植物离体培养

（0721）《园艺植物离体培养》网上作业

名词解释

1． 外植体

用于组织培养（离体培养）的植物材料，如根、茎、叶、花药、胚珠等。 2． 离体培养

指从植物体分离符合需要的组织，器官或细胞（包括去壁后的原生质体、离开花药的花粉细胞等）等作为外植体，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养，以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他生物产品的一种技术。 3． 不定芽

在植物离体培养中，由外植体脱分化形成愈伤组织，继而形成一些分生细胞，分化形成一些芽丛，这些芽即是不定芽。 4． 细胞全能性

一个完整的植物细胞拥有形成一个完整植株所必需的全部遗传信息，植物细胞在适宜条件下具有发育成完整植株的潜在能力。 5． 胞质杂种

所谓胞质杂种（Cybrid）是指一个物种的细胞质（不包括核基因组）基因与另一个物种的细胞质和胞核基因融合为一体的体细胞杂种产物。 6． 继代培养

组织培养中，培养物培养一段时间后，为了防止培养的细胞团老化，或培养基养分利用完而造成营养不良及代谢物过多积累毒害等的影响，要及时将其转接到新鲜培养基中进行培养。 7． 胚状体

所谓胚状体（embryoid）：指在组织和细胞培养中产生的在形态结构上与合子胚相类似的结构。对称体细胞胚（Som

植物组织培养实验论文

学 院： 农学院

班 级： 生技12-3

学 号： 20126268

学生姓名： 康莎莎

指导老师： 倪苏 刘凡

完成日期： 2014年6月8日

菘蓝叶片的离体培养

学院：农学院 班级：生物技术2012-3 姓名：康莎莎 学号：20126268

指导教师：倪苏 刘凡

摘要：本实验以菘蓝幼嫩叶片为外植体，为研究不同外源激素种类、组合及其不同浓度对菘蓝叶片丛生芽诱导的影响，通过对离体消毒的菘蓝叶片采用四种不同激素配比的培养基进行比较培养。结果表明，在MS培养基的基础上添加6-BA+NAA都能成功诱导出丛生芽；但当添加激素为2,4-D+KT的培养基中，2,4-D对菘蓝叶片的愈伤组织的形成具有 一定的抑制作用,并且对于丛生芽的形成也有较强的抑制作用。但是对于其最强抑制诱导丛生芽和愈伤组织的浓度还有待进一步试验。

关键词：菘蓝叶片；离体培养；激素配比；愈伤组织；芽

菘蓝(Isatis indigotica Fort．)为十字花科(Cruciferae)菘蓝属植物。以根入药，药材名板蓝根[1]。原产中国。主产河北省安国，江苏省如皋、南通[2]。其根(板蓝根)、叶(大青叶)均可

植物多倍体培养

4月10日起

摘要：植物多倍体是指每个细胞中的染色体数具有3套或更多套数的植物。随着染色体组倍数的增加，有可能使一些作物的经济性状发生有利的变化。因此，植物多倍体的研究和利用是育种工作中值得重视的途径之一。本次实验就是通过用拟南芥种子作为实验材料，通过培育多倍体拟南芥，来熟悉掌握一般的多倍体诱导的方法。

1. 引言

1916年温克勒（H.Winkler）在番茄与龙葵的嫁接试验中发现，在愈伤组织长成的枝条中有番茄的四倍体。自1937年布莱克斯利（A.F.B.lakeslee）和埃弗里（A.G.Avery）利用秋水仙素诱发曼陀罗四倍体获得成功以后，各国相继展开人工诱发多倍体的试验研究。1947年，木原均、西山市三发表《利用三倍体无子西瓜之研究》，报导了三倍体无子西瓜选育成功。1959年，西贞夫等利用四倍体结球甘蓝和四倍体白菜杂交，成功地育成双二倍体新种——“白蓝”。目前，已有1000多种植的获得了多倍体。中国于20世纪50年代开始多倍体育种的研究。70年代以来，蔬菜多倍体育种取得许多重要进展，已培育出三倍体、四倍体西瓜，四倍体甜瓜以及萝卜、番茄、茄子、芦笋、辣椒和黄瓜等蔬菜多倍体材料。

多倍化后，多个等位基因互作产生了更多的

实验三 胡萝卜离体根的培养（理论）

一、污染

◆组织培养中经常遇到的问题 ◆影响试管苗的质量，关系快繁的成败 1、污染的来源及危害 来源：

◆材料表面消毒不彻底

◆无菌操作中外界环境进入培养容器造成 危害：

◆初代培养失败、增殖速度慢、生长速度慢、玻璃化加剧

◆成活率低、病毒和病菌的扩散、培养物的遗传变异 2、污染的种类及其防止 种类： A、细菌性污染

◆培养基某一位置或培养材料周围出现黏液状物或浑

1

浊的水渍状痕，有时呈发酵状泡沫。接种后1 ~ 2天可见。 ◆材料、培养基灭菌不彻底 ◆操作不当 B、真菌性污染 ◆主要是霉菌污染

◆培养基污染部位发霉，接种3 ~ 5d或更长时间可见 ◆颜色有黝黑、白、黄等 原因：

◆周围环境和空气污染造成 ◆接种过程中，操作不慎造成 防止：

◆选择植物材料：品种、部位、大小、时期 ◆严格消毒灭菌 ◆合理安排繁殖程序 ◆规范操作，控制环境条件 二、外植体褐变

2

1、原因

细胞内的酚类化合物经多酚氧化物氧化成褐色的醌类物质和水，醌类物质与酪氨酸酶发生作用使外植体蛋白聚合，导致外植体生长停顿，直至死亡。 2、影响褐变的因素

实验

实验五 离体蛙心灌注

目的

学习离体蛙心灌流的方法；观察内环境理化因素的相对恒定对维持心脏正常节律性活动的重要作用；了解肾上腺素、乙酰胆碱等激素、神经递质对心脏活动的调节意义。

原理

动物的离体心脏，用理化特性类似于其血浆的代体液灌流时，在一定的时间内，仍然保持有节律的舒张活动。改变灌流液的理化特性，这种节律的舒缩活动也随之发生改变，说明内环境理化因素的相对恒定是维持心脏正常节律活动的必要条件。

器材与药品

蛙心陶罐、蛙心夹、常用蛙手术器械、铁架台、双凹夹、滴管、小烧杯、氯化钠溶液（1%NaCl）、氯化钙溶液（2%Ca Cl）、氯化钾溶液（1%KCl）、肾上腺素（1/10000Ad）、乙酰胆碱（1/100000Ach）、任氏液（Ri/lger’s solution新鲜配制）等。

步骤

（1）取一只蟾蜍或蛙，用探针破坏其脑脊髓后仰卧固定于蛙板上，剪开胸前区皮肤，剪去胸骨，暴露心脏。用眼科镊提起心包膜，再用眼科剪在心脏收缩时将其剪破，使心脏完全暴露出来。

（2）识别心脏的各个部分，包括心房、心室、静脉窦等，并观察心跳。

（3）插蛙心插管，制备离体蛙心。先在左右主动脉下方穿一线，并打一松结留作固定插管用。再在左主动脉下穿一线结扎。用手提起结扎线，用眼科剪在左侧主

教学时数 2学时 实验原理 一、 离体实验

1、所用组织：心脏、膀胱、子宫、气管、肺、肠等均可用于离体实验 2、特点：实验条件易于控制、操作简便、结果准确、节省时间，可进行大量

药物的筛选。 3、要求：离体实验需在一定生理环境下进行，模拟体内环境。 （1）温度：38±0.5℃ （2）通氧气：1－2气泡/s

（3）营养液：含有一定离子和葡萄糖的溶液，不同的组织所选用的营养液不同。

二、离体肠管实验

1、肠管的选择：根据实验目的的不同进行选择 （1）小肠：十二指肠、空肠、回肠

（2）自律性：频率较慢，起博点位于十二指肠，自律性自上而下渐弱。 （3）空肠多做定性实验，回肠多做定量实验 2、肠内受体及作用原理

（1）受体：家兔小肠平滑肌上存在α、β、M受体。

（2）作用：α、β受体兴奋可使小肠平滑肌抑制而舒张；M受体兴奋可使小肠

平滑肌兴奋而收缩。 （3）药品对受体的作用：

1、氯化乙酰胆碱（Ach）：M受体激动剂，乙酰胆碱可兴奋M受体，使小肠收缩

幅度增加，蠕动加强。 2、阿托品(Atro)：M受体阻断药，为竞争性拮抗剂，单独用药对肠管无作用，

可阻断M受体，对抗乙酰胆碱的M样作用，使肠管收缩幅度降低。

3、肾上腺素

机 能 实 验 学 实 验 报 告

课题名称：传出神经药物对离体肠肌的作用 院 （系）：韶关学院医学院

专业班 级： 2011级临床医学本科班 学生姓名：符宏展 学 号：112 指导教师：梁俊辉

二○一三 年 六 月 五 日

机能实验报告

实验目录：

1 实验目的

2 实验装置和器材

3 实验药物

4 实验动物

5 实验原理

6 实验方法

7 实验注意事项

8 实验结果

实验数据

实验记录波型及静态测量数据

9 实验结果讨论

10 实验结论

11 实验思考

实 验 报 告

实验次序： 九 实验项目：传出神经药物对离体肠肌的作用 班级：11临本 姓名：符宏展 学号：112 实验类型（打√）：（基础□ 综合□ 设计□） 一、实验预习

实验预习报告内容原则上应包含实验目的、实验原理、实验主要仪器、试剂及实验步骤。 实验目的： 掌握：1.消化道平滑肌的一般生理特性及某些因素对它的影响。 2.哺乳动物离体器官灌流法。 实验装置和器材：RM6240生物信号采集与处理系统、离体器官恒温灌流仪、

植物组织培养:指在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞或原生质体，培养在人工配制的培养基上，人为控制培养条件，使其生长、分化、增殖，发育成完整植株或生产次生代谢物质的过程和技术。也称为离体培养。

外植体:凡是用于离体培养的细胞、组织或器官统称为外植体。 组织培养六要素: 无菌条件 外植体 人工培养基

人工条件:温度、光强、光照时间

细胞全能性:增殖、分化、发育成完整植株 培养容器:能进行气体交换 培养材料类型:

1. 组织培养:指以分离出植物各部位的组织（如分生组织、形成层、薄壁组织等）或已诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养，是狭义的组织培养。 2. 器官培养:植物的六大器官的无菌培养

3. 胚胎培养:幼胚、成熟胚、胚乳、胚珠、子房的无菌培养

4. 细胞培养:指对单个细胞或较小细胞团的离体无菌培养，获得单细胞无性繁殖系。 5. 原生质体培养:指以除去细胞壁的细胞（原生质体）为外植体的离体无菌培养。 6. 其他:次生代谢物生产、脱毒培养、人工种子等。 按照培养过程分为:初代培养和继代培养 按照培养基类型分为:液体培养和固体培养

按照培养目的分:愈伤组织培养、分化培养和生根培养 主要研究任务:

细胞、组织、器官等在离体培养下的: 营养条件、

设计性试验 不同因素对家兔离体肠肌运动的影响

实验目的：通过建立家兔离体兔肠实验模型，设计实验并观察不同因素对肠平滑肌运动的影响 实验原理：

离体器官生存条件：温度、氧气、营养液

肠道平滑肌受体分布：α、β受体兴奋可使小肠平滑肌抑制而舒张；M受体兴奋可使小肠平滑肌兴奋而收缩。

温度、氧气、营养液条件均可对肠道平滑肌收缩运动有影响。 实验设备：BL-420生物机能试验系统、恒温平滑肌浴槽、张力换能器

实验动物： 家兔

备选药物：台氏液、乙酰胆碱、阿托品、肾上腺素、氯化钡、阿托品、酚妥拉明、新斯的

明、NaOH、HCl、可适当调整

设计性实验预期步骤：

（1）离体实验系统的建立：营养液（台氏液）、温度、空气

（2）离体肠管的制备：取家兔一只，用木槌击其头部致昏，立即剖开腹腔，找到胃，然

后，再找到十二指肠，取出十二指肠，出去小网膜，置于4℃的台氏液培养皿中，用5ml注射器吸取台氏液将肠内容物冲洗干净，然后将回肠剪成数段（约2cm），换以新鲜的台氏液备用。取小段肠管置于盛有台氏液的培养皿中，在其两端对角壁处，分别用缝针穿线并打结。 1.4.3标本固定：将肠管的上端用线连接张力换能器，下端用线固定于固定钩，保存于供氧的37℃左右的台氏液中。

（3）设计

设计性试验 不同因素对家兔离体肠肌运动的影响

实验目的：通过建立家兔离体兔肠实验模型，设计实验并观察不同因素对肠平滑肌运动的影响 实验原理：

离体器官生存条件：温度、氧气、营养液

肠道平滑肌受体分布：α、β受体兴奋可使小肠平滑肌抑制而舒张；M受体兴奋可使小肠平滑肌兴奋而收缩。

温度、氧气、营养液条件均可对肠道平滑肌收缩运动有影响。 实验设备：BL-420生物机能试验系统、恒温平滑肌浴槽、张力换能器

实验动物： 家兔

备选药物：台氏液、乙酰胆碱、阿托品、肾上腺素、氯化钡、阿托品、酚妥拉明、新斯的

明、NaOH、HCl、可适当调整

设计性实验预期步骤：

（1）离体实验系统的建立：营养液（台氏液）、温度、空气

（2）离体肠管的制备：取家兔一只，用木槌击其头部致昏，立即剖开腹腔，找到胃，然

后，再找到十二指肠，取出十二指肠，出去小网膜，置于4℃的台氏液培养皿中，用5ml注射器吸取台氏液将肠内容物冲洗干净，然后将回肠剪成数段（约2cm），换以新鲜的台氏液备用。取小段肠管置于盛有台氏液的培养皿中，在其两端对角壁处，分别用缝针穿线并打结。 1.4.3标本固定：将肠管的上端用线连接张力换能器，下端用线固定于固定钩，保存于供氧的37℃左右的台氏液中。

（3）设计