HPLC方法

HPLC法测定水飞蓟素中各主要成分的含量

摘要 目的：建立一种测定水飞蓟素中各主要成分含量的HPLC方法。方法：使用岛津LC-20A型高效液相色谱仪；色谱柱：Betasil C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇－水－冰乙酸（51.5：48.5：0.5）；检测波长：288nm；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃。结果：水飞蓟宾在0.02～0.15mg·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9994),3个浓度的平均回收率分别为98.5％，97.9％，98.5％；RSD分别为0.4％，0.5％，0.5％。结论：本方法操作简便、准确、重复性好，适用于水飞蓟素中各主要成分的定量分析。

关键词：HPLC；水飞蓟素；水飞蓟宾A、B；水飞蓟亭；水飞蓟宁；异水飞蓟宾A、B；

水飞蓟素为菊科植物水飞蓟（紫花）[silybum marianum(Linn) Gaertn]的果实，经提取精制所得的淡黄色或黄色粉末，或结晶性粉末。无味、无臭。在热甲醇中溶解，乙酸乙酯中微溶，不溶于水，主要化学成分为水飞蓟亭（silychristin）、水飞蓟宁(silydianin)、水飞蓟宾(silybin)C25H22O10及其异构物等黄酮类物质。

HPLC法测定水飞蓟素中各主要成分的含量

摘要 目的：建立一种测定水飞蓟素中各主要成分含量的HPLC方法。方法：使用岛津LC-20A型高效液相色谱仪；色谱柱：Betasil C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇－水－冰乙酸（51.5：48.5：0.5）；检测波长：288nm；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃。结果：水飞蓟宾在0.02～0.15mg·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9994),3个浓度的平均回收率分别为98.5％，97.9％，98.5％；RSD分别为0.4％，0.5％，0.5％。结论：本方法操作简便、准确、重复性好，适用于水飞蓟素中各主要成分的定量分析。

关键词：HPLC；水飞蓟素；水飞蓟宾A、B；水飞蓟亭；水飞蓟宁；异水飞蓟宾A、B；

水飞蓟素为菊科植物水飞蓟（紫花）[silybum marianum(Linn) Gaertn]的果实，经提取精制所得的淡黄色或黄色粉末，或结晶性粉末。无味、无臭。在热甲醇中溶解，乙酸乙酯中微溶，不溶于水，主要化学成分为水飞蓟亭（silychristin）、水飞蓟宁(silydianin)、水飞蓟宾(silybin)C25H22O10及其异构物等黄酮类物质。

色 谱

不动的一相，称一为固定相；另一相是携带样品流过固定相的流动体，称为流动相。

不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间 试样从进样开始到柱后出现峰极大点时所经历的时间，称为保留时间

某组份的保留时间扣除死时间后称为该组份的调整保留时间，即 tR′ = tR-tM 死体积可由死时间与流动相体积流速F0（L／min）计算：

VM = tM·F0 指从进样开始到被测组份在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相体积。 保留体积与保留时间t。的关系： VR = tR·F0

某组份的保留体积扣除死体积后，称该组份的调整保留体积，即 VR′ = VR- VM

某组份2的调整保留值与组份1的调整保留值之比，称为相对保留值(必须注意，相对保留值绝对不是两个组份保留时间或保留体积之比.)α总是大于1的 。

W1/2 = 2.354σ W = 4σ

从色谱流出曲线上，可以得到许多重要信息：

（l）根据色谱峰的个数，可以判断样品中所合组 份的最少个数． （2）根据色谱峰的保留值(或位臵)，可以进行定性分析． （3） 根据色谱峰下的面积或峰高，可以进行定量分析．

（4）色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色

×××色谱纯度分析方法验证报告

目录

.............................................................................................................................................................................................. ×××色谱纯度分析方法验证报告批准 ----------------------------------------------------3 1. 验证目的 ---------------------------------------------------------------------------4 2. 色谱纯度分析方法 -------------------------------------------------------------------4 2.1 仪器 ---------------------------------------------

1906年俄国植物化学家茨维特（Tswett）首次提出“色谱法（”Chromotography）和“实验室最常用的P230高效液相色谱仪色谱图”（Chromatogram）的概念。他在论文中写到： “（原文）一植物色素的石油醚溶液从一根主要装有碳酸钙吸附剂的玻璃管上端加入，沿管滤下，后用纯石油醚淋洗，结果按照不同色素的吸附顺序在管内观察到它们相应的色带，就象光谱一样，称之为色谱图。”

1930年以后，相继出现了纸色谱、离子交换色谱和薄层色谱等液相色谱技术。

1952年，英国学者Martin和Synge 基于他们在分配色谱方面的研究工作，提出了关于气－液分配色谱的比较完整的理论和方法，把色谱技术向前推进了一大步，这是气相色谱在此后的十多年间发展十分迅速的原因。

1958年，基于Moore和Stein的工作，离子交换色谱的仪器化导致了氨基酸分析仪的出现，这是近代液相色谱的一个重要尝试，但分离效率尚不理想。 1960年中后期，气相色谱理论和实践的发展，以及机械、光学、电子等技术上的进步，液相色谱又开始活跃。到60年代末期把高压泵和化学键合固定相用于液相色谱就出现了HPLC。

1970年中期以后，微处理机技术用于液相色谱

液相色谱方法的建立

高丽萍 June 4,20111

目 录1.HPLC方法建立过程中的常见问题 方法建立过程中的常见问题 1. 2.HPLC建立的一般程序 建立的一般程序 2. 3.色谱条件的建立 3.色谱条件的建立3.1 色谱柱的选择 A.色谱柱的归类 A.色谱柱的归类 B.C18色谱柱的性能影响因素 B.C18色谱柱的性能影响因素 C.固定相种类的选择 C.固定相种类的选择 3.2 流动相的选择 A.流动相中的酸 A.流动相中的酸 B.流动相PH值与样品保留时间的关系 流动相PH B.流动相PH值与样品保留时间的关系 C.流动相中的缓冲盐 C.流动相中的缓冲盐 D.流动相中的离子对试剂 D.流动相中的离子对试剂 E.流动相中的其他组分 E.流动相中的其他组分

一、HPLC方法建立过程中的常见问题 HPLC方法建立过程中的常见问题对HPLC方法的所要达到的目标不明确 (如可能检测到多少个杂质，检测到什么水平) 对杂质的相关工作太粗 (杂质的ID,响应因子，杂质是否会在体系中进一步降解等) 方法建立时选择的样品不合适 (如选择了精制后的样品) 没有注意样品的处理方法 (如超声/在溶剂中的降解过程/进入色谱柱后发生水解等) 没有考虑色谱柱能否长期满

液相色谱方法的建立

高丽萍 June 4,20111

目 录1.HPLC方法建立过程中的常见问题 方法建立过程中的常见问题 1. 2.HPLC建立的一般程序 建立的一般程序 2. 3.色谱条件的建立 3.色谱条件的建立3.1 色谱柱的选择 A.色谱柱的归类 A.色谱柱的归类 B.C18色谱柱的性能影响因素 B.C18色谱柱的性能影响因素 C.固定相种类的选择 C.固定相种类的选择 3.2 流动相的选择 A.流动相中的酸 A.流动相中的酸 B.流动相PH值与样品保留时间的关系 流动相PH B.流动相PH值与样品保留时间的关系 C.流动相中的缓冲盐 C.流动相中的缓冲盐 D.流动相中的离子对试剂 D.流动相中的离子对试剂 E.流动相中的其他组分 E.流动相中的其他组分

一、HPLC方法建立过程中的常见问题 HPLC方法建立过程中的常见问题对HPLC方法的所要达到的目标不明确 (如可能检测到多少个杂质，检测到什么水平) 对杂质的相关工作太粗 (杂质的ID,响应因子，杂质是否会在体系中进一步降解等) 方法建立时选择的样品不合适 (如选择了精制后的样品) 没有注意样品的处理方法 (如超声/在溶剂中的降解过程/进入色谱柱后发生水解等) 没有考虑色谱柱能否长期满

HPLC基础知识．概论

我国药典收载高效液相色谱法项目和数量比较表： 方法 项目 鉴别 HPLC法 检查 含量测定 数量 1985年版 7 1990年版 9 12 60 1995年版 34 40 117 2000年版 150 160 387 鉴于HPLC应用在药品分析中越来越多，因此每一个药品分析人员应该掌握并应用HPLC。 I．概论 一、液相色谱理论发展简况 色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。 色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。 液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatogra

HPLC操作规程

1.所需的流动相，应该用合适的0.45μm滤膜过滤。

2.样品溶液和标准溶液 ，也应该用合适的0.45μm滤膜过滤，滤膜也分为水相和有机相。

3.开机顺序：开泵，开检测器，进入色谱工作站。

4.泵的启动：用流动相冲洗滤器，再把滤器浸入流动相中，启动泵。打开泵的排放阀，用专用注射器从阀口抽出流动相约20ml，设置高流速（9ml/min)或用冲洗键 PURGE 进行排气，观查出口处流动相呈连续液流后，将流速逐步回零或停止（STOP）冲洗，关闭排放阀。

5 .将流速调节至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示应稳定，用干燥滤纸片的边缘检查柱管各连接处应无渗漏，初始平衡时间，一般约需30分钟。平衡的标志是泵压不波动和基线平直，说明已经平稳。

6. 检测器的开启：开启电源，选择光源（氘或钨）灯，选定检测波长，待预热15分钟方可用于分析测试。

7.压力表无压力显示或压力波动时不能进行分析，应检查泵中气泡是否已排除，各连结处有无漏液，排除故障后方能进行操作。如压力升高，甚至自动停泵，应检查柱端有无污染堵塞，如有堵塞，应该用相应的溶剂清洗。如果清洗不了，可小心卸下开柱的进口螺帽，挖出被污染填冲剂后，补入同类填充剂，仔细安装好，再进行

Agilent Technologies HPLC 日常维护 & 故障诊断

安捷伦科技有限公司 生命科学与化学分析仪器部

1100/1200 HPLC 日常维护 & 故障诊断

Agilent 1100/1200系列 HPLC 工作原理 日常维护 故障诊断 技术支持&服务流程安捷伦科技有限公司 生命科学与化学分析仪器部

1100/1200 HPLC 日常维护 & 故障诊断1.在线脱气机 (G1322A/G1379A)2.四元/二元/单元泵 (G1311A/G1312A/G1310A)

3.手动/自动进样器 (G1313A)4.二极管阵列检测器 (G1315B) 5.可变波长紫外检测(G1314A)

1100/1200 HPLC 日常维护 & 故障诊断

Agilent 1100/1200 在线脱气机日常维护,故障诊断

Agilent 1100/1200 在线脱气机日常维护,故障诊断工作原理

Agilent 1100/1200 在线脱气机日常维护,故障诊 断 何时需要使用Agilent 1100/1200在线脱气机

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标准脱气机(G1322A).标准脱气机每个通道体