dgge技术

第32卷第11期2012年6月

DOI：10．5846/stxb201105160635

生态学报ACTAECOLOGICASINICA

Vol．32，No．11Jun．，2012

2012，32（11）：3505-3515．屠腾，李蕾，毛冠男，王莹莹．利用细胞计数手段和DGGE技术分析松花江干流部分地区的细菌种群多样性．生态学报，

TuT，LiL，MaoGN，WangYY．AnalysisofbacterialpersityintheSonghuaRiverbasedonnestedPCRandDGGE．ActaEcologicaSinica，2012，32（11）：3505-3515．

利用细胞计数手段和DGGE技术分析松花江

干流部分地区的细菌种群多样性

屠

腾，李

蕾，毛冠男，王莹莹

*

（南开大学环境科学与工程学院，环境污染过程与基准教育部重点实验室，天津300071）

摘要：松花江是我国东北地区的重要河流之一，为加强对其水环境微生物状况的了解，对松花江干流部分地区的微生物数量和多样性进行了分析。应用传统平板培养法和流式细胞技术测定水样中的细菌数；直接提取样品中的总DNA，以巢式PCR（PolymeraseChainReaction）扩增细菌16SrDNA片

ＰＣＲ－ＤＧＧＥ实验过程中

常见问题的分析与改进

刘丹，凌云

（上海海洋大学水产与生命学院，上海２０１３０６）

■■：对ｐｃＲ．ＤＩＧＧＥ实验过程中常见问题，如条带的有无、多少、拖尾、重影、扭曲、集中等问题进行了归纳总结，并提供了详细的解

决方法，如加强实验前仪器的检查；进行时间进程实验；选择适当的扩增引物、电泳温度和电流等。

关ｔ词：ＰＣＲ－ＤＧＧＥ；实验过程常见问题；分析；改进中圈分类号：Ｑ７８

文献标识码：Ａ

１陀Ｒ—ＤＧＧＥ技术概述

变性梯度凝胶电泳（Ｄｅｎａｔｕｒｅｄ

ＧｒａｄｉｅｎｔＧｅｌＥｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）技术是

由Ｆｉｓｃｈｅｒ和Ｌｅｎｎａｎ于１９７９年最先提出的一种用于检测ＤＮＡ突变的电泳技术，该技术可分辨出长度相同但序列不同的ＤＮＡ片段。Ｍｕｙｚｅｒ等在１９９３年首次将ＤＧＧＥ技术应用于微生物群落结构的研究。现在，这项技术广泛应用于各个领域的微生物分子生态学研究中。特别是细菌和真菌序列多态性的ＤＧＧＥ技术，已经发展成为研究微生物群落结构的主要分子生物学方法之一。

２

ＰＣＲ—ＤＧＧＥ技术在实验过程中常见问晨的分析与改进

ＰＣＲ－ＤＧＧＥ技术在运用过程中，常出现图谱分辨率和结果分析偏差等问题，其中无条带或条带过少、重影或拖尾、扭曲、集中于某

生物技术通报

技术与方法

ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹＢＵＬＬＥＴＩＮ

２００６年第５期

DGGE/TGGE技术在土壤微生物分子生态学研究中的应用＊

周琳１，３

张晓君２

李国勋１

张杰３＊＊

（１河北农业大学植物保护学院，保定０７１０００；２上海交通大学生命科学学院，上海２００２４０；３中国农业科学院植物保护研究

所植物病虫害生物学国家重点实验室，北京１０００９４）

摘要：传统的微生物生态学研究方法只限于环境样品中极少部分（０．１％￣１％）可培养的微生物类群，极大程度

地限制了对土壤微生物群落结构的研究。综述了以１６ＳｒＤＮＡ为主要研究对象的ＤＧＧＥ／ＴＧＧＥ（Ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｇｒａｄｉｅｎｔ

ｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＤＧＧＥ／Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＴＧＧＥ）技术原理，以其为主要手段结合ＰＣＲ扩

增、克隆建库、序列测定以及种系分析对土壤微生物的群落结构和多样性研究的最新动态。ＤＧＧＥ／ＴＧＧＥ技术极大地作物生长跟踪监测等提供了技术支撑，在土壤微生推动了土壤微生物分子生态学的发展，同时也为实际问题的诊断、物分子生态学研究和生产实践中起着越来越重要的作用。

关键词：

变性梯度凝胶电泳

温度梯度凝胶电泳

土壤

DGGE 指纹图谱分析太湖富营养化水体中细菌群落结构的变化 摘 要

太湖作为我国第三大淡水湖泊，其富营养化程度日益加深。太湖水 体水质不断变差，生态系统遭到严重破坏。在自然界中，微生物之间及 其与环境之间有着特定的关系，彼此影响，相互依存。因此，研究环境中的微生物组成对于富营养化湖泊的生物监测和生物修复具有重要意义。淡水生境中存在大量不可培养的细菌，使得传统的培养技术无法对细菌群落结构的多样性进行深入而全面的研究，而分子生物学技术的发展则为此方面研究开辟了新的路径。为了探究严重富营养化水体的细菌群落结构组成，本文运用PCR-DGGE 方法对太湖水体的细菌群落结构进行了分析。

本文采集太湖不同地点(梅梁湖、东太湖和南部沿岸区)、不同月份(06年4 至9 月)的表层水样，提取细菌总DNA，采用引物357F-GC-clamp和518R 进行PCR 扩增。实验结果表明，PCR 扩增产物的特异性会对DGGE 实验产生至关重要的影响，包括选择适合的引物及其浓度、适当的模板浓度，确定初始退火温度和总循环数。变性剂梯度被确定为40%～55%。DGGE 图谱的初步分析结果表明，太湖水样中的菌种丰富度非常高，并且不同取样时间和不同取样地点的DGGE 带谱在条带的

中职教学a# 1 技 术 交 底 记 录 工程名称 绥德师范附属小学改扩建项目 分部工程 地基与基础工程 分项工程名称 土方开挖

交底内容：

一、 施工准备

1、土方开挖前，应根据施工方案的要求，将施工区域内的地下、地上障

碍物清除和处理完毕。

2、建筑物或构筑物的位置或场地的定位控制线、标准水平桩及开槽的灰

线尺寸，必须经过检验合格，并办完预检手续。

3、夜间施工时，应有足够的照明设施，在危险地段应设置明显标志，并

要合理安排开挖顺序，防止错挖或超挖。

二、 操作工艺

1、工艺流程：

确定开挖的顺序和坡度→分段分层平均下挖→修边和清底。

2、采用人工开挖基槽，一般应从两端或顶端开始，将土堆放离基槽的两

侧。

3、土方开挖宜从上到下分层分段依次进行。随时作成一定坡势。

4、开挖基槽，不得挖至设计标高以下，如不能准确地挖至设计基底标高

时，可在设计标高以上暂留一层土不挖，以便在抄平后，由人工挖土。

5、槽底修理铲平后，进行质量检查验收。

6、开挖基槽的土方，在场地有条件堆放时，一定留足回填需用的好土，

多余的土方，应一次运走，避免二次搬运。

三、 质量标准

1、基槽、场地的基土土质必须符合设计要求，并严禁扰动。

2、允许偏差项目

① 表面标高：+0，-50 ；②

核心网技术 —IMS技术

目 录

第1章 IMS概述及基本原理 ........................................................ 5

1.1 1.2

IMS的起源和标准化进程 ...................................................................................................... 5 IMS的含义 .................................................................................................................................. 6

1.2.1 IMS系统范畴........................................................................................................................ 6 1.2.2 IMS与软交换的定位关系..................

ZigBee无线网络技术物联网关键技术

成都无线龙通讯科技有限公司 2010-06

无线通信

无线通信(Wireless Communication)是利 用电磁波信号可以在自由空间中传播的特性进 行信息交换的一种通信方式。近些年信息通信 领域中，发展最快、应用最广的就是无线通信 技术。

我们所知道的通信古代：烽火狼烟、击鼓鸣金、摇旗呐喊、飞鸽传信这些通信方法和手段只能极其有限地解决一定距离的通信问题。 我们的先人常以无法实时互通的浪漫诗句和思念之情来代替

通信。

现代：电话、电视、广播、邮政、因特网、其他方式

有线通信、无线通信

通信的发展简史

第一阶段 语言 第二阶段 文字、邮政 第三阶段 印刷术、出版物 第四阶段 电报、电话、广播

第五阶段 通信与计算机的结合、网络

最早的电通信设想1753年2月17日，《苏格兰人》杂志上发表了一封署名 C.M的

书信。在这封信中，作者提出了用电流进行通信的大胆设想。他建议：把一组金属线从一个地点延伸到另一个地点，每根金属线 与一个字母相对应。在一端发报时，便根据报文内容将一条条金

属线与静电机相连接，使它们依次通过电流。电流通过金属线上的小球便将挂在它下面的写有不同字母或数字的小纸片吸了起来， 从而起到远距离传递信息的作用

核心网技术 —IMS技术

目 录

第1章 IMS概述及基本原理 ........................................................ 5

1.1 1.2

IMS的起源和标准化进程 ...................................................................................................... 5 IMS的含义 .................................................................................................................................. 6

1.2.1 IMS系统范畴........................................................................................................................ 6 1.2.2 IMS与软交换的定位关系..................

防火墙技术技术论文

浅析防火墙技术

【摘要】防火墙技术作为时下比较成熟的一种网络安全技术，其安全性直接关系到用

户的切身利益。随着计算机技术和网络技术的发展，计算机网络给人们带来了很多便利，

于此同时网络安全的问题也伴随着网络技术的发展而日趋严重。使用防火墙能很好的提高

系统的安全性，减少系统受到网络安全方面的威胁。在现在的计算机时代，网络信息的安

全越显得重要。而对防火墙技术的要求也会越来越高。

【关键词】防火墙;网络安全;网络技术

为了解决互联网时代个人网络安全的问题，近年来新兴了防火墙技术。防火墙具有很

强的实用性和针对性，它为个人上网用户提供了完整的网络安全解决方案，可以有效地控

制个人电脑用户信息在互联网上的收发。

用户可以根据自己的需要，通过设定一些参数，从而达到控制本机与互联网之间的信

息交流阻止恶性信息对本机的攻击而且防火墙能够实时记录其它系统试图对本机系统的访问，使计算机在连接到互联网的时候避免受到网络攻击和资料泄漏的安全威胁。

一套完整的防火墙系统通常是由屏蔽路由器和代理服务器组成。屏蔽路由器是一个多

端口的IP路由器，它通过对每一个到来的IP包依据组规则进行检查来判断是否对之进行

转发。屏蔽路由器从包头取得信息。代理服务器是防火墙中的一个服务器进程，

第二节 技术的发明与革新

发明和革新是技术的源泉技术创新是技术发展的灵魂，是技 术发展的核心所在，在人类历史的长河 中，每一项技术的问世都是创新的结果。 技术创新表现为两种形式： 一种是技术发明 一种是技术革新

发明：指的是创造发明自然界原来 没有的事物。 革新：指的是对原有技术加以改造 和提高。 发明和革新是技术的源泉。

一、技术发明

人类历史无数的技术发明，勾绘出了技术创新的轨迹。

集 成 电 路 的 发 明

电子管

晶体管

晶体管半导体收音机

大规模集体电路

电脑主板

大规模集成电路

电子计算机的发明

第一台电子计算机286-586计算机

超薄显示器计算机

第一台电子计算机

技术发明是推动人类社会进步的动力

近代以来几项 重大的发明

集成电路 珍妮纺纱机 蒸汽机 电力和内燃机 电子计算机

二、技术革新

技术革新是技术创新的另一种形式。那么，技 术革新的具体内容是什么呢？

多功能缝纫机的诞生

老式缝纫机

多功能缝纫机

1、1978年模糊的记忆——手摇式电话70年代生的人，记忆中最早的电 话可能还有这种摇把电话的影子。 1978年开始改革开放，那时电话离老 百姓的生活还很远，只有政府机关才 会有。每次打电话都像开手扶拖拉机， 一通体力劳动过后才打到话务员那里， 他