase A2,

2.2实验方法

2.2.1α-葡萄糖苷酶抑制活性的测定方法 2.2.1.1 反应溶液的制备

（1）配制底物PNPG溶液：精确称取 0.3766gPNPG，加适量0.1mol/L磷酸缓冲液（pH为6.8）溶解，再用容量瓶准确定容到50mL，配制成25mmol/L的母液。将母液分别稀释成0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mmol/L7个不同梯度的标准品溶液，备用。 （2）配制α-葡萄糖苷酶的酶溶液：将冻干酶粉（酶活力为14u/mg）用0.01mol/L磷酸缓冲液（pH为6.8）溶解，配制成2u/mL的母液。再将酶液分别稀释，配制成0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0u/mL的酶溶液，备用。

（3）配制DNJ标准溶液（抑制剂）：精确称取 0.0010g DNJ 标准品，用容量瓶准确定容到10mL，配制成1000μg/mL DNJ标准母液。将母液分别稀释成、1、5、10、20、40、60μg/mL六个不同梯度的标准品溶液，备用。

（6）0.2mol/L的 Na2CO3：称取2.16g Na2CO3于烧杯中，加入适量蒸馏水溶解，并定容到100mL，4℃下保存，备用。 2.2.1.2 PNP标准曲线的

（19）中华人民共和国国家知识产权局

（12）发明专利申请

（10）申请公布号

CN104557861A

（43）申请公布日 2015.04.29（21）申请号CN201410718124.3

（22）申请日2008.12.19

（71）申请人阿维拉制药公司

地址美国马萨诸塞州

（72）发明人拉塞尔·彼得;尤斯温德·辛格;阿瑟·F·克卢格;牛德强;乔立新;绍莫尔·高希（74）专利代理机构北京律盟知识产权代理有限责任公司

代理人林斯凯

（51）Int.CI

C07D401/12;

C07D405/14;

C07D417/14;

C07D498/18;

C07D487/04;

C07D401/14;

C07D495/04;

C07D409/14;

C07D403/04;

C07D498/22;

C07D498/04;

权利要求说明书说明书幅图（54）发明名称

主要介绍一些蛋白酶之类的测试方法

NY

中华人民共和国农业行业标准

NY/T1103.2－2006

转基因植物及其产品食用安全检测 抗营养素第2部分：胰蛋白酶抑制剂的测定

Safety assessment of genetically modified plant and derived products

Part 2: assay of anti-nutrients pancreatic typsin inhibiter

2006-07-10发布 2006-10-01实施

中华人民共和国农业部 发布

主要介绍一些蛋白酶之类的测试方法

前 言

本标准由中华人民共和国农业部提出。

本标准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、农业部科技发展中心、中国农业大学、天津市卫生防病中心。

本标准主要起草人：杨月欣、王竹、韩军花、李宁、汪其怀、黄昆仑、刘克明、刘培磊、连庆。

本标准首次发布。

主要介绍一些蛋白酶之类的测试方法

转基因植物及其产品食用安全检测 抗营养素第2部分：胰蛋白酶抑制剂的测定

1 范围

本标准规定了转基因植物及其产品中胰蛋白酶抑制剂的测定方法。

目录

摘要 .................................................................................................................................................. 1 关键词 .............................................................................................................................................. 1 Abstract ............................................................................................................................................. 1 Key words .............................................................

篇一：过氧化氢酶动力学常数测定

实验项目二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定

姓 名： 赵家熙 指导教师： 谭志文 实验室： 6503 组员：①章恒炯 ② ③ 成绩： 第三部分：实验记录与分析 一、酶活力测定 （一）原始数据

1.样品原始质量：5.032g 2.标定数据：

（1）KMnO4质量数及配制：158 （2）Na2C2O4质量数：134 （3）标定数据：0.02mol/L

（4）KMnO4实际浓度：0.019mol/L3.样品滴定数据

消耗高锰酸钾溶液（ml）：实验（1）0.65

实验（2）0.50 对照（1）1.45 对照（2）1.30

（二）结果计算

1．换算系数（1mL KMnO4溶液相当于多少mg H2O2）

1.7

2.样品酶活计算（每克鲜重样品1min内分解H2O2的毫克数表示：mg H2O2/g?min）

(A?B)?VT?1.7FW?V1?t酶活(mgH2O2/g·min)=

酶活(mgH2O2/g·min)=0.218

（A-B）=0.8 VT=20.25FW=5.032V1=2.5mlt=10min

二、动力学常数的测定 （一）原始数据

（二）求出各管反应前的底物浓度[S]0和反应速度

V0

（三）以1/V0对1/[S]0作图（用exc

HMG-CoA还原酶抑制剂的合成(上)

维普资讯 http://www.77cn.com.cn

中国医药工业杂志 C iee o ra o h r c uias 0 4 3 1 hn s un l f ama et l 2 0,5(0 J P c ,,,,,,,,,,,,,j J f

综述与专论；‘‘‘‘‘‘‘‘‘‘‘‘‘ -

H—o MG C A还原酶抑制剂的合成 ( 上)蔡正艳，宁奇，周伟澄∞(上海医药工业研究院，上海 2 0 3 ) 0 4 7

摘要：本文综述了近年来上市的全合成 H MG— A还原酶抑制剂药物的合成方法，主要叙述了含醛基、炔基、磺酰基、 Co 膦酸酯基或氨基官能团的侧链的制备以及这些侧链通过Wii— o r O l— oink O e nu n tgH moS ui K cesi lf a o等反应与芳杂环的缩合。 t￣ Y a i 关键词：HMG— A还原酶抑制剂：合成：综述 Co

中图分类号：R 7 . 92 6

文献标识码：A

文章编号：10—2 5 2 0 ) 00 2—6 0 18 5 (0 4 1—6 10

随着首个 HMG. o C A还原酶抑制剂洛伐他汀 ( v sa n ) 1 att,1的上市，他汀类降血脂药

组蛋白甲基转移酶Smyd2通过抑制IL-6和TNF-α的产生负调控

巨噬细胞的活性

背景：巨噬细胞在生长和分化中表达Smyd2。 结果：Smyd2抑制巨噬细胞产生IL-6和TNF-α。 结论：Smyd2负调控M1巨噬细胞的极化。

意义：这个发现对于理解巨噬细胞分化的调控具有重要意义，同时也为自身免疫疾病的治疗提供了新的视角。

SET和MYND结构域2（Smyd2），是组蛋白H3K4和H3K36特定甲基化转移酶，在心脏发育和肿瘤发生中发挥重要作用。然而，Smyd2在免疫和炎症中的作用却鲜少报道。在此研究中，我们发现Smyd2负调控巨噬细胞的激活和M1型巨噬细胞的极化。升高Smyd2的表达，包括IL-6和TNF在内的促炎因子的表达则会受到抑制，同时，主要的MHC-Ⅱ和共刺激分子等重要细胞表面分子的表达也会受到抑制。高表达Smyd-2的巨噬细胞上调TGF-Β的表达并下调IL-6的分泌，从而抑制Th-17细胞分化，促进T细胞的分化。在巨噬细胞中，Smyd2特定地促进Tnf和Il6基因启动子上的H3K36甲基化，抑制这两种因子的转录同时抑制NF-κB和ERK信号通路。我们的数据证实，在炎症中，Smyd-2调控Tnf和Il6启动子上H3K36二甲基化的表观